«,
Изобретение относится к-зювым про
иэводным нитрозомо.чевнны, которые могут найти применение в биологии и медицине.
Пред.пагаемые нитроксильные производные нитрозомочевины обп;ей формулы ,
R, (СН,)Ж C(0)N(NO)R;j, где ,2,6,б-тетраметил-1 оксил 4- пиперидил, или 4 карбокси-2, 2,6,б-тeтpaмeтнл-l oкcил 4- пипepидил, или 2,2s5a5-TeTpa- . метил-1-сксил-З-пирролидил; Rj, - И или метил; RJ - метил-или 2-хлорэтил5 . п.0-2, . . могут, использоваться как противоопухолевые средства, химические мутагены и как спиновые метки в биологических исследованиях. Наличие парамагнитных свойств у предлагаемых сое диненин позволяет, путем примененпя метода электронного парамагнитного резонанса (ЭПР), упростить контроль
НзС. Шз
НзО.СНз
Rr). ..7.. HoocV
НзС СН-зн с СЩ
Соединения (J-IV) обладают парамагнитным центром N О, который яв-- ляется составной частью заместите- .
.лей . , .
Нитроксильные -производные нитро- .зомочевины (Ir-IV) получают обменной- реакцией из .аминорадикагюв : R,(CH,) NHRJ (Vf1-a-e;. а) R, - E 6) R,R, Rj,, в) R,R, R,H., r) , R,-H., .д) R,R,, R,CHj, e) , R,,Hj ) и сукцинимидных эфироз iN-Rj - N-нитрозокарбаминовой кислоты (VDJ а,б)
Q Ш
-О-С- -Нз
где (Vffl а);
R CHjCH C1 (Vffl6). Строение полученных соединений одйозначно подтверждается элементным анализом и методами ЭПР-, ИК-, УФ- и масс-спектрометрии.
596505 . :
исследуемого процесса. Возможность определения Локализации парамагнитных г:репаратов вплоть до клеточного уровня делает эти соединения незаме5 нимыми при изучении механизма действия веп(еств, обладающих противо-. опухолевой или мутагенной активностью.
Целью изобретения является полуJO чение новых химических соединений, обладающих противоопухолевой и/или мутагенной активностью. Соединения могут быть использованы в качестве спиновь х меток i .
fS Нитроксильные производные нитрозомочевины имеют обпгуго формулу Rj(CH)(0)B(NO)R,
где . R,R, R.-H, ,, (I); ; . 20 R,H, , ,, (LI); R,R4, , ,CHjCl, (III); , R,H, ,CHjCl, (IV)} R,R, , , Rj CH CHjCl, (V); R,-R, , R,H; R,CH,OT,C1, (VI);
NI
N-0
НзС СН
В ИК-спектрах нитрозомочевины (I-1V, VI) -в области 3270-3340 п«1еется по одной узкой полосе средней интенс5шности, отвечающей валентным колебаниям связи N-H. Эта полоса отсутст вует в спектре соединения (V)5 где- R СН . Наличие электроотрицательной нйтрозогруппы на
фрагменте карбамида в спектрах производных (I-VI) отражается в -виде смещения полосы карбонильной группы в сторону высоких (1690-1730 см ), а
полосы амид II (C-N-H)- в сторону низких частот (1520-1540 см по сравнению с частотами соответствующих полос в спектрах алкил гочевины - (см. табл. 2).
Электронны1г спектры спиртовых растворов соединений (I-VI) в.области 200-800 нм содержат полосы поглощения нитрозоуреиДного и нитрок- сильного хромофоров. В видимой облас- . ти спектра первому отвечает полоса с
центром около 400 нн, которая для соединений (I-ffl,V) частично, а для соединений (IV, VI) полностью перек- рьшает более полосу поглощения нитрокёильной группы.
3
в УФ-области спектра имеется одн широкая полоса с максимумом около 235 нм, обусловленная наложением поглощений нитрозоуреидной и нитрок- сильной групп (см. табл. 2).
Парамагнетизм полученньйс соединений подтрерждается методом ЭПР, Спектры ЭПР разбавленных растворов (i-VI) состоят из трех линий равной интенсивности, что типично для нит рокснпьных монорадикалов. Константы сверхтонкого взаимодействия t( ннтро зомопевины (I-VI) (см. табл. 2) характерны для нитроксильньтх радикалов пиперидинового ряда.
П р и мер. Получение предлагаемых соединений: 2,2,6,6-тетраметил- -4- (3-метил-З-нитрозоуреттдо) пиперидин-1-оксила (I), 2,2,6,6-тетраметил -А- 3-нитрозо-3-(,2-хлорэтил)уреидо- метил пиперидин-1-оксила.(П), 2,2,6, б,-тетраметил-4- 2- 3-нитрозо-3-(2- -хлорэтил) уреидо -э.тил -пиперидин-1 - оксила (Ш), А-карбокси-2,2,б5б-тет- раметил-4- 3-нитрозо-3-(2- слорэтил) уредио пиперидин-1-оксила (IV), 2,2, 6,6-тетраметил-А- 1-метил-3-нитрозо- -3-(2-хлорэтил)уреидоЗ пиперидин- - оксила (V) и 2,2,5,5 тетраметил-3- -j 3-нитpoэo-3-(2-xлopэтил)-уреидо пирролидин-1-оксила (VI).
К растнору I1 моль сукцинимидного зфира Н-нитрозо-Ы-метнл или N-иитро зо-Н-(2-хлорзтил)-.карбаминовой кислоты (Villa) или () в 5 мл сухого диметилформамида при охлаждении до О С и перемешивании добавляют по каплям раствор 10 ммоль соответствующег аминорадикала (Vn) в 5 мл диметил- 4юрмамида. Реакционную смесь переме- пгавают 30-120 мин при и вьщивагот на 100 г толченого льда. Образовавшийся осадок отделяют, промывают водой и сушат., Перекристаллизацию (1, n,IV,VI) проводят из растворителей, указанных в табл. 1. Образующиеся в .виде масла вещества (Ш) и (V) зкстра- гируют эфг ром (3x20 мл), экстракт суюат и хроматографируит на колонке с силикагелем,, элюент-СНС1з- ;-ацетон-СН ОН (10:1:1) или (9:1).
Реакцию нитрозокарбамата () с аминокислотой (Vllr) проводят в присутствии 0,5 ммоль триэтиламина.
Выходу, температуры плавления и данные по элементному анализу соединений (I-VI) приведены в табл. 5 , а их спектральные свойства - в табл. 2.
го.
.59Г)
Полученные в параллельных опытах данные биологических испытаний соединений (I-VI) и ближайшего аналога 1-(2-хлорэтил)-3-циклогексил-1-ннт- с розомочевииы (ЦГНМ) приведены в табл. 3. ,
Производные (I-V) и ЦГНМ исследованы в виде эмульсий, в 10%-нрм водном pacTBojse твнна -80, а соединение to (VI) - в виде расд-вбра в 10%-иом водном спирте. .
Токсичность предлагаемых соединений, определяют при однократном введении на белых беспородньтх мышах ,5 по методу Бернса. В качестве характеристики токсичности использована величина дозы, вызьгаающей гибель 50% животных, взятых в опыт (LDjg) . . Результаты испытаний показали, что предлагаеьше нитроксильныё.производные (I-VI) в f,7-5 раза менее токсичны, чем ЦГНМ.
Определение протнвоопзгхолевой активности проведено на опухолях мы- 25 шбй - перевиваемых внутрибрюшинно лейкемиях La L-1210 и Р-388 и перевиваемой в мозг лeйkё. L-1210.
Лейкемию La перевивают, внутрибрюшинно взвесью лейкемических клеток в физиологическом растворе. Ино- кулум содержит 0 лейкемич.еских клеток, спытьтаемые соединения вводят также внутрибрюшиттно, причем первое введение осуществляют через 3 ч после перевивки опухолиj а за- 5 тем - ежедневно .
Лейкемию Р-388 перевивают внут- рибрюшинно (10 клеток в 0,2 нп асцитной жидкости). Соединения (Ш, V,VI) и ЦГНН вводят также внутри- брюшинно, ежедневно, начиная через I сут после перевивки опухоли.
Лейкемию L-12IO перевивают внут-. . рибрюшинно (10. клеток-в 0,2 мл асцитной ж 1-щкости) и в (10 кле- 5 ток в 0,06 мл физиологического
раствора). Испытываемые соединения вводят внутрибрюшинно, ежедневно, -начиная через 1 сут после перевивки опухоли.
0 Схемы лечения для каждого опыта приведены в табл. 3.
В большинстве опытов дозы предлагаемых соединений и доза,. 15 мг/кг пре.ларата сравнения (ЦГЫМ) экви- 5 .токс1Г 1ны и составляют 0,3 от LD. Дпя соединения (VI) применена доза
20 мг/кг, что составляет 0,23 от
V . :
30
5
, Критерием противоопухолевой ак тивности на лейкемиях Р-388 и L-i210 является увеличение «:редней продолжительности жизни (УПЖ)опытных живот ных ito сравнению с контрольными, вы- ражейное в процентах и вычисляемое по формуле ,
УМ -lOOjbilkl. .Ьк.
где LbK среднее время жизни живот. ных в опытной rijynne; L - - среднее время жизни животных в контрольной группе без введения исследуемых соединений.
В случае с лейками Ьа применяют кинетический критерий противоопухолевой активности Зе, которьй харак- ;теризует степень торможения скорости роста опухоли под действием испытуемого соединения:
1-ч,„ / .;
где ЛС,
оп к
и У - удельные скорости рос та опухоли в опыте и
Ннтроксипьныв прО 5зводные (I-VI)
Коясзяочкая хроматографняг на сшшкагелв, 9Л1вант-СНС1з-ацето«-МеОН (0;ltl)
59650
. ;., .контроле соответствен . но.
Как видно из табл. 3, бощ шинство предлагаемых соеди теннй обладает вы- 5 сокой антилейкемияеской активностью.
Так, соединения (П-V) в лейкемии La по кинетическому критерию эс в 3-4 раза эффективнее, чем .ЦГНМ.
10 Соединения (Ш) и (VI) по своему терапевтическому действию на лейкемию Р-388 близки ДГНМ, а соединение (V) на этом штамме по показателю,УПЖ в 1,5 раза эффективнее, ЦГНМ, п, 15 обеспечивает извлечение 50% животных, взятых а опыт. . При перевитой внутрибрююинно и в мозг лейкемии L-I210 эффективность действия соединений (V,VI) при анат 20 логичных схемах лечения сравнима с действием ЦГНМ, причем для (VI) такая эффектитзнссть достигается при . более низкой относительной дозе (0,23 от LDgp, чем для ЦГНМ (0,32 от 25 Щ.
Т в л я а и I.
ИК-, УФ-, ЭПР- и масс-спектры нйтроксильных производных
(I-VI)
п
ш
IV
1,55
257
1,56
319,321
1.55
333,335
1,50
349,351
«
Для соединения П приведен спектр жидкости, для остальных веществ - спектры в вазелиновом масле.,
Растворитель - спирт. Раствор в бензоле, 25 С, концентрация 510 моль/л.
.,Тябл(1иаЗ
- -. -- 1Г вэУпьтат« язучеяня протявоопухолевоР aKTHBirocTU интроксилыпЛ пронэводимх (I-VI).
Томич- яреть, .мг/кг .
KttBOTHue I
,
ЛИНЯЯ
Опуколь
f
v
230 100 В0
.150 . 150
ВП
q,i
MJSA
с„в
.ОВД,
U
U Р-338
U .
La Р-Э88
в/ в/б в/б в/б в/б в/б в/б
9,0 6,0 6.0
10,2 6,0 6,0
10,2
сяектр,
ах, мТ
()
Гй/ё й )
1-5 0-4 0-4 1-5 0-4 0-4 t-5
6 7 1 6 6 6 6
С О
о о о о
3
0,7 0,6
о,я
0,7
15
fSO
310
Соединепия (I-V) и ЦГНМ иепытываяя в виде эмульсин в ОХ.-но:м водном растворе тпнма-ЯО, а соединение (VI) - я виде растворе в 10Х-ном водном спирте. Принятые я табяице сокращения в/в - внутри(5рхя11ннио, в/м - в мозг..
.Редактор В, Иванова
Составитель А. Андриевский
Техред Н.БонкалоКорректор С.Черни
Заказ 2032Тираж 343 Подписное
ВНИИПИ Государственного комитета СССР.
по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж-35, Раушская иаб., д. 4/5
Производственно-полиграфичаское предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4
Нитроксильные производные нитро- зомочевины общей формулы : R,(CHj)NR,C(0)N(NO)R, где ;- R,R, R,H, ,, n О (I);, R R, , ,CH,C1, (II); R,R4, R,H, R3 CHjCHjCl, (III); R,R5, R,H, ,CHiCl, (IV); R -R, R,CH3, ,Cl, (V); R,Rg, , ,CH,C1, (VI); НзССНз , Rr-V/N-O, R5 „Хтн WOOC Нзс CHj проявляющие противоопухолевую и муРНз НзС СНз N-0 )-0 СНз НзС СНз тагенную активность. § (Л С 1C ел СО 05 ел
Johnston Т | |||
Р., Mccaleb G, S., Opliger Р | |||
S., Montgomery J | |||
А | |||
J | |||
Med | |||
Chem., 1966, 9(6), 892-911 | |||
Аппарат для очищения воды при помощи химических реактивов | 1917 |
|
SU2A1 |
кл. |
Авторы
Даты
1990-06-23—Публикация
1984-12-27—Подача