Модификация реакции агглютинации для ранней диагностики дифтерии Советский патент 1959 года по МПК G01N33/569 

Бактериологическая диагностика днф1ери1 проста и доступна, однако ие редки случаи, когда высеваемость дифтерийных микробов при заведомой дифтерии спускается в отдельных опреде;1ениях до 40-50% ч ниже. Дифтерия часто протекает клинически нетипично: в форлю фолликулярной ангины и т. н., из-за неудовлетворительной бактериологической диагностики в таких случаях часто ставят ошибочный диагноз.

С целью более раннего распознания заболевания бактериологическую диагностику преДоТагают проводить методом серо. ог ческого определения дифтерии, основанном на обычном микроскопическом методе агглютинации в пробирках.

По этой методике 1-2 см крови больного разводят 3%-ным раствором NaCl 1нри рН 7,6 во избежание спонтанной агглютинации. Для no.iyчения разведений сыворотки пользуются методами: капе.чьиым и объемным. Основное разведение сыворотки (1 : 50) при капельном методе готовится смешиванием 1 капли сыворотки с 49 каплями 3%-ного солевого раствора. После этого в ряд агглютииационных иробирок вносят по 10 капель солевого раствора, начиная со второй пробирки. В иерву ю я вторую пробирки вносят 10 капель уже приготовленного основного разведения (1 :50) сыворотки крови больного, встряхивают этн пробирки и из второй пробирки 10 капель (той же иииеткой) переносят в третью пробирку и т. д., а из последней пробирки 10 капель удаляют. После этого в пробирки добавляют 10 капель дифтерийного диагностикума. Пробирки встряхивают и помещают в термостат на 24 часа при 37°. Так как для этого опыта используются равные количества как разведенной сыворотки крови больного, так и бактериальной взвеси, то в итоге разведения сыворотки удваиваются, т. е. в первой пробирке получают разведение 1 : 100, во второй-1 : 200 и т. д.

При объемном методе основное разведение сыворотки 1 : 50 готовится прибавлением к 0,5 мл сыворотки 24,5 мл З /о-ного солевого раствол Ii24587

pa. В ряд пробирок, кроме первой, вносят по 0,5 мл солевого раствора (рН 7,6) в первую и вторую пробирки вносят по 0,5 мл основного разведения (1 : 50) сыворотки крови больного. Пробирки встряхивают и из второй пробирки переносят 0,5 мл разведенной сыворотки в третью пробирку, из третьей в четвертую и т. д. до разведения 1 : 400 и более; из последней 0,5 мл удаляется. Затем в каждую пробирку вносят по 0,5 мл дифтерийного диагностикума, встряхивают и помещают в термостат на 24 часа при 37°.

Можно применять комбинированный способ постановки реакции агглютинации, учитывая трудность взятия крови у детей. Для этого основное разведение сыворотки делается капельным методом, а всю постановку реакции агглютинации производят объемным способом.

При постановке реакции агглютинации необходим контроль сыворотки и диагностикума. Для этого в агглютинационную пробирку наливают 10 капель (или 0,5 мл) 3%-ного солевого раствора и добавляют 10 капель (0,5 мл) дифтерийного диагностикума, с которым производится постановка реакции аггл отинации.

Контроль сыворотки представляет собой основное разведеиие сыворотки в солевом растворе без диагностикума.

Положительными по реакции агглютинации нужно считать те сыворотки, которые дают агглютинацию в разведении 1 : 100 и выше. При агглютинации образуется осадок, который при умеренном взбалтывании дает тонкую зернистую взвесь агглютинированных микробов.

Описанный метод серологического определения дифтерии весьма чувствителен, специфичен и позволяет быстро определять заболевание, так как уже на 2-й день болезни в крови больного обнаруживаются агглютинины в высоких титрах. Серологическое определение являе1х;я весьма Полезным дополнительным методом к бактериологической диагностике дифтерии.

Предмет изобретения

Модификация реакции агглютинации для ранней диагностики дифтерии, отличающаяся тем, что, с целью наиболее раннего выявления (на 2-4 день заболевания) диагностических титров (1 : 100 и выше) этой реакции, ее проводят одновременно в небольших параллельных рядах разведений сыворотки больного, в каждом из которых используют моновалентный диагностикум, приготовленный из точно определенного типа дифтерийной палочки.