Способ диагностики экзогенного аллергического альвеолита Советский патент 1986 года по МПК G01N33/48 

to 1C ю

со Изобретение относится к медицине, а именно к клинической иммунологии, и может быть использовано при диагностике болезни птицеводов. Цель изобретения повьцпение точности диагностики, Пример. Больная К-а, 46 лет-, работает в течение 30 лет птичницей, имеет постоянный и массивный контакт с курами, В течение последних 3 лет отмечает резкую слабость, вечерние подъемы температуры до 39 , выраженную одышку, В последние несколько лет до 3 раз в год страдает пневмониями с выраженным геморрагическим компонентом. При исследовании сыворотки крови контриммуноэлектрофорезом (известный способ) специфические антитела выявлены не были. Было проведено также иммунодиагностическое исследование сыворотки этой больной предлагаемым способом. Куринная сыворотка (тестантиген) , предварительно диализованная в течение 24 ч физиологическим раствором хлористого натрия и хранящаяся до дальнейшего ее использования в замороженном состоянии, была разморожена и разведена физиологическим раствором в соотношении 1:4 (к 0,25 мл куриной сыворотки добавили 0,75 мл О,9%-ного физиологическо го раствора). Подготовленную таким образом куриную сыворотку затем агрегировали добавлением 0,05 мл 2,5%-ного глютаральдегида в течение 1 ч при 37°С, после чего добавили I мл агрегированной сыворотки к осад ку из 1 мл-отмытых эритроцитов (пред варительно приготовленных обработко глютаральдегидом и храняющихся в хо лодильнике), инкубировали (сенсибилизировали) при в водяной бане в течение 1,5 ч. Затем отмыли приго товленный эритроцитарный диагностикум 4 раза физиологическим растворо от несвязавшегося белка, приготовили его 0,8%-ную рабочую взвесь. Пос ле адсорбции исследуемой сыворотки больной К. эритроцитами человека дл удаления гетерогемаглютининов готовили последовательные разведения это сыворотки в диапазоне 1:16-1:2048 в объеме 0,05 мл и добавляли к каждом разведению 0,25 мл эритроцитарного диагностикума. Выраженная агглютина ция эритроцитов наблюдалась до разведения исследуемой сыворотки (тит19 ра) 1:2048. Контроли сыворотки и антигена были oтpицaтeль &I, контроль реакции положителен. При клиническом дообследовании, проведенном в стационаре ЦНИИТ МЗ СССР в 1982 г,, на основании клиникорентгенологических данных, функциотелей внутрилегочной биопсии, факта обнаружения специфических антител был установлен диагноз: экзогенный аллергический альвеолит, вызванный контактом с курами. По рекомендации ЦНИИТ МЗ СССР администрацией птицефабрики больная была переведена на работу в теплицы птицефабрики, контакт с курами был практически исключен. Проведенное через 1,5 года контрольное обследование выявило стойкую ремиссию заболевания, подтвержденную положительной динамикой рентгенологических и функциональных показателей, Повторное иммунологическое исследование выявило антитела предлагаемым способом в меньшем, но, тем не менее, в высоком титре - 1:512, Результаты согласно известному способу бьши по-прежнему отрицательными. Пример 2, Больная Ф, 56 лет, сельская жительница. Постоянно в течение многих лет в домашнем хозяйстве держит 200 кур, С ноября 1981 года беспокоит нарастающая одышка, кашель со слизисто-гнойной мокротой. Лечение по месту жительства по поводу острых респираторных заболеваний, хронической пневмонии было неэффективным. Рентгенологически в октябре 1982 г выявлена мелкоочаговая диссеминация на фоне выраженных интерстициальных изменений. При функциональном исследовании легких обнаружены рестриктивные и обструктивные нарушения вентиляции. При уточнении анамнеза выявлен контакт с курами. Заподозрен экзогенный аллергический альвеолит. Для уточнения диагноза больная поступила в ЦНИИТ МЗ СССР в мае 1983 г. Известным способом антитела к куриной сьгооротке обнаружены не были, . В.предлагаемом способе, техническое воспроизведение которого осзпцествлялось по примеру 1, были получены положительные результаты, титр антител к куриной сыворотке (антигену) был 3, равен разведению исследуемой сыворотки 1:5I2. Учитьгоая -данные анамнеза, а также результаты комплексного стационарного обследования, в этом случае также был установлен диагноз экзоген ного аллергического альвеолита, протекающего по типу фиброзирующего аль веолита. При этом только иммунологическое исследование позволило определить этиологический фактор заболевания. Результаты рентгенологического исследования липть уточнило характер и стадию заболевания. Вместе с тем, поздняя верификация диагноза при выраженных фиброзных изменениях и значительных нарушениях функции легких потребовало проведения гормональной терапии в течение 1,5 мес. Состояние больной улучшилось, наблюдалась также стабилизация рентгенологической картины. Больной было рекомендовано исключить контакт с курами, продолжить гормональную терапию с постепенным снижением дозы преднизолона, она находится на диспансерном наблюдении в диагностическом отделении ЦНИИТ МЗ СССР. Приведённые примеры свидетельст1вуют о диагностической эффективности предлагаемого способа в тех случаях, когда с помощью именно этого способа бьт идентифицирован этиологический фактор заболевания, в то время как результаты известного способа были отрицательными. Наиболее прогностически ценной яв ляется диагностика заболевания на его ранних стадиях. Это возможно осу ществлять лишь с помощью способов, о личающихся высокой чувствительностью в частности, используя предлагаемый способ при массовых обследованиях больших контингентов, имеющих профес сионально обусловленный контакт с этиологическими факторами экзогенных аллергических альвеолитов (работников птицефабрик). Возможность проведения таких массовых иммунологических обследований предлагаемым способом обеспечивается также, помимо высокой чувствительности, значит ельной его производительностью (80-100 анализов исследуемых сьтороток за рабочий день) и минимальным количеством . исследуемой сыворотки (0,1-0,2 мл) 49 для анализа, что позволяет исключить внутривенное взятие крови. Устранение или даже хронические контакты с этиологическим фактором на ранних стадиях заболевания экзогенным аллергическим альвеолитом, приводит к стойкой клинической ремиссии заболевания, регрессированию рентгенофункциональных изменений легочных нарушений без медикаментозного лечения (пример 1). Однако и на поздних стадиях заболевания при выраженных фибриозных изменениях и значительном ограничении легочной функции идентификация этиологического фактора также необходима, так как устранение его в сочетании с медикаментозными мероприятиями позволяет достигнуть определенной стабилизации легочного процесса (пример 2) . Предлагаемый способ может быть также использован для длительного динамического наблюдения за больными экзогенным аллергическим альвеолитом, так как он остается положительным и при значительном ограничении контакта с этиологическим фактором заболевания и свидетельствует о сохранении специфической сенсибилизации (пример 1). Проведение специфического иммунологического контроля в таких случаях необходимо для.предупреждения рацидивов заболевания. Быпо проведено клинико-иммунологическое обследование работников птицефабрики (308 человек), у 34 из них был установлен диагноз экзогенного аллергического альвеолита. Предлагаемый способ дал положительные результ;аты у 29 больных (из 34) с верифицированным диагнозом, причем антитела были выявлены в высоких титрах исследуемьк сывороток (1:256-1:8192). Известньм способом (контриммуноэлектрофорезом) антител бьти обнаружены лишь у 15 больных и даже при положительных результатах титры антител были низкими - не более 1:4-1:8. Формула изобретения Способ диагностики экзогенного алергического альвеолита путем выявения в исследуемых сыворотках антител к сыворотке кур, отличаюийся тем,-ЧТО, с целью повыения точности диагностики, антитела ыявляют путем разведения исследуемых

S17.72249«

сывороток 1:256 и иьппе и добавления физиологическом растворе сывороткой к ним сенсибилизированных при 37- кур, разведенной в соотношении 1:253 С эритроцитов, при этом эритроци- 1:5 и агрегированной при помощи глуты сенсибилизируют диализованной в таральдегида.

Изобретение относится к медицине, может быть применено в клинической иммунологии при диагностике болезни птицеводов. Цель изобретения повьппение точности диагностики. Для этого проводят иммунодиагностическое обследование сыворотки крови пациентов. Куриную сыворотку (тест-антиген) диализуют сутки физиологическим раствором NaCl, разводят ее этим раствором в соотношении 1:2-1:5. Агрегируют сыворотку добавлением 2,5% глютаральдегида при t , затем добавляют агрегированную сыворотку к осадку отмытых эритроцитов, инкубируют (сенсибилизируют) при t 37-53°С в течение 1,4 ч. Отмывают приготовленный эритроцитарный диагностикум 4 раза физиологическим раствором от несвязавюегося белка. Готовят его 0,8%-ную рабочую взвесь. Готовят последовас тельные разведения сыворотки. Титр антител к куриной сыворотке (антиге(Л ну) равен разведению исследуемой сыворотки 1:256 и выше.