Способ обнаружения яиц гельминтов в пробах почвы и донных отложениях Советский патент 1987 года по МПК G01N33/48 

Изобретение относится к медицинской паразитологии, а именно к способам санитарно-гельминтологического обследования.объектов внешней среды.

Целью изобретения является повышение точности способа.

Сущность способа заключается в .следующем.

Весь надосадочный слой флотационного раствора с удельной плотностью 1,40-1,42, оптимальной для диффузии . яиц гельминтов из осадка в надосадоч ную жидкость и послойного распределения последних в зависимости от их собственного удельного веса, переносят в чистые пробирки и разбавляют водой, снижают удельную плотность раствора до,1,05. После центрифугирования полученный осадок концентрируют и микроскопирутет. Пробы обрабатывают в стандартных клинических пробирках, используют малогабаритную клиническзпо центрифугу ОПн-3.

При этом в 20 клинических пробирок предварительно наливают по 6 мл 3%-ного раствора калиевой или натриевой щелочи, после чего в каждую пробирку вносят по 2-2,5 г обрабатываемого материала. Содержимое пробирок тщательно перемешивают и центрифугируют, надосадочную жидкость сливают, а осадок одноразово промывают водой, После чего к осадку добавляют 3 мл насьш;енного раствора соли, содержащего в определенных количествах натриевую и аммиачную селитру с удельной плотностью 1,40, содержимое перемешивают и центрифугируют. Образовавшуюся надосадочную жидкость переливают в чистые пробирки.

К перенесенному раствору флотационной жидкости доливают в каждую пробирку определенное количество воды, пробирки встряхивают и центрифугируют, после чего надосадочную жидкость сливают, а образовавшийся осадок из 20 пробирок концентрируют в 4 К осадку в каждую пробирку добавляют воду и сверху наслаивают эфир. Пробирки встряхивают и центрифугируют, надосадочный слой сливают,а осадок микроскопируют.

Пример. Приготовление солевого раствора.

Для приготовления насьш1;енного раствора можно применять как химически чистую соль, так и техническую селит РУ.

5

0

5

Реактивы смешивают с водой в следующей пропорции: 800 г NaNO,j+400 г NH NOj+ln , что соответствует молярному соотношению 9,4:3 соответст- венно, и доводят до кипения, ложкой снимая накипь. Раствор кипятят на небольшом огне 10-15 мин, после чего его охлаждают и ареометром измеряют удельную плотность, которая должна быть 1,40-1,42. Раствор хранят при комнатной температуре в закрытых емкостях в течение 7-10 дней.

Обработка пробы почвы.

В 20 клинических центрифужных пробирок объемом 10 мл напивают по 6 мл 2%-ного раствора едкого натра. Затем в каждую пробирку вносят такое количество почвы, чтобы объем раствора, налитого в пробирку, увеличился до 7 мл. Такое увеличение объема на 1 1лл соответствует весу почвы от 2 до 2,5 гр. При исследовании пробы в 20 клинических пробирках общий вес навески составит от 40 до 50 гр. Стеклянной палочкой тщательно перемешивают содержимое пробирок, после чего пробирки центрифугируют при 1500 об/мин в течение 3 мин. В дальнейшем режим центрифугирования оставляют постоянным.

После центрифугирования надосадочную жидкость сливают, а к осадку добавляют 8 мл воды. Содержимое тщательно перемешивают и центрифугирзгют. 5 Надосадочную жидкость сливают, а к осадку добавляют 3 мл раствора, содержащего натриевую и аммиачную селитру при молярном соотношении 9,4:5 соответственно. При этом удельная плотность раствора 1,40-1,42 обеспечивает переход яиц гельминтов из осадка в надосадочный слой жидкости. Яйца, обладающие удельной плотностью менее 1,40-1,42, флотируются ,в поверхностную пленку, а с удельной плотностью более 1,40 распределяются по всему столбику надосадочной жидкости. Содержимое пробирок перемешивают и центрифугируют. Отцентрифу- гированные пробирки оставляют в состоянии покоя в течение 5 мин, после чеГ о надосадочную жидкость переливают в следующий чистый ряд пробирок (од- на в одну) и далее работают только с ней. К перенесенному раствору фло- тационной жидкости доливают в каждую пробирку воду до отметки 10 мл. При этом удельная плотность раствора па0

0

5

0

5

дает с Ij40 до 1,05. Пробирки встряхивают и цейтрифугируют при 1500 об/мин в течение 5 мин. Этот прием позволяет сконцентрировать яйц гельминтов в осадке. Надосадочнуто жидкость сливают, а осадок из каждых 10 пробирок переносят в 2 из них. Осадок из пробирок собирают пастеровской пипеткой. Таким образом, из 20 пробирок остается только 4, в которых и сконцентрирован весь осадок, содержащий яйца гельминтов.

В каждую пробирку к осадку доливают 7 мл воды и сверху наслаивают 1 МП эфира. Пробирки интенсивно встряхивают в течение 30-40 с и центрифугируют при 1500 об/мин в течение 3 мин.

Затем надосадочньй слой жидкости сливают, стенки пробирки вытирают ватным тампоном, при этом пробирка находится в горизонтальном положении Полученньй осадок из каждой пробирки переносят пастеровской пипеткой на предметное стекло и накрывают двумя покровными стеклами размером 2020. В случае если осадка в пробирке малое количество, то его просматривают весь, если большое - то к не

Составитель Е. Колмакова Редактор А. Лежнина Техред ЛоОлийнык Корректор С. Черни

. Заказ 2208/46 Тираж 777Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР

по делам изобретений и открытий 113035, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная,4

O

5

0

5

му добавляют до 0,5 мл воды и просматривают из всего осадка только 0,1 или 0,2 мл, а полученный результат пересчитьтают на весь объем осадка, умнол ая в первом случае на 5, а во втором на 2,5, Результаты просмотра осадка из каждой пробирки суммируют.

Формула изобретения

Способ обнаружения яиц гельминтов в пробах почвы и донных отложениях, заключающийся в обработке проб щелочным раствором, водой и флотационной жидкостью с последующим центрифугированием, микроскопированием и подсчетом яиц гельминтов, отличающийся тем, что, с целью повьше- ния .точности, исследуют пробу 40-. 50 г, разделив на равные по весу части , помещают в пробирки центрифугирование проводят при 1500 об/мин в течение 3-5 мин, добавляют в каждую пробирку флотационный раствор плотностью 1,40-1,42, образующзтося надо- садочную жидкость переносят в чистые пробирки и разбавляют водой, повторно центрифугируют и микроскопируют осадок.

Изобретение относится к области медицинской паразитологии, а именно к способам санитарно-гельминтологи- ческого обследования объектов внешней среды. Цель изобретения - повьше- ние точности способа. Для этого весь надосадочный слой флотационного раствора с удельной плотностью 1 ,40г-1 ,42 (оптимальной для Диффузии яиц гельминтов из осадка в надосадочную жидкость) переносят в чистые пробирки