Хлориды хинолинотиазолохиноксалиния, проявляющие антипротеолитическую активность Советский патент 1990 года по МПК C07D513/14 A61K31/429 A61K31/4738 A61K31/4985 A61K31/502 A61K31/5025 A61P7/04 

1 . 1 Изобретение относится к новым биологически активным соединениям, а именно хлоридам хинолинотиазолохино- ксалиния, проявляющим антипротеоли- тическую активность, которые могут найти применение в медицине. I Цель изобретения выявление новых свойств в ряду производных хинолино- тиазолохиноксалина.

Примеры, приведенные ниже, иллюстрируют данное изобретение.

Пример 1. Хлорид хинолино I ,2/:3,21тиазоло 4,5-Ь}хиноксали- ния (соединение I).

Смесь 0,32 г (2 ммоль) 2-меркапто кинолина и 0,40 г (2 ммоль) 2,3-ди- хлорхиноксалина нагревают в 5 мл муравьиной кислоты при 100°С 15 мин. Раствор охлаждают, добавляйт 5 мл ацетона и 10 мл эфира. Продукт отфильтровывают, проь1ывают ацетоном. Выход 0,61 г (85%), т.пл. 300°С.(с разл,).

Найдено, %: С 63,0; Н 3,0; С1 11,0; N 13,0; S 9,9 С,, H,,ClNJS.. Bычиcлeнo, %: С 63,2; Н 3,1; С1 11,0; N 13,0; S 9,9. .

Максимум поглощения в СН СООН: 400 (4,33), 414 (4,39) нм. Спектр ПМР (CFjCQOD, ГМДС - внешний эталон) 7,9-8,6 м. (8Н), 8,83 д (IH, Гц) 10,80 д .(Ш Гц), м.д.

О р и .м е р 2. Хлорид 5-метилхи- нолино l ,2 :3,2 тиазоло 4,5-Ь хинок сали1}ия (соединение 2).

Смесь 0,35 г (2 ммоль) 2-меркапто лепидина и 0,40 г (2 ммоль) 2,3-ди- хлорхиноксалина нагревают в 5 мл му- равьиной кислоты при 100°С 15 мин. Раствор охлаждают и к нему добавляют 5 мл ацетона, а затем 10 мл эфира., Продукт отфильтровывают, промывают ацетоном. Выход 0,6 г (83), т.пл. (с разл.).

Найдено, %: С 64,0; Н 3,5; С1 10,5J N S 9,5 С, H,C1N,S.

Вычислено, %: С 64,1; Н.3,6; С1 10,5; N 12,5;.S 9,5.

Максимум поглощения в , нм (1 е): 395 (4,40), 410 (4,51). Спектр ПМР (CFj СООН, Г МДС - внешний эталон): 2,73 с. (ЗН), 7,7-8,6 м. (7Н), 10,80 д, (1Н, Гц).

Биологические испытания соединений i и 2 на антипротеолитическую активность.

1 -.V

Лнтипротеазная актипиость изучается в опытах in vitro методом измерения степени тормрження реакции гидролитического расщепления казеина, катализируемой трипсином или химо.- трипсином. Для определения казеино- литической активности трипсина использовали метод К.Н.Веремеенко.

Для определения казеинолитической активности трипсина в пробирку на 20 мл добавляют 1,5 мл 0,05 М фосфатного буфера, рН 7,6 и 0,5 мл раствора трипсина в 0,05 М фосфатном буфере, рН 7,6 (содержание белка 14мкг/мл Преинкубацию проводят при комнатной температуре в течение 15 мин. Затем добавляли 1,0 мл 2%-ного раствора казеина по Гаммерстену в 0,05 М фосфатном буфере, рН 7,6,- котЬрый готовят путем растворения 2 г казеина в 80 м 0,05 М фосфатного буфера, рН 7,6, при нагревании на водяной бане при 70-80 С в течение 30 мин с последующим охлаждением, доведением рН до зна- чеЯия 7,6 с помощью 0,1 н NaOH (контроль величины рН проводят на рН-мет ре со стеклянным электродом) и дове- дением объема др 100 ш. Инкубацию проводят в течение 15 мин при на водяной бане со встряхивателем. По окончании инкубации реакцию останавливают добавлением 2 мл 5%-ного трихлоруксусной кислоты. Через 1-1,5 ч после окончания реакции осадок белка удаляют центрифугированием при 1000 g в- течение 15 мин и измеряют оптическую плотность над- осадочной жидкости на спектрофотометре СФ-4Л при длине- волны 280 нм против контроля, который обрабатывают сходным образом, но 0,5 мл трипсина вносят после добавления трихлоруксусной кислоты. Полученное значений экстинкции Е используют для вычисления ингибирующей активности испытуемых веществ.

Дпя определения ингибирующей активности соединений в пробирку вносят О, 10 (0,25, 0,50, 1,00, 1,50) мл раствора испытуемого вещества (1000 мкг/мл) в 0,05 М фосфатном буфере, рН 7,6 и тот же буфер до общего объема 1,5 мл, 0,5 мл растрора трипсина в 0,05 М фосфатном буфере, рН 7,6 (содержание белка 14 мкг/мл). Затем пробы обрабатывают так же, как и в случае определения казеинолитической активности трипсина. Контроль

-13258

такой же, но трипсин вносят после добавления трихлоруксусной кислоты.

Степень иигибирования вычисляют по формуле

Г Степень ингибирования (1- --) ч

«100,%,

где Ед и- Ец - оптические плотности ра- Q створов в прис-утствии и в отсутствии испытуемого вещества соответственно.

Для определения казеинолитической активности химотрипсина вместо трипсина вносят 0,5 мл химотрипсина (1А мкг белка в 1 мл 0,05 М фосфатного буфера, рН 7,6).

Соединение 1 0,59(0,58-0,60) 0,24(0,23-0,25) Соединение 2 0,30(0,28-0,3-2) 0,32 (0,30-0, ЗА) Амбен 7,3(6,6-8,0) 4,7(4,6-А,8)

Полученные данные свидетельствуют, что ингибирующая активность соединений 1 и 2 в реакции трипсин-казеин больше таковой амбена в двенадцать раз для соединения ,1 и в двадцать четыре раза - для соединения 2. Соответствующие значения для реакции хи- мотрипсин-казеин 20 и 15 раз.

Изучение токсичности испытуемых соединений I и 2 дпя теплокровных животных проводят на мьшах путем внутрижелудочного введения водных суспензий веществ. Установлено, что испытанные соединения I и 2 малоРедактор Т.Шагова

Составитель С.Кедик Техред Л.Сёрдюкова

Заказ 2491 Тираж 335Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР

по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

„Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4

5

/J

Сравнение препаратов проводят с аналогом по действию, в качестве которого избран амбен. Определение анти- протеазной активности амбена прово-- дят так же, как и. испытуемых веществ, но концентрация амбена во вносимом растворе 3 мг/мл.

В качестве величит, характеризующей ингибиторные свойства веществ и позволяющей сравнить зти свойства у различных веществ, принимается величина ECjj , т.е. концентрация вещества, для которой Степень ингибирования:, 50%. Полученные результаты представ- . лены в таблице ( в скобках приведены значения ECj полученные в двух определениях ).

ЗЬ

токсичны для белых пышей, величина превышает 500 мг/кг.

Формула изобретения

Хлориды хинолииотиазолохиноксали- ния общей формулы

N ®

r Y-N-V Cl

ЧА А А

N

где R - атом водорода или метил, проявляющие антипротеолитичбскую активность.

Корректор Л.Патай

Изобретение относится к гетероциклическим соединениям, в частности R хлориду 5-метил-(1) или хинолйно П ,2 :3,2)тиазоло(4,5-Ь)хиноксалиmшm3iiл , JHfiMEIKAl &ИБ/;ИОТЕ А иия (II), которые проявляют аи.типро- теолитическую активность и могут быть использованы в медицине. Для выявления, новых свойств среди соединений указанного класЪа были получены новые I и II. Их синтез ведут из 2-меркап- тохинолина или 2-меркаптолепидина и 2,3-дихлорхиноксалина в среде муравьиной кислоты при 100°С в течение 15 мин. Продукт отфильтровывают и промывают ацетоном. Выход, %, Т.пл. С: I - 85,300 (с разл.); II - 83,300 (с разл.). Ингибирующая активность- I и 11 в реакции трипсин-казеин выше, чем у амбена в 12 раз для 1 и в 24 раза для II, а соотв.етствуюп е значения для реакции химотрипсйн-ка- зеин составляет 20 и 15 раз. I и II - малотоксичны, их LD 50 превьппает 500 мг/кг.живой массы. I табл. g (Л lOO N5 СП ;00 vi