Способ размножения и сохранения клубеньковых бактерий, используемых при производстве нитрагина Советский патент 1988 года по МПК C12N1/04 C12N1/04 C12R1/01 

Изобретение относится к микробиологической промьшшенности и касается размножения и сохранения клубеньковых бактерий при производстве нитра- гина Бактериальньм препарат - нитрагин применяу1т в сельском хозяйстве для инокуляции клубеньковыми бактериями бобовых культур с целью по- вьппения их азотнакопительной способ- ности, урожайности и качества продукции.

Цель изобретения - повьппение численности и выживаемости клубеньковых бактерий и упрощение способа.

Способ заключается в том, что использование в качестве субстрата-носителя клубеньковых бактерий органических сапропелей с содержанием сухих веществ 15-25% обеспечивает за счет органического материала, содержащего питательные вещества, активное размножение и сохранение в течение года в 3-5 раз большего количества

жизнеспособных клеток быстро и медленно растущих клубеньковых бактерий при незначительном загрязнении посторонней микрофлоры.

Сапропели по свойствам подразделяются на органические, кремнеземистые и

и карбонатные Органические сапропе- ли характеризуются повышенным содержанием органического компонента (59,6-95,7% в расчете на сухое вещество), невысокой зольностью (6,3- 40,2%), значительной амплитудой рН 4,6-7,4.

Элементарный состав органической массы сапропелей сравнительно постоянен о Содержание углерода колеблется от 48 до 65%, азота - от 1,3 до 6,0% на абсо,гаотно сухую органическую массу,

Сапропели содержат все биогенные макро- и микроэлементы. Доступность питательных веществ сапропелей для микроорганизмов сравнительно невелика. Нейтрализация сапропелей, имеющи кислую реакцию, внесением СаСО, обезвоживание их до определенных пределов, а также стерилизаи 1я по- вьшают доступность питательных веществ и полноценность сапропелей в качестве субстрата для размножения и сохранения клубеньковых бактерий Влияние обработки сапропеля на его химические свойства представлены в табЛс1 о

510

15

20

25

30

35

40

0

5

Пример В качестве субстрата для размножения и сохранения различных видов клубеньковых бактерий ис-, пользуют органический сапропель озера Судобль Минской области или озера Лочинское с содержанием сухого вещества 20% о Нейтрализованный СаСО. до рН 7,0 сапропель расфасовывают в полиэтиленовые пакеты из расчёта 50 г сухого вещества о Пакеты запаивают, упаковывают в кортонные коробки и стерилизуют гамма-излучением в дозе 4,0-5,0 Мрад. Простерилизован- ный сапропель проверяют на стерильность путем высева его водной суспензии 1:10 на мясопептонный агар с 0,5% глюкозы и 0,5% сахарозы Стерильный сапропель инокулируют инъекцией жидкой культуры инокулянта непосредственно в пакет. Инокулянт вносят из расчета 1,0 млрд, жизнеспособных клеток на 1 г сухого сапропеля. Прокол заклеивают липкой лентой и содержимое пакетов тщательно перемешива- ют. Пакеты с инокулированными клубеньковыми бактериями сапропелем хранят при температуре 16 С.

Результаты использования органического сапропеля при содержании 15-25% абсолютно сухого вещества приведены в табл.2.

Таким образом, в сравнении с прототипом при использовании в качестве субстрата-носителя торфа наблюдались низкие титры размножения - 12,6 млрд, клеток и сохранение в течение года всего 6,5 млрд, клеток -в 1 г сухого препарата, а по предложенному способу в течение года сохранность бактерий в 3-5 раз вьше

Формула изобретения

Способ размножения и сохранения клубеньковых бактерий, используемых при производстве нитрагина, предусматривающий подготовку природного субстрата-носителя и источник питания, путем нейтрализации его углекислым кальцием до величины рН 6,8-7,2, расфасовки, холодной стерилизации с последующими инокуляцией его исходным инокулюмом клубеньковых бактерий, упаковкой и хранением, отличающийся тем, что, с целью повышения численности и выживаемости бак- теоий и упрощения способа, в качест313146614

ве природного субстрата-носителя и ческий сапропель с содержанием су- источника питания используют органи- хих веществ 15-25%,

Влияние отдельных приемов предварительной обработки сапропеля на его химическне свойства

рН 5,15 5,50 7,05 7,25 5,20 5,45 7,10 7,20 5,25 5,45 7,10 7,20

Содержание водораство

лерода

Содержание ам- ачного азота

растворимого 1350 3200 1800 3600 2600 4800 3400 5800 3500 5750 4520 6750

Н.об. 280 Н.об. 304 Н.об/ 360 Н.об. 446 Сл. 500 Сп. 528

Содержание нитратного азота Сл. 5 2 1)1 8

Содержание подвижного фосфора74 78 75 80 89 82 68 83 77 82 79 82

Содержание под-

вижного алюминия145 140 99 63 131 131 87 42 135 132 85 49

- сапропель без- внесения CaCOj, П - сапропель, нейтрализованный СаСО,, - сапропель, не подвергнутый стерилизации, 2 - сапропель, подвергнутый стерилизации - Содержание углерода и остальных элементов дано в мг на I кг субстрата.

Таблица2

Размножение и сохранение клубеньковых бактерий в органическом сапропеле оз, Лочинское Минской обл. с содержанием сухого вещества 15-25%

Сапропель, содержащий 15% сухого вещества

Клубеньковые бактерии сои, шт„ 629 а

0,5

Клубеньковые бактерии люпина, шт. 367 а0,6

Таблица I

17

П 8 20

21,2 31,8 24,5 13,6

0,3

19,8 28,4 23,5 10,2

0,3

Клубеньковые бактерии гороха, шт. 250 а

1,5 70,0 145,0 106,9 63,7 Сапропель, содержащий 20% сухого вещества

Клубеньковые бактерии сои, шт. 629 а 0,6

Клубеньковые бактерии люпина, што 367 а 0,8

Клубеньковые бактерии гороха, шт. 250а 2,0

38,0 49,6 41,5 25,0 31,5 37,4 29,8 14,8

89,4 183,7 114,5 84,0

Сапропель,содержащий 25% сухого вещества

Клубеньковые бактерии сои, што 629 а

Клубеньковые бактерии люпина, шт. 367 а

Клубеньковые бактерии гороха, шт. 250а

Составитель И.Привалова Редактор Л.Павлова Техред И.ПоповичКорректор М.Демчик

Заказ 1199 . Тираж 520Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР

по делам изобретений и открытий 13035j Москва, Ж-35, Раущская наб., д.4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, г.Ужгород, ул.Проектная,4

П11о:1олжение табл.2

0,2

0,3

0,4 0,3

21,7 12,5 20,5 8,6 103,6 59,7

0,5 0,4 0,3

Изобретение относится к способам размножения и сохранения клубеньковых бактерий при производстве бактериального препарата нитрагина, С целью повышения численности и выживаемости бактерий и упрощения способа в качестве природного субстрата-носителя и источника питания используют органический сапропель с содержанием сухих веществ 15-25%. Производят подготовку сапропеля, нейтрализуя его. углекислым кальцием до рН 6,8-7,2, расфасовку, холодную стерилизацию с последующей инокуляцией его исходным инокулюмом клубеньковых бактерий, упаковку и хранение 2 табл. с (Л оо i О5 О5