Питательная среда для выращивания клубеньковых бактерий Советский патент 1985 года по МПК C12N1/06 

&0

со q

от Изобретение относится к микробиологической промьшшенности, а именно к средам для культивирования кйубеньковых бактерий при производстве препаратов клубеньковых бактерий, применяемых дня инокуляции бобовых культур. Известна среда для культивирования быстро и медленнорастущих клубеньковых бактерий, содержащая источники углерода, фасолевый отвар и минеральные солиЦО Однако указанная среда обеспечивает относительно низкий титр клубеньковых бактерий, является дорого стоящей и многокомпонентной. Известны также питательные среды, содержащие кукурузный экстра дрожжи, глюкозу, мелассу, минеральные соли, стабилизатор рН, используемые для получения рабочей культу ры быстрорастущих (БКБ) и медленнорастущих (МКБ) клубеньковых бактеpici при производстве ризоторфинаС23 Недостатками известных сред явля ются высокая стоимость сред, обусловленная использованием дорогостоя щих ингредиентов - глюкозы, пищевог сахара, мелассы, кукурузного экстра та и минеральных солей, различный состав сред для выращивания БКБ и МКБ, а также раздельная стерилизация углеводов и остальных компонентов, сред, что не позволяет унифицировать процесс их приготовления, ни кий титр клеток клубеньковых бактерий 0,8 1, 1 мл, дости )й при выращивании БКБ в течение 36-48 ч, МКБ - 72-96 ч. Целью изобретения является обеспечение возможности культивирования быстрорастущих и медленнорастущих клубеньковых бактерий и повышение их -рнтра. Для достижения цели питательная среда для выращивания клубенько вых бактерий, включающая источники уг ерода, азота,минеральные соли, рс товые вещества, стабилизатор рН И воду, в качестве источника углерода, азота, минеральных солей и ростовых веществ содержит сапропель в качестве стабилизатора рН углекисльй кальций при следующем соотношении компонентов, мас.%: Сапропель (в расчете на сухое вещество) 0,5-2,5 Углекислый кальций 0,01-0,05 ВодаОстальное После стерилизации рН .для БКБ 6,8-7,0, для МКБ 6,2-6,5. Элементный состав органической массы сапропелей сравнительно постоянен. Содержание углерода колеблется от 52 до 56%, азота - от 3,5 до 6,0% на органическую массу. Зольность до 30%. Сапропели богаты всеми биогенными макро- (N;P,K,Ca,Mg,S) и микрозлементами (Zn, В,Си,Со, MO,NL и др.). Органические сапропе-, ли содержат 18-52% легкогидролизуемых веществ, различные витамины, обладают высокой дисперсностью и влагоемкостью. Пример 1. Готовят питательную среду следующего состава, мас.%: Сапропель (в расчете на сухое вещество) 0,5 CaCOj. 0,05 Вода водопроводная До 100,0 рН (после стерилизации) для БКБ 6,8-7,0, а- для МКБ 6,2-6,5. Среду стерилизуют в автоклаве при t 121°C в течение 1 ч. Питательную среду засевают суспензией клубеньковых бактерий гороха, штамм 250 а (БКБ) и суспензией клубеньковых бйктерий сои, штамм 629 а (МКБ). Возраст посевного материала 3-е суток для БКБ и 7 суток для МКБ. Исходный титр - 5,0-10® клеток в 1 мл. Культивирование бактерий ведут в колбах емкостью 750 мл с 200 мл питательной среды на качалке со скоростью 200 об/мин приi28°С в течение 2 сут для БКБ и 4 сут для МКБ. Титрколичество жизнеспособных клеток определяют известным методом. Титр клубеньковых бактерий гороха, штамм 250 а, составляет 9,0Ю клеток/мл питательной среды. Титр клубеньковых бактерий сои, штамм 629 а, составляет 2,9-103клеток/мл. П р и м е р 2. Готовят питательную среду следующего состава, мас.%: Сапропель (в расчете на сухое вещество) 1,0 CaCOj0,01 Вода водопроводная До 100,0 рН (после стерилизации для БКБ 6,8-7,0, для МКБ 6,2-6,5. Далее как в примере 1. Титр клубеньковых бактерий гороха, штамм 250 а, составляет 1,3-10 клубеньковых бактерий, а сои, штамм 629 а - 2,5 -ЮЧ 3 П р и м е :р 3. Готовят питатель ную среду следующего состава, мас Сапропель (в расчете на сухое вещество) 2,5 CaCOj.0,05 Вода водопроводная До 100,0 рН (после стерилизации) для БКБ 6,8-7,0, для МКБ 6,2-6,5. Далее, как в примере 1 . Титр клубеньковых бактерий горо ха, штамм 250 а, составляет 9, титр клубеньковых бактерий сои, штамм 629 а, - 1,2 10 клеток в 1 питательной среды. Среду можно использовать как с нативным сапропелем, так и гидро лизованным, что приводит к повышению титра клубеньковых бактерий в.1,3-2,0 раза. П р и м е р 4. Готовят пительну среду следующего соства, мас.%: Гидролизованный сапропель (в рас. чете на сухое вещество)0,5 Вода водопроводная До 100,0 рН (после стерилизации) для БКБ 6,8-7,00, для МКБ 6,2-6,5. Гидролиз сапропеля, входящего в состав среды, проводят 1%-ной соляной кислотой (22,6 мл НС1 уд.в 1,19 на 1 л среды) путем автоклави рования при 121°С в течение 30 ми .После автоклавирования.среду, нейтр лизуют 0,1 н. раствором NaOH до указанных показателей рН и снова стерилизуют в автоклаве при 121°С в течение 30 мин. Далее как в примере 1. 50 Титр клубеньковых бактерий гороха, штамм 250.а, составляет 1,2 10 °клеток в 1 мл питательной среды, клубеньковых бактерий сои, штамм 629 а, - 4,1-10. П р и м е р 5. Готовят питательную среду следукщего состава, мас.%: Гидролизат сапропеля- (в расчете на сухое вещество)1,0. Вода водопроводная До 100,0 рН (после стерилизации) для ВКБ 6,8-7,0, для МКБ 6,2-6,5. Далее как в примере 4. Титр клубеньковых бактерий гороха, штамм 250 а, составляет 2,610 клубеньковых бактерий сои, штамм 629 а - 4,. П р и м е р 6. Готовят питательную среду следующего состава, мас.%: Гидролизат сапропеля (в расчете на сухое вещество) 2,5 Вода водопроводная До 100,0 рН (после стерилизации) для БКБ 6,8-7,0, для МКБ 6,2-6,5. Далее как в примере 4. Титр клубеньковых бактерий гороха штамм 250 а, составляет 1,3-lOV клубеньковых бактерий сои, штамм 629 а - 1,9-10. Предлагаемая питательная среда по сравнению с известными имеет следукицие преимущества: пригодность для выращивания как БКБ, так и МКБ,, снижение себестоимости питательной среды в 70 раз.

ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ ВЫРАЩИВАНИЯ КЛУБЕНЬКОВЫХ БАКТЕРИЙ, включающая источники углерода, азота, минеральные соли, ростовые вещества, стабилизатор рН и воду, о тличающаяся тем, что, с целью обеспечения возможности выращивания на ней быстрорастущих и медленнорастущих клубеньковых бактерий, а также повышения их титра, в качестве источника углерода, азота, минеральных солей и ростовых веществ она содержит сапропель, а в качестве стабилизатора рН - углекислый кальций при следующем соотношении компонентов, мас.%: Сапропель (в расчете на сухое вещество)0,5-2,5 Углекислый кальций 0,01-0,05 ВодаОстальное