Способ получения растений злаковых культур из пыльцы Советский патент 1986 года по МПК A01H3/00 

Изобретением относится к сельском хозяйству, в частности к селекции растений, и может быть использовано для ускоренного создания (за 1 год) константных селекционных форм - родоначальников новых сортов или ценного материала для гибридизации, а также в экспериментальной биологии, исследованиях по генетике, физиологии, биохимии, эмбриологии и морфогенеза растений. Цель изобретения - повышение выхода растений. Пример осуществления. Получение растений из пыльцы пшеницы ли нии АД-147. Донорные растения пшеницы линии АД-147 выращивали в поле. Колосья срезали, когда влагалище предпоследнего листа находилось на уровне центральной части колоса. Срезанные побеги с колосьями ставили в водопроводную воду и помещали на 7-10 с в холодильную камеру с температурой 1-3°С. После предобработки пониженной температурой колосья вместе с листовой оберткой стерилизовапи в течение 5-7 сут водным раствором диацида (0,33 г этанолмеркулхлорида 0,60 г цетилпиридинийхлорида, 0,1 м Твин-20 на 1 л воды), после чего промывали тремя порциями стерильной воды. Затем колосья освобождали от листовых оберток. Для культивирования использовали пыльники двух нижних цветков 4-14-х колосков средней части колоса. В пробирки диаметром Выход растений из пыльцы пшен 092 16 мм, содержащие по 10 мл питательной среды для культивирования пыльн ков (среда № 1), помещали по 15 пыльников. Среда № 2 содержала-, мг/л: макрои микросоли по Гамборгу В, тиамин 0,5; пиридоксин 0,5; мезоинозит 100 никотиновая кислота 1; аскорбиновая кислота 1; сахароза 110000; агар 7000; 2,4-дихлорфеноксиуксусная кислота (2,4-Д) 0,25. Перед автоклавированием рН среды доводили до 5,86,0. Пробирки с пьшьниками инкубировали в темноте при 27+1С и относительно влажности 70-80%. Через 3-4 недели культивирования из полости пыльника появлялись эмбриоиды, возникающие из пыльцы. По мере появления, эмбриоиды отделяли от пыпьников и переносили на среду для прорастания эмбриоидов (среда № 2). Среда № 2 отличалась от среды № 1 вдвое меньшей концентрацией F-хеллата, меньшей концентрацией сахарозы (10000 мг/л); 2,4-Д заменяли 3-индолилуксусной кислотой в концентрации 0,2 мг/л. На среде № 2 эмбриоиды икубировали при 16-часовом фотопериоде (освещенность 2000-5000 лк), температуре 27+1°С и относительной влажности 70-80%. Культивирование осуществляли в течение 4 недель до получения (из некоторой части эмбриоидов) первой группы растений. Результаты представлены в табл. 1. Таблица 1 нии АД-147

Изобретение относится к сельскому хозяйству, в частности к селекции растений, и может быть использовано для ускоренного создания (за 1 год) константных селекционных форм. Цель изобретения - повьпиение выхода растений. Для получения растений из пыльцы пшеницы использовали пьшьники двух нижних цветков 4-14-х колосков средней части колоса. Пыльники культивировали на питательной среде, стимулирующей эмбриогенез. Через 34 недели из полости пьшьника появились эмбриоиды (Э). Э отделяли от пьшьников и переносили на среду для прорастания Э. На этой среде Э культивировали в течение 4 недель до получения (из некоторой части Э) первой группы растений. После чего жизнеспособные, но непроросшие Э бьши пересажены на свежую питательную среду и подвергнуты в течение 5-7 а 9 дней охлаждению при , рля выведения Э из состояния покоя. После ох(Л лаждения Э опять культивировали в течение 4-х нецель. Из 141 Э после периода культивирования и трех последующих охлаждений бьшо получено 94 растения, т.е. 66,7% от всего количества Э. 3 табл. to о: оо

После куль141

28 тивирования

После 1-го

69

13 охлаждения

21

44

23 (31,2%

21

18

39

(27,7%)

После J1-го

17 охлаяу1,ения

После 111-го охлаждения Как следует из табл. 1, из 141 ;эмбриоида, вычисленного из пыльнико и культивируемого при температуре прорастания, 28 эмбриоидов ногнб.но, из 21 эмбриоида получены растенияальбиносы и из 23 эмбриоидов - зеле ные растения. Всего после периода культивирования получено 44 растени (т.е. 31,2% от всего количества эмбриоидов). После этого 69 жизнеспособных, но непроросших эмбриоидов были пересажены на свежую питательную среду № 2 и подвергнуты в течение 5 сут охлаждению при 7°С дл выведения их из состояния покоя. После охлаждения их опять культивировали при температуре прорастания (27+1°С) и фотопериоде в течение 4 недель. Как следует из табл. 1, из 69 эмбриоидов 13 погибло, от 21 и 18 эмбриоидов получены альбиносные и зеленые растения соответствен но. Всего после 1-го охлаждения было получено 39 растений (т.е. 27,7% от всего количества эмбриоидов.). 17 жизнеспособьих, но не проросших после 1-го охлаждения эмбрио идов были пересажены на свежую пита тельную среду и подвергнуты 11-му охлаждению в течение 5 сут при 7°С. После 11-го охлаждения и культивиро

5

(3,5%)

6

(А,3%) вания в течение 4 недель притемпературе прорастания бычо полуг ено еще 5 растений (т.е. 3,3% от всего количества эмбриоидов) (см. табл. 1). После 11Т-ГО охлаждения (см. табл.1) выдшгено еще 6 растений (4,3%). Таким образом, из 141 эмбриоида после ггериода культивирования и трех последую1цих охлаждений быпо полученсз 94 растения, т.е. 66,7% от всего количества эмбриоидов. После трех последовательных охлаждений выделено 50 растений (35,5% от всех полученных эмбриоидон). Результаты, приведенные в примере 1, свидетельствуют о значительном повьпиении выхода растений из пыльцы при использовании предлагаемого способа. Данные о влиянии длительности охлаждет1ия эмбриоидов на выход растений представлены в табл. 2 и 3. Как следует из табл. 2, выход растений в зависимости от длительности озшаждения эмбриоидов колеблется от ,7 до 17,3%, в то время как согласно предлагаемому способу выход расений без охлаждения эмбриоидов при олучении первой фракции растений аходится в пределах 27,5-31,2% (см. табл. 1).

Выход растений из пыньцы пшеницы при охлаждении (7°С) эмбриоидов до получения первых растений

Длительность Количество эмбриоидовВыход растений

охлаждения, 1 всех типов

сут всего погибших

3231-31(13,4%)

92823(82,1%)2(8,7%)

Выход растений из пыльцы пшеницы в зависимости от длительности охлаждения эмбриоидов

Длительность Количество Выход растений охлаждения, охлажденных

сут эмбриоидов альбиносов зеленых всех типов

93 79 84 28 34 25

3 4 6 7 9 10

Из табл. 3 следует, что наибольший выход растений (57,2-64,3%) достигается при охлаждении эмбриоидов в течение 6-7 сут.

Применение я-эоОретеяия позволяет получат.ь я масс;оном количестве рас1ения, служапшп исходным материалом для сельскох(з П1ст1зениы.х работ по созданию ноных сортоп растений.

Т а б л и ц а 2

TaбJrицa 3

30(32,2%) 39(49,2%) 48(57,2%) 18(64,3%) 16(41,2%) 12(40%)

Формула изобретения

Способ получения растений злаковых культур из пыльцы, заключающийся в культивировании пыльников на питательной среде, стимулирующей эмбриогенез, отделении эмбриоидов от пыльников, пересадке змбриоидов на питательную среду для прорастания

7 1276309

и охлаждения их в этой среде длясреду для прорастания и перед кульвыведения из состояния покоя с пес-тивированием охлаждают в течение ледующим культивированием при опти-5-7 дней, при этом охлаждение и мальной температуре, о т л и ч а ю-культивирование повторяют для каждой щ и и с я тем, что, с целью новы-5 оставшейся партии жизнеспособных шения выхода, растений, после прорас-эмбриоидов до получения растений тания эмбриоидов оставшиеся непро-из всех жизнеспособных эмбриоиросшие эмбриоиды переносят на свежуюдов.