Способ определения продигиозана Советский патент 1986 года по МПК A61K31/715 

ГчЭ

00 t Изобретение относится к фармации а именно к способам количественного определения бактериальных липополисахаридов, применяемых в медицине в качестве лекарственных препаратов. Цель изобретения - увеличение чувствительности способа путем пред варительной обработки раствора прод гиозана триптофаном в присутствии концентрированной серной кислоты при нагревании. Способ осуществляется следующим образом. Определение содержания продигиоз на начинают с пригсговления 0,03%-но го водного раствора DL-триптофана. С этой целью 0,015 г порошка DL-трип тофана (точная навеска) вводят в мер ную колбу вместимостью 50 мп, растворяют в 40 мл нагретой до ди тиллированной воде, после охлалдения раствора до комнатной температуры его объем доводят тем же растворителем до метки. Затем приготавливают стандартный и исследуемый растворы. ПриготоВление стандартного раствора: 0,01 г порошка продигиозана (точная навеска помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл, растворяют в 40 мл наг ретого до 90°С 0,9%-ного раствора натрия хлорида, после охлаждения рас твора до комнатной температуры его обьем доводят тем же растворителем до метки. Далее в пробирку вносят 0,2 мл 0,03%-ного раствора DL-триптофана, 1,3 мл приготовленного раствора и 5 млконцентрированной серной кисшоты. Приготовление испытуемого раствора: в пробирку вводят 0,2 мл 0,03%-ного раствора DL-триптофана, I,3 мл испытуемого 0,02%-ного раствора продигиозана и 5 мл концентрированной серной кислоты. Все растворы готовят в пяти повторностях Приготовленные растворы встряхивают нагревают на кипящей водяной бане в течение не менее 5 мин, по охлаяодении растворов до комнатной температуры проводят количественное определение продигиозана на спектрофотомет ре СФ-16 при А „ 320 нм в кюветах с толщиной рабочего слоя 1 см. Раствором сравнения служит раствор, содержащий 0,2 мл 0,03%-ного раствора DL-трйптофана, 1,3 мп 0,9%-ного раствора натрия хлорида и 5 мл концентриоованной серной кислоты. in2 Содержание препарата рассчитывают по формуле -содержание препарата, г/мл; -оптическая плотность исследуемого раствора; -оптическая плотность стандартного раствора; -содержание продигиозана в I мл стандартного раствора;5 - разведение исследуемого раствора. Содержание продигиозана в исследуемых 0,02%-ньгх растворах составляет 1,899. 2.075.10 г/мл, что соответствует 0,019-0,021%. Результаты количественного спектрофотометрического определения продигиозана в 0,02%-ных растворах: Получено, г/мл Взято, г/мл 2,075.10 1,975. 1,901.10 1,899. 1,955.10 Предлагаемый способ характеризуется большей (в 5 раз) чувствительностью в сравнении с известным, так как количественное определение продигиозана проводится по компоненту молекулы продигиозана - комплексу полисахарида и липида А, ответственному за терапевтический эффект препарата, в отличие отизвестного способа, согласно которому определение проводят по нуклеиновой кислоте, не связанной с лечебным действием. Способ позволяет сократить расход препарата, необходимого для проведения анализа, в 5 раз. Построение калибровочной кривой. В ряд пробирок добавляют по 0,2 мл 0,03%-ного раствора DL-триптофана, по 0,1; 0,2; 0,3; 0,4; 0,5 мл приготовленного раствора продигиозана, соответственно по 1,2; 1,1; 1,0; 0,9; 0,8 мл 0,9%-ного раствора натрия хлорида. Во все пробирки добавляют по 5 мл концентрированной серной кислоты. Все пробирки встряхивают и нагревают на кипящей водяной бане в течение не менее 5 мин. После охлаждения оастворов до комнатной температуры

312731

проводят измерение величины оптической плотности на спектрофотометре СФ-16 при Л „. 320 нм в кюветах с длиной оптического пути 1 см.

Затем строят калибровочную кривую, 5 где по оси абсцисс откладьгаают концентрацию продигиозана С в мкг/мл, а по оси ординат - оптическую плотность в единицах оптической плотности.10

Как видно из фиг.1, прямо пропорциональная зависимость между концентрацией растворов и величиной оптаческой плотности наблюдается в пределах концентраций 0-50 мкг/мл. 15

Те же значения величины оптической плотности при регистрации концентрации продигиозана по известному

104

способу достигаются в пять раз большими концентрациями препарата (фиг.2)

Формула изобретения

Способ определения продигиозана, включающий проведение спектрофотометрического исследования раствора продигиозана с последующим определением его количества по калибровочной кривой, отличающийся тем, что, с целью увеличения чувствительности способа раствор продигиозана предварительно обрабатывают раствором DL-триптофана в присутствии концентрированной серной кислоты при нагревании в течение не менее 5 мин, а оптическую плотность измеряют при

макс 320 нм.

Изобретение относится к медицине. Цель изобретения - увеличение чувствительности способа. Готовят стандартный раствор. 0,01 г порошка продигиозана помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл, растворяют в 40 мл нагретого до 90°С 0,9%-ного раствора хлорида натрия. После охлаждения раствора его объем доводят тем же растворителем до метки. В пробирку вносят 0,2 мл 0,03%-ного раствора DL-триптофана, 1,3 мл приготовленного раствора и 5 мл концентрированной серной кислоты. Затем готовят исследуемый раствор. В пробирку вносят 0,03% DL-триптофана, 1,3 мл 0,02%-ного раствора продигиозана и 5 мл концентрированной серной кислоты. Приготовленные растворы встряхивают, нагс ревают в течение 5 мин. После охлаждения растворов проводят количествен(Л ное определение продигиозана на спектрофотометре при AMQKC - 320 нм. 2 ил.

Ю 30 50

Cf МК8/МЛ

(Риг. /

1- г

|«

i

|4

0,1

100 200 С, мкг/мл 9U8.2