Способ сенсибилизации белковых частиц Советский патент 1982 года по МПК G01N33/50 

(5-1) акх:оГ) СЕИСИ пи ЛИЗАНИИ cn/iKODiiix ЧАСТИЦ

1

Изобретение относится к модинине и биологии и может быть иcгloльoot aнo для иммунохимических методов выявления антител к барбитуратам реакцией торможения пассивной гемагглютннат.и оп|.1еделе-. НИИ низких котсентраций оарвитуратов D биологических жидкостях, и также для изуче1шя фармакодинамики лекарственных препаратов ряда барбитуратовой кислоты.

Известен способ сенсибилизации белKOBf.tx частиц путем их инкубации с реакционно-способным ироизвоаным гапгена при рИ 7,О-9,0 и ОЧСРС i.

Однако 11зве :тный способ не позволяет повысить устойчивость белковых частиц.

Цель изобретения - повыше1ше устойчивости белкопььх частиц.

Указанная цель достигается тем, что способ се НС и бил и.:vi НИИ белковых частиц осуществляют njieM их инкубации с реакционн(х;нособ1Гым производным гаптена при рИ 7,0-0,0 и n-lff C, п качестве белкопых частиц ис11оЛ1 з ют эритроциты,

а в качестве реакционноспособных проиэводных гаптена - диазониевую соль п-амин од ифенилазоморфина, диазоноову ю соль п-аминоди(|)енилазоаминазина, хлор)- формнат 5-(1-метилбутил)-5- 2-окси пропил)-барбитуровой кислот1 г или диа- зониевую соль 5-этил-5-(м-амино-фоНИл)-барбИ7урОВОЙ кислоты в COOTHClUtfнии соответственно 4 .,5ч , ,0-10, 4,0-10- -8-10- . 8-1 ана 1,8-Ю эритроцитов, а инкубацию проводят в забу(1)ереш1ом трис-буфером иаоосматическом физиологическом растворе.

Пример.К суспензии 1 мл

IS lOO j-Hbix эритроцигои барана. (.If) клеток) в 40 мл трис-буфера (О,О2 f- трис, 0,15 М хлористый натрий, рН 88,5) добавляют при О-10 С О,1 мг (410 ммоля) диапониевой соли 5-этил205-(м-аминофенил)-барбитуровой кислоТ1 1, поддерживая 8,,5 дoбiaвлeни- ем 0,14 М раствора Тидроокиси натрия. Реакьлонную массу инкубируют при О10 с в течение 1 ч. Сонснбппнэ фованные эритроциты отмыилют поитрифугиро- ванием несксисжо раз трис-С5у()1пром до получения прозрашого ноокушиюнного супернатанта и хранят i 2,5/i-ной суспензии Б растворе, соде1 кпшем на 1 объем нормальной декомплементированной кролич1:,ей сыьоротки 74 объема раствора, приготовленного из расчета 1ОО ммолей глюкоз.1, 80 ммолей хлористого калия и 2О ммолей двузамещен- Tjoro фосфата натрия на 1 л дистиллированной воды, причем рН этого раствора доводят до 8,0-8,5 добавлением 1 М раствора соляной кислоты. Устойчивость сенсибилизированных ковалентным связыванием с фенобарбиталом эритроцитов определяют визуально по появле шю окраски в надосадочной жидкости. Окрашивание надосадочной жидкости набгаодают только на 8-9 после их получения,

П р и м е р 2. Процесс осуществляют аналогично примеру 1, но реакцию 1,8 tLО эритроцитов проводят с 1 мг (4 10 ммоля) свежеприготовленного раствора диазосоли 5-этил-5-(м-аминофенил)-барбитуровой кислоты. Устойчивость сенсибилизированных фенобарбиталом эритроцитом проводят как в примере 1. Окращи- вание надосадочной ленд кости не на блюд ается в течение 7 дней.

П р и м е р 3, Процесс осуществляют аналогично примеру 1, но реакцию 1,8 эритроцитов барана проводят с 2мг (8-10 ммоля) пиайосоли 5-этил-5-(м-аминофенил)-барбитуровой кислоты. Окрашивание падосадочной жидкости, в которой хранят эритроциты, не наблюдают в течетю 8-9 /шей с момента . их приготовления.

Предлагаемый способ позволяет повыси ь устойчивость белковых частиц.

Формула изобретения

Способ сенсибилизации белковых частиц путем их инкубации с реакционноспособным производным гаптена при рН 7,О9,0 и 0-10° С, отличаюши йся тем, что, с целью повьидения устойч1шос- ти белковых частиц, в качестве белковых частиц используют эритроциты, а в качестве реакционноспособных производных гаптена - диааониевую соль п-аминодифенилазоморфина, диазониевую соль п-аминодифенилазоаминазина, хлорформиат 5( 1-метилбутил)-5-(2-окси-пропил)-барбитуровой кислоты или диаэонневую соль 5-этил-5-(м-ам1шо-фенил) -барбитуровой кислоты в соотношении соответственно -8 -10-, 1,5-10- -2,0.-10- 4,010; -810- 4 1,8 «10 эритроцитов, а инкубацию проводят в забуференном трис-буфером изоосм тпческом физиологическом растворе.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Ковалев И. Е., Полевая О. Ю., Башарова Л. А. и Шайдров В. В. Химикофармацевтический журнал, М., 1977,№ 5 с. 13-14.