Среда для выращивания клубеньковых бактерий Советский патент 1984 года по МПК C12N1/20 

со о

изобретение отнсюится к сельскохо зяйственной и технической микробиоло гии И может быть использовано npti производстве йнокулянтовдля бобовых культур. . в связи с расширением п)оизв6дства препаратов клубеньковых бakтepий в СССР возникает необходимость изыскания рациональных питательных сред для культивирования клубеньковых бактерий с использованием доступных и стандартных субстратов, обеспечивающих получение высоких титров клубеньковых бактерий в единице объема ферментационной жидкости. . В настоящее время в качестве источника органического азота И физиологически активных feemecTB для выращивания клубеньковых бактерий в производственных условиях Используют различные экстракты. Известна питательная среда, содержащая в качестве источника орга нического азота и физиологически активных веществ бобовый и дрожжевой экстракты. Однако они представляют собой нестандартные продукты помимо того, стоимость их довольно высока ti Известна среда, содержащая в указанном качестве кукурузный экстрак±С Однако он также не является стандартным продуктом, что исключает Возможность получения стандартизированной (по органическому азоту пита тельной среды. Кроме того, в кукуруз ном экстракте содержатся летучие органические кислоты, ингибирующие клубеньковых бактерий, что препятствует накоплению максимального их титра, кукурузный экстракт являет ся сравнительно дефицитным сырьем, и поиск его заменителей актуалек. Целью изобретения является стандар тиз.ация среды и повышение титра клубеньковых бактерий. Поставленная цель достигается тем, что среда для выращивания клу беньковых бактерий, содержащая ме лассу, источник органического азота и физиологически активных веществ, . сернокислый аммоний, фосфорнокислый однозамещенный калий, фосфорНокисль й двузамещенный калий, сернокислый магний, мел и воду, в качестве источ ника органического азота и физиологически активных веществ содержит сухой ферментолизат кормовых дрожжей полученный с помощью ферментного препарата из Actinomjrces rutgersensi 88, при следующем соотношении компонентов, г/л: Меласса20,0-30,0 Сернокислый аммоний. 0,5-1,0 Фосфорнокислый однозамещенный калий0,25-0,5 Фосфорнокислый дву 3 амеще н ный калий О,25-0,5 Серно йслый магний012-0,3 Мел1,0-3,0.. Сухой ферментолизат кормовых дрожжей 2,0-5,0 Вода , Остальное Культивирование медленно растущих клубеньковых бйктерий сои и люпина и быстрорастущих клубеньковых бактерий гороха и люцерны. П р и м е.р 1. Культуру клубеньковых бактерий сои (шт. 646) выращивали в жидкой питательной среде состава,.г/л: меласса 20,0j сернокислый аммоний 0,5; фосфорнокислый однозамещенный калий 0,5j фосфорнокислый двузамещенный калий 0,5 сернокислый магний 0,2; мел 2,0 ферментолизат BBKi5,0. Выращивали клубеньковые бактерии сои в колбах и бутылях с 2;О л питательной среды на качалке при 22S6 об/мин при 28-30t ё течение 72 ч. Получили титр в культуральной жидкости 26,3 млрд/мл бактерий. В контрольной среде ( с кукурузным экстрактом/ титр был 17.7млрд/мл бактерий. . П р и М е р 2. Культуру клубеньковых бактерий люпина (шт. 363а выращивали в жидкой питательной среде состава, г/л; Меласса 30,0; сернокислый аммоний 1,0; фосфорнокислый однозамещенный калий 0,5; фосфорнокислый двузал ещенный калий 0,5} сернокислый магний 0,2; мел l,5j ферментолизат БЕК 3,0. Выращивание культуры проводили в колбах и бутыляХ с 2,0л питательной среды на качалке при 220 об/Мин при 28-30°С в течение 90 ч. Получили титр в культу-, ральной жидкости 23,0 млрд/мл бактерий, в контрольной среде титр был 15.8млрд/мл бактерий. Примерз. Культуру клубеньковых бактерий гороха (шт.250а) выращивали в жидкой питательной среде состава, г/л: меласса 30,0; сернокислый аммоний 0,5; фосфорнокислый однозамещенный калий 0,25; фосфорнокислый двузамещенный калий 0,25; сернокислый магний 0,2; мел 3,0; ферментолизат БВК 4,0. Выращивали клубеньковые бактерии гороха в колбах и бутылях с л питательной среды, а также в ферментаторах в течение 28-42 ч при 28-30 с. Получили титр в культуральной жидкости -.. . 19,7 млрд/мл, в кольнтройьной среде (с кукурузным экстрактом) титр был 12,5 млрд/мл бактерий гороха. Пример 4. Культуру клубеньковых бактерий люцерны (шт. 425а ) выращивали в жидкой питательной среде состава, г/л: меласса 20,0; сер311003нокяслый аммоний 1,0 фосфорнокислый одноэамещенный калий 0,25; фосфорнокислый двуэамещенный калий 0,25; сернокислый магний 0,3; мел :., . 1,0 ферментолизат БВК 2,0. Выращивание культуры клубеньковых бактерий люцерны проводили в колбах и бутылях с 1,5 л питательной среды на качалке при 220 об/мин при 28-30 С в 07 течение 30-40 ч а также в ферментаторах. Получили титр в культуральиой жидкости 38 мпрд/мл, в контрольной среде титр был 19,8 млрд/мл бактерий люцерны, Применение изобретения позволяет повысить титр клубеньковых бактерий в ферментационной жидкости на 45-60%.

СРЕДА ДЛЯ ВЫРАЩИВАНИЯ КЛУБЕНЬКОВЫХ БАКТЕРИЙ, содержащая мелассу, источник органического азота и физиологически активных веществ, сернокислый а1.1моний, фосфорнокислый однозамещенный калий, фосфорнокислый двузамещенный калий, сернокислый магний, мел и чоду отличающаяся тем, что, с целью стандартизации среды и повышения титра клубеньковых бактерий, в качестве источника органического азота и физиологически активных веществ среда содержит сухой ферментолизат кормовых дрожжей, полученный с помощью ферментного препарата из Actinomyces rutgersensis 88, при следующем соотношении компонентов, г/л: Меласса20,0-30,0 Сернокислый аммоний0,5-1,0 Фосфорнокислый5J однозамещенный (Л калий0,25-0,5 Фосфорнокислый двуз амещенный калий0,25-0,5 Сернокислый магний 0,2-0,3 Мел1,0-3,0 Сухой ферментолизат кормовых дрожжей 2,0-5,0 ВодаОстальное