Способ определения продуктов перекисного окисления липидов в крови Советский патент 1987 года по МПК G01N33/48 

t1

Изобретение относится к медицинской биохимии, в частности к способа определения уровня перекисного окисления липидов биомембран в норме и при различных патологиях.

Цель изобретения - повышение точности способа за счет исключения потерь сопряженных диенов в изопропа- нольной фазе и одновременного определения сопряженных триенов.

Способ осуществляют следующим образом.

Производят забор крови и 0,02 - О,1 мл крови или эритроцитов гомогенизируют с 100-500-кратным избытком растворителя гептан: изопропиловый спирт 1:1 по объему, встряхивают в

течение 1 мин, расслаивают 1 мл дистиллированной воды, центрифугируют 5 мин при 3000 об/мин, затем отбирают гептановый экстракт, который фото- метрируют при 232 и 268 нм. Концентрацию липидов определяют гравиметри- .чески в 1 мл гептанового экстракта. Концентрацию продуктов перекисного окисления липидов (ПОЛ) рассчитывают в единицах оптической плотности (D) При каждой длине волны на миллиграмм липидов по формуле

D

442 I мг

D 4 J2

-рD

а«в/мг

.

где D - оптическая плотность гептанового экстракта при 232 и 268 нм;

Р - масса липидов в 1 мл гептанового экстракта, мг. Пример 1. Определение концентрации продуктов ПОЛ капиллярной крови.

Обследована группа практически здоровых рабочих г.Уренгоя в количестве 12 человек в возрасте 20-22 года с целью профилактического осмотра. Забор крови производят из пальца. Каплю крови (0,02 мл) гомогенизируют с 5 мл растворителя гептан: изопропиловый спирт 1:1 в течение 1 мин, расслаивают 1 мл дистиллированной воды, центрифугируют 5 мин при 3000 об/мин, отделяют гептановый экстракт, в котором определяют оптическую плотность продуктов ПОЛ при 232 и 268 нм и концентрацию липидов гравиметрически.

Получают среднестатические показатели концентрации продуктов ПОЛ капиллярной крови для исследуемой возрастной группы рабочих, равные 1,47+ +0,10 П,,,„, и 0,62+0,08 ,s, .

Концентрация липидов в 1 мл гептанового экстракта равна 0,21+0,04 мг.

Результаты определения концентрации продуктов ПОЛ капиллярной крови в соответствии с примером 1 приведены в табл. 1.

Пример 2. Определение концентрации продуктов ПОЛ венозной крови .

Обследована группа практически здоровых рабочих г. Уренгоя в количестве 12 человек в возрасте 20-22 года с целью профилактического осмотра.

Забор крови производят из вены. Каплю крови (0,02 мл) гомогенизируют с 10 мл растворителя гептан: изопропиловый спирт 1:1 в течение 1 мин, расслаивают 1 мл дистиллированной воды,

центрифугируют 5 мин при 3000 об/мин, отделяют гептановый экстракт, в котором определяют оптическую плотность при 232 и 268 нм и концентрацию липидов гравиметрически.

30

35

Получают среднестатистическрге по- казатели концентрации продуктов ПОЛ венозной крови для исследуемой возрастной группы рабочих равные 1,91+ ±0.11 aj7/Mr и 0,86+0,09 Й,8,„.Концентрация липидов в 1 мл гептанового экстракта равна 0,22+0,05 мг.

Результаты определения концентрации продуктов ПОЛ венозной крови в соответствии с примером 2 приведены

в табл. 2.

Примерз. Определение концентрации продуктов ПОЛ эритроцитов венозной крови.

Обследована группа практически здоровых рабочих г.Тюмени в количестве 15 человек в воэрасте 20-22 года с целью профилактического осмотра. Забор крови проводят из вены и О,1 мл эритроцитов дважды отмывают 0,9%-ным раствором хлорида натрия, гомогенизируют с 9,9 мл растворителя гептан: изопропиловый спирт 1:1 в течение 1 мин, расслаивают 1 мл-дистиллированной воды, центрифугируют 5 мин при 3000 об/мин, отделяют гептановый экстракт, в котором определяют оптическую плотность при 232- и 268 нм и концентрацию липидов гравиметрически

I

Получают среднестатистические показатели концентрации продуктов ПОЛ венозной крови для исследуемой возрастной группы рабочих равные 1,9А± 0.„г,мгИ 0,94±0,08 В,,д,„, .Кон- центрация липидов в 1 мл гептанового экстракта равна 0,18±0,02-мг.

Результаты определения концентрации продуктов ПОЛ эритроцитов венозной крови в соответствии с примером 3 приведены в табл. 3.

Примечание к табл. 1-3: .Данные сгруппированы в порядке увеличения. Число повторений каждого анализа равно 3.

Экстракция 250-кратным избытком ра- створителя из 0,02 МП капил- лярной крови

Среднестатистическоезначение 20-22

Формула изобретения Способ определения продуктов пере- кисного окисления липидов в крови путем экстракции проб смесью гептан: изопропанол 1:1 с последующим добавлением воды, разделением фаз и определением в гептановой фазе содержания сопряженных диенов спектрофото- - метрически по поглощению при 232 нм, отличающийся тем, что, с целью повышения точности способа за счет исключения потерь сопряженных диенов в изопропанольной фазе и одновременного определения сопряженных триенов, смесь гептан : изопропанол берут в 100-150-кратном избытке, а содержание сопряженных триенов определяют при 268 нм.

Таблица 1

1,47+0,10

0,62+0,08

Таблица 2

20 22 20 21 22 22 21 22 20 21

Среднестатистическое значение 20-22

Составитель Н. Гуляева Редактор А. Ренин Техред И.Попович Корректор Л. Патай

Заказ 1303/45 Тираж 777Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР

по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4

0,89+0,03 0,98+0,06 0,97+0,03 0,98+0,04 0,99+0,04 0,99+0,05 1,03+0,07

i,oito;o3

1,06+0,05 1,08+0,04

0,94±0,08

Изобретение относится к медицинской биохимии, предназначено для определения уровня перекисного окисления липидов биомембран в норме и при разных патологиях. Цель изобретения - повышение точности способа.Для этого проводят забор крови. Порцию крови или эритроцитов гомогенизируют со 100-500-кратным избытком растворителя гептан - изопропиловый спирт