Способ получения селективной питательной среды без аденина или урацила,или лейцина Советский патент 1987 года по МПК C12N1/16 C12N1/16 C12R1/865 

Изобретение относится к биотехнологии и конструированию микробиологических питательных сред.

Способ заключается в том, что для получения селективной среды для изби- рательного культивирования прототрос)- ных клеток дрожжей Saccharomyces cerevisiae на питательной основе, из состава которой нужно удалить или снизить концентрацию определен- ного компонента, культивируют мутант дрожжей Saccharomyces cerevisiae аук- сотрофный по данному веществу.

Изобретение иллюстрируется следующими примерами.

Пример 1. Для удаления биотехнологическим способом аденина из состава гидролизата кормовых дрожжей (ГКД), полученного ферментативным

применяют среду следующе20

25

30

гидролизом, го состава:

Жидкий гидролизат кормовых дрожжей (аминный азот 3000 мг%), мл .200

Глюкоза, г15

Дистиллированная вода, мг рН 5,0800

Среду стерилизуют при 0,5 атм в течение 30 мин.

На этой среде в течение 48 ч культивируют ауксотроф по аденину (штамм р192-15В-П4), Затем центрифугированием удаляют биомассу ауксотрофа, в культуральную жидкость добавляют агар (25 г/л), глюкозу (15 г/л), среду разделяют на две части и в одну часть добавляют аденин (10 мкг/мп), стерилизуют, разливают по чаткам и производят посевы прото- и ауксотроф- ных штаммов дрожжей (по 200+50 колоний на чашку) для установления селективности среды, полученной предлагаемым способом. Результаты приведены

в табл. 1. .

Пример 2, Удаление урацила.

Процедура получения культуральной жидкости без урацила такая же, как и

35

45

Нужная степень очищения среды, т.е. селективности, достигается тем, что культивирование ауксотрофных кле ток ведется до момента выхода криво го роста культуры на плато, что означает доступный для данного ауксотрофа ресурс компонента (по которо му ауксотрофен данный штамм) в питательной основе исчерпан.

Предлагаемый способ очистки питательных основ позволяет получать минимальные среды селективные по отношению к штаммам ауксотрофным по какому-то определенному биохимическому соединению.

Формула изобретения

Способ получения селективной пита тельной среды без аденина или урацила, или лейцина для избирательного культивирования ауксотроф1« 1х клеток дрожжей Sacchoromyces cerevisiae, , отличающийся тем, что на питательной среде, содержащей гид ролизат биологического сырья с содер жанием аминного азота от 1500 до 3000 мг%, глюкозу и воду культивируют исходную культуру ауксотрофного по аденину или урацилу, или лейцину мутанта дрожжей Sacchoromyces cerevi siae до достижения стационарной фазы

в примере 1. Для удаления урацила ис-50 роста с последующим отделением куль- пользуют ауксотроф по урацилу

туральной жидкости,

5

5

0

5

0

5

5

1Г-П188. Результаты приведены в табл. 2.

Пример 3. Удаление лейцина.

Процедура получения культуральной жидкости без лейцина такая же, как и в примерах 1 и 2. Для удаления лейцина используют штамм 7А-П192 ауксотрофный по лейцину. Результаты приведены в тйбл. 3.

Предлагаемый способ обеспечивает нужную глубину очистки питательной ос- основы от нежелательного компонента, т.е. отпадает необходимость в дополнительной проверке степени очищения среды сложными биохимическими или другими методами.

Нужная степень очищения среды, т.е. селективности, достигается тем, что культивирование ауксотрофных клеток ведется до момента выхода кривого роста культуры на плато, что означает доступный для данного ауксотрофа ресурс компонента (по которому ауксотрофен данный штамм) в питательной основе исчерпан.

Предлагаемый способ очистки питательных основ позволяет получать минимальные среды селективные по отношению к штаммам ауксотрофным по какому-то определенному биохимическому соединению.

Формула изобретения

Способ получения селективной питательной среды без аденина или урацила, или лейцина для избирательного культивирования ауксотроф1« 1х клеток дрожжей Sacchoromyces cerevisiae, , отличающийся тем, что на питательной среде, содержащей гид- ролизат биологического сырья с содержанием аминного азота от 1500 до 3000 мг%, глюкозу и воду культивируют исходную культуру ауксотрофного по аденину или урацилу, или лейцину мутанта дрожжей Sacchoromyces cerevisiae до достижения стационарной фазы

0 роста с последующим отделением куль-

роста с последующим

туральной жидкости,

15B-IT4 (прототроф)

+1.5-2,0

р192-15В-П4 (ауксотроф

по аденину)

1Г-П188.(ауксотроф

по урацилу)

7A-II192 (ауксотроф по лейцину)

Примечание. (+)

(-) (2,0)

Штаммы Saccharomyces cerevisiae

15В-П4 1Г-П188 р192-15В-П4 7А-П192

Штаммы

Saccharomyces cerevisiae

15В-П4 7А-П192 р192-15В-П4 1Г-П188

ВНИИПИ Заказ 1866/25

Произв.-полигр. пр-тие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4

Т а б л и ц а 1

1-,0-1,5 +1,5-2,0

-0,0

+1,0-1,5

+ 1,0

+1,0-1,5

+ 1,0

+1,0-1,5

Наличие роста. Отсутствие роста. Диаметр колоний, мм

Таблица 2

онтроль

Среда без урацила, полученная предлагаемым способом

Среда без урацила, полученнаяпредлагаемым способом + + урацил

,0

+1,0-1,5 -0,0 + 1,0 + 1,0

+1,5-2,0 +1,0-1,5 +1,0-1,5 +1,0-1,5

Таблица

онтроль

Среда без лейцина, полученная предлагаемымспособом

Среда без лейцина, полученнаяпредлагаемым Способом + + лейцин

+1,5-2,0 +1,0-1,5 +1,5-2,0 +1,5 -0,0 +1,0-1,5 +1,5 +1,0 +1,0-1,5

+ 1,5

+ 1 ,0

- лО- А

Тираж 500 Подписное

Изобретение относится к области биотехнологии и конструирования микробиологических питательных сред. Для получения минимальной питательной среды без аденина, урацила или лейцина на питательной среде, из состава которой нужно удалить или сни зить концентрацию определенного компонента, культивируют мутант дрожжей Saccharomyces cerevisiae, ауксотроф- ный по данному веществу. На среде с содержанием гидролизата кормовых дрожжей, содержащей аминный азот 3000 мг %, в течение 48 ч на качалке культивируют ауксотроф по аденину (р192-15В-П4). После этого центрифугированием удаляют биомассу ауксотро- фа, в культуральную жидкость добавляют агар (25 г/л), глюкозу (15 г/л), среду разделяют на две части и в одну часть добавляют аденин (10 мкг/мл) стерилизуют, разливают по чашкам и производят посевы прото- и ауксотроф- ных штаммов дрожжей (по 220+50 колоний на чашку) для установления селективности среды, полученной предлагаемым Способом. с (Л