Способ определения антиоксидантной активности липидов крови Советский патент 1991 года по МПК G01N33/49 G01N33/92 

Изобретение относится к биохимии, а именно к способам определения ан тиоксидантной активности биологических жидкостей, и может быть использовано для определения антиокси- дантной активности липидов крови

Цель изобретения - повышение точности и сокращение времени определения.

Способ осуществляется следующим образом

Пельную кровь стабилизируют раствором цитрата натрия, разделяют плазму и эритроциты путем центрийугирова- ния. Горцию крови или эритроцитов смешивают со смесью гептана и изопропилового спирта 1:1 (по объему),

центрифугируют и выдерживают для расслоения фаз. Гептановый экстракт сушат безводным сульфатом натрия, К 1,5 мл гептанового экстракта, эквивалентного 0,03 мл плазмы, добавляют 0,5 мл раствора азобисизобутиро- нитрила (АИБН) в гептане концентрацией 0,038-0,042 мг/мл, что обеспечивает в итоге концентрацию инициатора в экстракте 0,0095-0,0105 мг/мл. Раствор насыщают кислородом, термоста- тируют при 60iO,2°C и измеряют количество поглощенного кислорода во времени Cfc) манометрически. Кинетическую кривую поглощения кислорода представляют в координатах (02 Т -(Ј) , при этом кривая трансформируется в

35

ОЭ СО

ломаную линию, состоящую из двух участков о По тангенсу угла наклона левого участка ломаной находят величину обратной максимальной скорости окисления (V0n) .

Перпендикуляр, опущенный лз точки излома на ось абсцисс, отсекает на . ней отрезок, численно, равный обратной величине периода индукции (ЈМИ . По значениям VQH и Јмнд определяют Vutt

и Јц«А с

Отличительной особенностью способа является то, что азобисизобути

и 26,4±0,9 мин, ,4±0,4 и 7,5 tO, 7 мм3/мин соответственно для концентраций инициаторов 0,0105 и 0,0115 мг/мл.

Как видно из приведенных данных, увеличение концентрации инициатора (более 0,0-105 мг/мл) приводит к возрастанию ошибки определения Ј ннд и 1,1 до 3,4% для периода индукции и с 5,4 до 9,3% для скорости окисления) .

Использованием в предлагаемом способе указанных граничных значений

Изобретение относится к биохимии и предназначено для оценки суммарной окислительной стабильности ли- пидов крови„ Цель изобретения - повышение точности и сокращение времени определения. Способ заключается в стабилизации крови цитратом натрия, разделении плазмы и эритроцитов центрифугированием, экстрагировании ли- пндов из плазмы или эритроцитов смесью гептана и изопропилового спирта, отделении гептанового экстракта, его сушке сульфатом натрия, внесении в экстракт раствора азобисизобутиро- нитрила в гептане в количестве, обеспечивающем концентрацию ингибитора в экстракте 0,0095-0,0105 мг/мл, насыщении кислородом и определении количества поглощенного кислорода с последующим расчетом периода индукции и скорости окисления о Изобретение позволяет сократить время анализа в 2 раза и повысить точность определения в 2-5 раз о 2 табл. с е сл

ронитрил вводят в гептановый экстракт,, концентраций инициатора (0,0095 J f f л s r- I

20

25

30

35

и в виде раствора в гептане в количестве, обеспечивающем концентрацию инициатора в экстзракте 0,0095- 0,0105 мг/мл„ Это позволяет сократить время анализа в 2 раза и повысить точность определения с 2-10 до 0,9-1,4%.

Пример 1„ 1,5мл экстракта плазмы крови донора (регистрационный номер Минской станции переливания крови 0200047) смешивают с 0,5 мл раствора АИБН в гептане концентрацией 0,034 и 0,038 мг/мл, что обеспечивает в итоге концентрацию инициатора в экстракте 0,0085 и 0,0095 мг/мл.

Насыщают пробу кислородом, термо- статируют при 6010,2°С 1 мин и измеряют количество поглощенного кислорода во времени при указанной температуре. Графически определяют ьинА 34,5±0,8 и 30,210,4 мин, ,9t ±0,5 и 7,2tO,3 мм3/мин соответственно для концентраций инициаторов О.,0085 и 0,0095 мг/мл.

Таким образом,при концентрации АИЩ1 менее 0,0095 мг/мл увеличивается40 длительность определения антиокислительной активности липидов в среднем на,14% и возрастает ошибка анализа (с 1,3 до 2,3 для периода индукции).

Пример2. 1,5мл экстракта J плазмы крови донора (регистрационный номер Минской станции переливания крови 0200047) смешивают с 0,5 мл раствора АИБН в -гептане концентрацией 0,042 и 0,046 мг/мл, что обеспечивает в итоге концентрацию инициатора в гептановом экстракте 0,0105 и 0,0115 мг/мл„

Насыщают пробу кислородом, термо- статируют при 1 мин и изме- 55 ряют количество поглощенного кислорода во времени при указанной температуре,, Графически определяют и«д 27,1JO,3

50

0,0105 мг/мл) достигается ускорен анализа при повышении точности из рения.

Кроме того, в пределах указанн значений АИБН возможно получение воспроизводимых результатов, срав мых в различных сериях эксперимен и получаемых разными исследовател ми. АИБН в гептане концентрацией 0,042 мг/мл обеспечивает в итоге концентрацию инициатора в гептано экстракте 0,0105 мг/мл.

Насыщают пробу кислородом, тер мостатируют при 60±0,2СС 1 мин и меряют количество поглощенного ки рода по времени при указанной тем пературе. Графически определяют 27,1+0,3 мин и ,4tO,4 мм3/м

Примеры 3-6 „ Проводят оп аналогично примеру 2 за тем исклю нием, что используют кровь доноро возрастной группы 29-39 лет и кон ную концентрацию инициатора в экс ракте 0,01 мг/мл.

Результаты определения антиокс дантной активности липидов плазмы доноров приведены в табл. 1, а ст тической обработки этих данных - табл. 2 ().

Из приведенных данных видно, ч по предлагаемому способу индукцио ный период сокращается в 1,96 раз а скорость окисления возрастает в 8,15 раз по сравнению с известным что приводит в целом к значительн сокращению времени определения ан оксидантной активности.

Таким образом, предлагаемый сп соб обеспечивает сокращение време определения антиоксидантной актив ности липидов крови и повышение т ности метода.

концентраций инициатора (0,0095f f л s r- I

.

J

0,0105 мг/мл) достигается ускорение анализа при повышении точности измерения.

Кроме того, в пределах указанных значений АИБН возможно получение воспроизводимых результатов, сравнимых в различных сериях эксперимента и получаемых разными исследователями. АИБН в гептане концентрацией 0,042 мг/мл обеспечивает в итоге концентрацию инициатора в гептановом экстракте 0,0105 мг/мл.

Насыщают пробу кислородом, тер- мостатируют при 60±0,2СС 1 мин и измеряют количество поглощенного кислорода по времени при указанной температуре. Графически определяют 27,1+0,3 мин и ,4tO,4 мм3/мин.

Примеры 3-6 „ Проводят опыты аналогично примеру 2 за тем исключением, что используют кровь доноров возрастной группы 29-39 лет и конечную концентрацию инициатора в экстракте 0,01 мг/мл.

Результаты определения антиокси- дантной активности липидов плазмы доноров приведены в табл. 1, а статической обработки этих данных - в табл. 2 ().

Из приведенных данных видно, что по предлагаемому способу индукционный период сокращается в 1,96 раза, а скорость окисления возрастает в 8,15 раз по сравнению с известным, что приводит в целом к значительному сокращению времени определения анти- оксидантной активности.

Таким образом, предлагаемый способ обеспечивает сокращение времени определения антиоксидантной актив- ности липидов крови и повышение точности метода.

Формула изобретения

Способ определения антиоксидант- ной активности липидов крови путем стабилизации крови, разделения плазмы и эритроцитов, экстрагирования липидов смесью гептана и изопропанола, отделения гептанового экстракта, его сушки, внесения в него азобисизо- бутиронитрила в органическом раствоПараметры

Јцн4 мин

29,,86 VOK , мм3/мин 5,3010,49 Ошибка одиночного

1,15iO,20

(от 0,92 до 1,40) (от 2 до 10)

5,,5

(от 3,7 до 5,5)

рителе, насыщения экстракта кислородом и определения количества поглощенного кислорода с последующим расчетом периода индукции и скорости окисления, отличающийся тем, что, с целью повышения точности и сокращения времени определения, азо- бисизобутиронитрил растворяют в гептане и используют в конечной концентрации в экстракте 0,0095-0,0105 мг/мп.

Т а б л и ц а 1

Таблица Показатели по способу предлагаемому известному

157,0±4,0 0,65±0,11