Способ получения целлобиаз грибов Советский патент 1993 года по МПК C12N9/42 C12N9/42 C12R1/645 

Изобретение относится к биотехнологии, а именно к способам получения целло- биаз из различных грибов.

Целью изобретения является расширение спектра области применения способа и упрощение процесса.

Сущность способа заключается в том, что фильтрат культуральной жидкости грибов-продуцентов или какой-либо другой раствор, содержащий целлюлолитический комплекс грибов, хроматографирунэт на СМ- сефздексе, уравновешенном 0,01-0,02 М ацетатным буфером, рН 3,9-4,1, проводят длюцию, линейно изменяя концентрацию NaCI в буфере, целлобиазы, содержащихся в элюате, разделяют на QAE-сефадексе с элюцией тем же элюентом.

П р и м е р 1. Гриб Asperglllus terreus выращивают, мицелий отфильтровывают и отбрасывают. Белки из фильтрата культуральной жидкости сорбируют на СМ-сефа- дексе С-25, уравновешенном 0.02 М ацетатным буфером, рН 4,1. Элюцию проводят, линейно изменяя концентрацию NaCI в исходном буфере от О до 0,5 М. Затем проводят хроматографию злюата на колонке с QAE-сефадексом А-50, уравновешенном 0,05 М трис-НС1 буфером, рН 8,0. Целлоби- азы элюируЮт, линейно изменяя концентрацию NaCI, в исходном буфере от О до 0,5 М, Получают три целлобиэзы с выходом 2.4; 96,7:1,9% (таблица).

П р и М е р 2. Гриб AsperglHus clavatus вцращивают, мицелий отфильтровывают и очистку целлобидзы проводят, как в примере 1, но белки из фильтрата сорбируют на СМ-сефадексе С-50, уравновешенном 0,0t М ацетатным буфером, рН 4,0, а хроматографию злюата проводят на коллонке с QAE-ce0

5

0

5

0

5

0

фадексом А-25. Выход четырех целлобиаз 6.4,-8.3; 8,7 и 19%.

Пример 3. Фирменный препарат целлюлолитического комплекса гриба Aspergllfus (Serva) растворяют в 0,01 М ацетатном буфере, рН 3,9, и очистку проводят, как описано в примере 1, но использу1от 0,01 М буфер с рН 3,9. Выход двух ферментов (целлобиаз) 55 и 28% (таблица).

Прим е р 4. Гриб Trichoderma virlde выращивают и очистку целлобиаз из фильтрата культуральиой жидкости проводят, как описано в примере 3. Выход трех целлобиаз 15,0; 15,0:30%.

Пример 5, Очистку целлобиаз гриба PentclHIum clavlfortne проводят, как описано в примере 2. Выход двух форм целлобиаз 12,6 и 87.4%.

В разработанном способе подобраны услоаия сорбции на СМ-сефадексе, универсальные для выделения целлобиаз из различных грибов-продуцентов, схема очистки включает две стадии вместо трех.

Разработанный способ позволит без изменения аппаратурного оформления и затрат времени на разработку индивидуальных схем очистки получать множественные формы целлобиаз из различных грибов-продуцентов, необходимые для изучения механизма действия целлюлолитиче- ской полиферментной системы и для обогащения целлюяолитических комплексов, дефицитных по целлобиазе.

Результаты очистки целлобиаз из различных грибов приведены в таблице. (56) Иванова Г.С., Белецкая О.П., Окунев О.Н., Головлев Е,Л., Кулаев И.С. Фракцио- нирование целлюлазного комплекса гриба Asp. terreus. Прикладная биохимия и микробиология. 1983, т..Д9,с.362-368.

Формул а изобретения

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЦЕЛЛОБИАЗ ГРИБОВ; предусматривающий хроматографию на карбоксиметил-сефадексе и при рН 8,0 на диэтип-2-оксипропил-аминоэтил-се-; фадексе с 9лю1(ией градиентом NaCt от О

Составитель О.Скородумова Редактор М.Васильева Техред М.МоргенталКорректор И.Король

Заказ 3332

ТиражПодписное

НПО Поиск Роспатента

113035. Москва. Ж-35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский, комбинат Патент., г. Ужгород, ул.Гагарина. 101

Продолжение таблицы

до 0,5 М 8 исходном буфере, отличающий- ;ся тем, что, с целью расширения спектра

области применения способа и упрощения процесса, хроматографию на.карбоксиме- тил-сефадексе осуществляют в условиях ;0,01 - 0,02 М ацетатного буфера, рН 3,9 4.1.