СТЕРОИДНЫЕ ЭФИРЫ N-ДИ(2-ХЛОР-ЭТИЛ)-АМИНОФЕНИЛ-N-АЦЕТИЛАЛАНИНА, ОБЛАДАЮЩИЕ ПРОТИВООПУХОЛЕВОЙ, АНДРОГЕННОЙ И АНАБОЛИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТЬЮ Советский патент 1995 года по МПК C07J1/00 A61K31/565 

Изобретение относится к новым химическим соединениям сложным эфирам 17 β-[n-ди-(2-хлорэтил)аминофенил-N-аце- тилаланил]-5α -андростан-17β -ол-3-она (1) и 17 β-[n-ди(2-хлорэтил) аминофенил-N-ацетилаланил]-2α -метил-5α -андростан-17β -ол-3-она (II) общей формулы
где I.

R ₁ Н,
R ₂ -OCOCHCH₂C₆H₄N(CH₂CH₂Cl)₂
NHCOCH₃
II. R ₁ αCH₃;
R ₂ -OCOCHCH₂C₆H₅N(CH₂CH₂Cl)₂
NHCOCH₃ обладающих противоопухолевым и гормональным действием.

Цель изобретения изыскание новых химических соединений в ряду производных алкилирующих агентов и гормонов андростанового ряда, обладающих противоопухолевой и гормональной активностью.

П р и м е р 1. Синтез 17β-[n-ди-(2-хлорэтил)аминофенил-N- ацетилаланил] -5α -андростан-17β -ол-3-она (I).

Раствор 1,6 г (0,0046 м-моль N-ацетилсарколизина в 40 мл хлористого метилена и 0,65 мл (0,47 г, 0,004 ммоль) триэтиламина охлаждают до -10^o, прибавляют "хлорирующий комплекс", полученный предварительно из 0,56 мл (0,52 г) диметилформамида, 1,5 РСl₅ в 20 мл четыреххлористого углерода и выдерживают 2 ч. Далее в реакционную колбу прибавляют 1,38 г (0,0044 м-моль) дигидро-тестостерона и 0,65 мл (0,004 м-моль) триэтиламина, температуру повышают до 40^oC и реакционную массу выдерживают 9 ч при 40^oC. После отгонки растворителя остаток растворяют в бензоле (50 мл), промывают последовательно водой, водным раствором KHCO₃ и снова водой. Бензол частично упаривают. Продукт этерификации хроматографируют на колонке с силикагелем (Сhemapol Л 40/100), используя бензол/этилацетат (3: 2) в качестве элюента. Собирают фракцию, содержащую 17β-[n-ди(2-хлорэтил)аминофенил-N- ацетилаланил]-5α -андростан-17β -ол-3-она с R_f около 0,26 в системе бензол-этилацетат 1:1 (Silufol UV 254). Получают 0,43 г эфира 1/14,5% в расчете на исходный гормон) в виде аморфного порошка легко растворимого в диметилсульфоксиде, спирте, мало растворимого в эфире, нерастворимого в воде и водном спирте.

Найдено, C 65,87; Н 7,72; Cl 11,11.

С₃₄Н₄₈Сl₂N₂O₄
Вычислено, C 65,94; Н 7,75;
Сl 11,47. ИК-спектр: V_NH 3388, V_C=O 1740, 1714, 1182; V_C-Cl 731, 655 см^-1.

П р и м е р 2. Синтез 17β -[n-ди(2-хлорэтил)аминофенил-N-ацетилаланил] -2α -метил-5α -андростан-17β -ол-3-она (II).

Получение этого соединения ведут аналогично синтезу соединения, описанного в примере 1.

К раствору хлорангидрида N-ацетилсарколизина в 40 мл хлористого метилена, полученному из 1,6 г N-ацетилсарколизина аналогично синтезу, описанному в примере 1, прибавляют 1,4 г (0,0046 м-моль) 2α -метилдигидротестостерона и 0,65 мл (0,004 м-моль) триэтиламина и выдерживают при температуре 40^oC 9 ч. После обработки реакционной массы водой и водным раствором KHCO₃ продукт реакции очищают методом колоночной хроматографии на силикагеле (Сhemapol Л 40/100). Элюирование ведут смесью бензол/этилацетат 6:1, собирают фракцию 17β -[n-ди(2-хлорэтил)аминофенил-N-ацетилаланил]-2α метил-5α -андростан-17β -ол-3-она с Rf около 0,5 в системе бензол/этилацетат 1:1. Получают 0,69 г эфира 11/30% в расчете на исходный гормон в виде аморфного порошка белого цвета с желтоватым оттенком. Вещество не растворяется в воде, мало растворимо в спирте, растворимо в диметилсульфоксиде, этилацетате, хлороформе.

Найдено, C 66,41; Н 7,96; Сl 10,91
С ₃₅Н₅₀Сl₂N₂O₄
Вычислено, C 66,34; H 7,96; Сl 11,2
ИК-спектр, V_NH 33,89; V_C=0 1744, 1716, 1180; V_C-Cl 730, 655 cм^-1.

Вещества I II представляют собой аморфные порошки, белые с желтоватым оттенком. Вещества практически нерастворимы в воде, мало растворимы в эфире, растворимы в хлороформе, бензоле, этилацетате (ГФХ, 756). При длительном хранении на свету приобретают желтую окраску.

Противоопухолевая и гормональная активность.

При изучении противоопухолевых свойств используют перевиваемые солидные опухоли и лейкозы мышей: лимфобластный лейкоз I 1210, аденокарциному молочной железы Са-755, карциному легкого Льюис 11С, а также возникшие в гормонозависимых тканях опухоль яичника ОЯМ и рак шейки матки РШМ-5.

Исследования проводят на мышах линий С₅₇Bl/6, СВА и гибридах первого поколения ВDF₁. Терапевтический эффект оценивают по торможению роста опухоли (ТРО) и/или увеличению продолжительности жизни (УПЖ). За минимальный критерий эффективности принимают 25% УПЖ и/или 50% ТРО. Гормональную активность веществ определяют с помощью известных биологических тестов на кастрированных беспородных крысятах-самцах. Показатели выражают в виде индексов, представляющих собой соотношение средней относительной массы простаты (андрогенная активность) или m. levator ani. (анаболическая активность) в опытной группе по отношению к контрольной, которую принимают за 1.

Противоопухолевые и гормональные свойства заявляемых веществ изучают в сравнении друг с другом, с их прототипом дистроном, структурным аналогом-II-дезокси-17α-окси-21-[-n-ди(2-хлорэтил)аминофенилацетат) кортикостерона (кортифеном), гормональными аналогами -дигидротестостероном и 2α -метилдигидротестостероном, а также с алкилирующим аналогом-n-ди(2-хлорэтил)амино- фенил-N-аланином, хлоргидратом (сарколизином). Заявляемые соединения вводят животным подкожно в масле в дозах 10-300 мг/кг массы тела в течение 5-10 дн. Дистрон кортиофен и гормоны вводят аналогичным образом в дозах 10-50 мг/кг в день соответственно. Сарколизин вводят внутримышечно в растворе 0,9% NaCl.

В табл.1 представлены данные по противоопухолевой активности соединений I-II. Из табл.1 видно, что соединения I и II проявляют высокое противоопухолевое действие, которое выражается в значительном торможении роста опухолей (на 77-99% ) и увеличении продолжительности жизни леченных животных со всеми видами опухолей на 37-122% Из табл.1 видно также, что соединения I-II отличаются от дистрона по силе и спектру противоопухолевого действия: на одних опухолях они активнее дистрона (1 1210, РШМ-5), на других (Са-755) проявляют активность, равную дистрону. Они мало активны на опухоли 11С и высоко активны на ОЯМ, на рост которой не влияет дистрон.

Преимуществом целевых соединений является широта действующих доз. Диапазон терапевтических доз зависит от вида опухоли и линии животных. На опухоли Са-755 терапевтические дозы лежат в пределах 10-100 мг/кг массы тела при ежедневных введениях в течение 5 дн (см.табл.1). Для дистрона оптимальные терапевтические дозы 20-25 мг/кг при такой же схеме введения.

Преимущества целевых соединений в отношении силы, спектра противоопухолевого действия в широте терапевтических доз видны также при сравнении со структурным аналогом кортифеном, который мало активен на лейкозе 1-1210 и имеет меньший диапазон действующих терапевтических доз на штамме Са-755 10-20 мг/кг, на штамме 11С 10-15 мг/кг при пятидневном курсе введения (см. табл.1).

Изучение общетоксического действия целевых соединений показало, что их максимально переносимые дозы 100 мг/кг. ЛД₅₀ 150 мг/кг при пятидневном режиме применения. Сравнение абсолютных величин терапевтических доз заявляемых соединений с их алкилирующим аналогом сарколизином (его терапевтическая доза при таком же режиме применения составляет 3 мг/кг) показывает, что предлагаемые соединения характеризуются относительно низкой токсичностью.

На относительную низкую токсичность заявляемых соединений указывает и сравнение их токсических и терапевтических доз со структурным аналогом кортифеном, для которого дозы 30 и 50 мг/кг при пятидневном введении на штаммах саркомы 37 и Са-755 уже ЛД_60-80, а оптимальными при пятидневном введении являются терапевтические дозы в пределах всего 10-25 мг/кг.

Из табл.2 видно, что заявляемые соединения в дозах, вызывающих противоопухолевый эффект, проявляют специфическую гормональную активность. Они мало отличаются между собой по анаболическому действию и проявляют себя более слабыми анаболиками, чем дистрон. Андрогенное же действие у соединения I сильнее, чем у соединения II. При этом сила и длительность андрогенного действия соединения I пропорциональна дозе. В то же время андрогенное действие у соединения I слабее, чем у дистрона.

Стероидные эфиры n-ди(2-хлор-этил)-аминофенил-N-ацетилаланина общей формулы

где R₁ H, α-CH₃

обладающие противоопухолевой, андрогенной и анаболической активностью.