Среда для отбора продуцентов фибринолитических ферментов Советский патент 1982 года по МПК C12N1/00 C12N9/68 

1

Изобретение относится к микробиологии, а именно к питательным средам для культивирования микробиологических объектов, и может быть использовано в микробиологической и медицинской промышленности, а также в селекции и биохимии.

Известна среда для отбора активных продуцентов протеолитических ферментов 1 , содержащая в качестве единственного источника углерода и азота казеинат натрия, минеральные соли, агар и воду.

Недостатками являются неэкономичность среды, содержащей пищевой продукт - белок молока казеин; неспецифичность при отборе и селекции продуцентов фибринолитических ферментов. Среда позволяет отбирать продуценты протеолитических ферментов, но затрудняетотбор продуцентов фибрннолитических ферментов.

Известна среда для отбора продуцентов протеолитических ферментов с фибринолитической активностью, содержащая снятое молоко, 2,3,5- трифенил тетразолий хлористый, агар и воду 2.

Недостатками являются неэкономичность среды, содержащей пищевой продукт; неспецифичность при отборе продуцентов фибринолитических ферментов. Среда позволяет отбирать продуценты протеолитических ферментов, однако требует последующей проверки продуцентов на фибринолитическую активность, так как не всякая протеаза, гидролизующая казеин, обладает высокой фибрииолитической активностью.

to

Цель изобретения - повыщение специфичности среды и повыщение активности отобранных продуктов.

15

Поставленная цель достигается тем, что среда, содержащая источник углерода, источник азота, агар и воду, содержит в качестве единственного источника утлерюда и азота фибрин и дополнительно минеральные

20 соли - однозамещенный фосфат калия, сернокислый магний, сернокислый цинк и сернокислое железо при следующем соотношении компонентов, вес.%:/ Фибрин 0,5-1,0 Однозамещенный фосфат калия 0,1-0,3 Сернокислый мапшй 0,4-0,6 Сернокислый цинк 0,0005-0,0015 Сернокислое железо 0,0015-0,0025 Агар 1,5-2,0 Вода Остальное до 100 Пример 1. Берут вес.%: Фибрин0,5 Однозамещенный фосфат калия Сернокислый Сернокислый цинк Сернокислое железо Остальное до 100 мл Используется фибрин бычий Олайненского завода химических реактивов, отмытый мно гократно большим количеством воды до удаления аминокислот и пептидов и двукрат iHo обработанный ацетоном для удаления лш дов и высушивания. Перед внесением в сре ду фибрин тщательно растереть для получения однородной суспензии, что необходимо для приготовленияТвердых питательных сре с равномерным слоем субстрата на чашках. Петри. Стерилизуют при 0,5 атм, разливают в стерильные чаитки Петри. . Производят п Диаметр зон Продуцент лиза фибрина колоний на п мой среде,

8-10

« 23-24

20-21 19-20 Как видно из таблицы, увеличение зон гид ролиза фибрина вокруг колоний продуцентов на предлагаемой среде коррелирует с увеличением фибринолитической активности. Таким образом, реализация изобретения позволяет повысить специфичность среды для отбора продуцентов фибринолитических фермен Формула изобретения Среда для отбора продуцентов фибринолитических ферментов, содержащая источник уг1

4-4,4 раза 1,8-2,0 раза 1,4-1,5 раза сев j;ycneH3HeA спор Actinomyces spheroides штамм 35. Через 5 дней измеряют диаметр зон гнпГролиза фибрина вокруг выросших колоний. Они равны 8-10 мм. Пример 2. Берут, вес.%: Фибрин Однозамещенный фосфат калия Сернокислый магний Сернокислый цинк Сернокислое железо Агар Вода Остальное до 100 мл Ос1альные операции проводят аналогично примеру 1. Производят посев суспензией опор Act. spheroides штамм 35, облученной УФ-лучами. Через 5 дней измеряют диаметр зон гидролиза фибрина вокруг выросших колоний. Отбирают колонии мутантов с зонами гидролиза, превышающими 8-10 мм, пересевают их на среду того же состава и выращивают в течение 7 дней в пробирках. Известную синтетическую среду засевают 9тобранными культурами и проверяют на фибринолитическую активность. Отобранные на предлагаемой среде три мутанта с фибринолитической активностью, превышают активность исходного штамма. Результаты исследований представлены в таблице. Увеличение фибринелитическрй активности г на известной синтетиеческой среде лерода, источник азота, агар и воду, о т личающаяся тем, что, с целью повышения специфичности среды и повышения активности отобранных продуцентов, последняя содержит в качестве единственного источника углерода и азота фибрин и дополнительно минеральные соли - однозамешенный фосфат калия, сернокислый магний, сернокислый цинк и сернокислое железо при следующем соотношении компонентов, вес.%: Фибрин0,5-1,0 Однозамещенный фосфат калия0,1-0,3 5 Сернокислый магний 0,4-0,6 Сернокислый цинк 0,0005-0,0015 Сернокислое железо 0,0015-0,0025 Агар .1,5-2,0 Вода Остальное до 100 мл Источники информации, принятые во внимание при экспертизе 73609 6 1. Klingenberg P., Zickier F., Lecehtenberg A., und Ruttloff H. Gewinnung und charakterisierung von proteasen aus Thermoactino- nfiyces vulgaris Zeitschrift fUr allgemeine 5 Mikrobiologie, 1979. v 19, n. 1, 17-25. 2. Касаткина И. Д., Имшенецкий А. А., Броцкая С. 3., Желтова Е. Г. Мутанты Aspergillus terricota,, образующие протезы фибринолитическим действием, - Микробиоло10 гия,1969,т.38, вып. 5, с. 766-774 (прототип).