Способ определения антиоксидантной активности липидов крови Советский патент 1987 года по МПК G01N33/48 

1 13

Изобретение относится к биохимии, в частности липидологии, и может быт использовано в биохимической диагностике...

Цель и.зобретения - повьшение точ- ности и чувствительности способа за счет проведения экстрагирования и окисления липидов в определенных условиях.

Спо.соб осуществляется следующим образом.

1,5 - 3 мл цельной,крови стабилизируют 1/10 объема 3,8%-ного раствора-цитрата натрия, гомогенизируют, смешивают с десятикратным избытком смеси н-гептан: изопропиловый спирт (1:1 по объему), встряхивают в течение 3 мин, центрифугируют 5 мин при З ООО об/мин, выдерживают в течение 1 мин для расслоения фаз, гептановый слой сушат с 1,5 - 3 г безводного сульфата натрия, смешивают с 1 мл раствора инициатора (динитрилазоби- сизомасляной кислоты) в хлорбензоле с конечной концентрацией инициатора 4-8 мг/мл, насыщают пробу кислородом при 55 - , фиксируют время . поглощения 10 ( Т) и 100 мм (Т) кислорода, определяют параметры скорости окисления А и А, равные отношению t и iC к массе липидов в мг,

где ЛТ t2 - .

Пример 1. Используют 1 мл крови женщин 20 - 25 лет, которую смешивают с 9 мл смеси гептан-изопро пиловый спирт 1:1 v/v, встряхивают 3 мин, центрифугируют 5 мин при 3000 об/мин,, выдерживают 1 мин для разделения фаз, отбирают гептановый экстракт, который смешивают с безводным сульфатом натрия для обезвоживания, фильтруют.

Фильтрат смешивают 9 I мл раствора динитрилазобисизомасляной кислоты в хлорбензоле с конечной концентрацией инихщатора 4 мг/мл, насыщают пробу кислородом при . Измеряют количество поглощенного кислорода во времени, строят график этой зависимости. Определяют период индукции и скорость окисления графически. Получают период индукции и скороctb окисления, равные 138110 мин и 1,50 ± t 0,20 мм / мин, соответственно,Пример показывает повышение точности анализа по предлагаемому способу по сравнению с известным при использова1 2

НИИ нижних предельных режимов анализа.

П р и м е р 2. Используют 0,01 мл эритроцитов крови женщин 20 - 26 лет,

которые смешивают с 9,9 мл смеси геп- тан-изопропиловый спирт 1:1 v/v, встряхивают 3 мин, центрифугируют при 3000 об/мин в течение 5 мин, отбирают гептановый экстракт, который сме- щивают с безводным сульфатом натрия для обезвоживания,- фильтруют.

Фильтрат смешивают с 1 мл раствора динитрилазобисизомасляной кислоты в хлорбензоле с конечной концентрацией инициатора 8 мг/мл, насьщ1ают пробу кислородом при . Измеряют количество поглощенного кислорода во. времени, строят график этой зависимости. Определяют период .индукции и

скорость окисления графически. Получают значения райные 70 15 мин и 5,,05 мм /мин, соответственно. Используют кровь локтевой вены женщин 20-25 лет. Кровь стабилизируют

1/10 объема 3,8%-ного цитрата натрия, путем центрифугирования делят на плазму и эритроциты. Отбирают по 0,1 мл цлазмы и эритроцитов, которые параллельно смешивают с 9, 9 мл смёси гептан-изопропиловый спирт 1 : 1 V/V, встряхивают в-течение 3 мин, центрифугируют 5 мин при 3000 об/мин, выдерживают и течение 1 мин для расслоения фаз, отбирают гептановый

экстракт, смешивают его с безводным сульфатом натрия для обезвоживания, фильтруют.

Фильтрат смешивают с 1 мл раство- ра динитрилазобисизомасляной кислоты в хлорбензоле с конечной концентрацией инициатора 6 мг/мл, насыщают пробу кислородом при , Измеряют количество поглощенного кислорода во времени, строят график этой зависимости. Определяют период индукции и скорость окисления графически.Получают для плазмы . период индукции и скорость окисления, равные 46 ± t6 мин, 0,7510,07 , соответственно. Получают указанные параметры для эритроцитов, равные 76i8 мин и 0,42 t а,08 мм /мин.

Результаты определения антнокси- дантной активности липидов крови,

приведены в таблице.

Формула изобретения 1I

Способ определения антиоксидантной активности липидов крови путем

313189114

экстрагирования липидов смесью орга-тем, что, с целью повышения точноснических растворителей, насыщения ис-ти и ускорения способа, экстрагирова.следуемой пробы кислородом в присут-ние проводят 10-1000-крагным избытствии инициатора окисления и опре-ком смеси гептана и изопропилового

деления количества поглощенного кис- 5спирта, а окисление гептановой фа зы

лорода во времени с последующим рас-проводят при 55-65. при концентрации

четом периода индукции и скоростиинициатора 4-8 мг/мл. окисления, отличающийся

Кровь,м,40 лет

Кровь,ж,60 лет

Кровь,ж,60 лет

Кровь,ж,60 лет

Кровь,ж,60 лет

Редактор А.Шандор

Составитель Н.Гуляева Техред Л.Олийнык

Заказ 2503/37Тираж 776Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР

по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д.4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, г.Ужгород, ул.Проектная, 4

2136,OiO,322,ltO,9

1976,1 + 0,320,.ltO,9

1083,ltO,lIl,0t0,5

-853,6tO,27,7tO,3

642,4iO,l6,210,3 ;

Корректор А.Обручар

Изобретение относится к биохимии, точнее к липидологии, предназначено для биохимической диагностики. Цель изобретения - повышение точности и чувствительности способа. Для этого порцию крови стабилизируют раствором цитрата натрия, гомогенизируют, смешивают с i0-кратным избытком смеси н-гептан: изопропило- вый спирт (1:1), встряхивают 3 мин, центрифугируют 5 мин при 3000 об/мин, вьщеряивают 1 мин для расслоения фаз, гептановый слой сушат с безводным сульфатом натрия, смешивают с раст- ,вором инициатора (динитрилазобисизо- масляной кислоты) в хлорбензоле с .конечной концентрацией инициатора 4-8 мг/мл насыщают пробу кислородом при 55-56 С, определяют время поглощения 10 (С) и 100 мм (tj) кислорода, параметры скорости окисления А и AJ , равные отношению С ti к массе липидов в мг, где й - Т, , 1 табл. 2 . (Л со 00 со