Способ получения диастереомера N-[3-хлор-4-(2-хлор-этилтио)-бутаноил]-L-фенилаланина Советский патент 1992 года по МПК C07C323/59 A61K31/198 A61P35/00 

Изобретение относится к способу получония нового оптически активного произродного фенилаланина, диастерео- мера N- З-хлор- - (2-хлорэтилтио)-бу- таноил -L-фенилаланина формулы

(С1СНгСН25)-СНгСН(С1ЬСНгСОЫН-Ш-СООН

СНгСбНб °

обладающего противоопухолевой активностью.

Он может найти применение в меди- цине и для лечения экспериментальных опухолей.

Целью изобретения является получение с высоким выходом оптически чистого производного ф6н1шалан1гаа, обладающего более высокой противоопухолевой активностью.

Изобретение илтпострируется следующими примерами.

П р и м е р 1 .

а) Ацилирование L-фенилапанина.

К раствору 16,52 г (0,1 моль) L-фенилаланина в 60 мл 2 н. раствора NaOH при перемешивании одновременно прибавляют по каплям 10,4 г (О, 1 моль) хлорангидрнда винипуксусной кислоты и 5 н. раствор NaOH при 0-(-5)°С и рН 8-9 (по универсальному индикато- ру). Полученную смесь разбавляют 50 мл хлороформа и перемещива}от при комнатной температуре 1 ч, подкисляют концентрированной НС1 (по Конго), органический слой отделяют, водный слой экстрагируют хлороформом. Экстракт сушат MgSO, упаривают, остаток в виде масла обрабатывают четыреххлори- .стым углеродом и образующееся твердое вещество кристаллизуют из смеси CHClj и СС1 (2:1). Получают Ы-випилаце- тип-Ь-({)енилаланин (14,0 г), т. пл.

108-115 С, выход 60%, удельное вращение («ч -«-78° (диоксан, с 0,84) (поляриметр Perkin Elmer 141).

Найдено, %: С 67,28; Н 6,17; N 6,01,

С„Н,, NOj.

Вычислено, %: С 66,94; И 6,48; N 6,00.

ПКР-спектр снят на приборе Hitachi R-22 (90 МГц) в D-ацстоне, внутренний стандарт - ТМДС, S , м.д.: 3,2-2,7 м (2Н, CHjCO), 4,71 м(1Н,СН), 5,0 м (1Н, :СН), 5,7 м (2Н, СН.), 7J с ,(5Н, ,).

°

ц

-,„

25

3035 40 5

50

55

1232

Лип;тогично ацилируют П-феничлпа- нин. Получают Ы-винилацетил-П-фенил- аланин (12,8 г), т.пл. inS-IH C, выход, 55%, удельное вращение (у, 1, -77,7° (диоксан, с 0,72).

Найдено, %: С 67,20} К 6,29, N 5,85.

ПМР-спектр в аналогичных условиях совпадает с IIMP-спектром ацилирован- ного L-фенилаланина.

б) Присоединение 2-хлорэтипсуль- фенхлорида.

К раствору 23,32 г (0,1 моль) полученного в пункте а) N-винилацетил- -L-фенилаланина в 100 мл абсолютного хлороформа при (-20)-(-25)с прибавляют по каплям 13,1 г (0,1 моль) 2- -хлорзтнлсульфенхлорида в 30 мл че- тыреххлористого углерода. Выпавший осадок отфильтровывают и подвергают фракционной кристаллизации из абсо- хпотного, эфира. Выделяют диастереомер N- 3 -лор-4-(2-хлорэтилтиС|)-бутано- ил -L-фенилаланина (I) (14,5 г), т.пл. 116-117 С, выход 80%, удельное вращенип сг ° +64,7° (диоксан, с 0,50).

ГГМР-спектр в D-ацетоне, внутренний стандарт - ТМДС, & , м.д.: 4,32 м (1Н, СНС1), 4,01 м (1Н, СН), 7,12 с (5Н, С,нр.

Алалогргчно получают N- 3-хлор-4- -(2-хлорэтилтио)-бутаноил1-0-фенил- (111) (14,5 г), т.пл. 115- 117 С, выход 80%, удельное вращение Го4., -65,01 (диоксан, с 0,51).

ПМР-спектр в D-ацетоне, внутренний стандарт - ТМДС, , м.д.: 4,32 м (1Н, СЯС1), 4,01 м (1Н, СН), 7,12 с (ЗН, ,).

И зумение физиоло1П1чоской активности.

О токсичности соединений судили по величине дозы, вызывающей 100%-ную гибель животных (ЛД, ), максимально переносимой дозе (МПД) и по изменению массы тела и селезенки. Токсичность определяли на белых беспородных крысах-самках с массой тела 100-120 г. Препараты вводили суспендированными в растительном масле, внутрибрюшинно.

Пропшоопухолеаую активность (ПСА) соединений I-III определяли на крысах с привитой карциносаркомой Уокера (КСУ), саркомой М-1 (С-М-1), опухолью яичника (ОЯ), лимфосаркомой Плисса (ЛП) и на линейных мыгаах С siBl с карциномой легких Льюиса (LLS). В

ппытах испо.пьзпвамо 330 крыг и) 30 мышей J Об тффективности 11емстния судшш по торможению роста опухоли и изменению массы тела и селезенки.

Результаты биологическ1те исследо- вант соединаний T-I1I и пигроко используемого в медицине сарколизина приведены в табл. 1.

Из табл. 1 следует, что соединение I по токсичности не уступает II и соответствующему производному D-(}K Н11Лаланина , величины ДЦ ,од и МПД для всех соединениз одного порядка, а отрицательное влияние на массу селезенки оказывает только вещество II (-15,7 и -1,6%), на массу тела в зависимости от штамма опухоли ire3fia- чительно влияют псе три соединения. В то же время соединение I намного превосходит сарколпз1Ш и по величине ЛД,цд , МПД и по влиянию на массу селезенки.

Противоопухолевая активность пред- ложенного соединения I на всех штаммах опухолей в терапевтических дозах вьппе, чем ПОЛ соединения II и производного D-фенилаланина III, Наиболее высокую, достигающую 98,3

II (из- 120

вестный

рацемат)

90 8 X 30КСУ68,,01-15,7+3,0

10 X 20ЛП66,,05-«-35,4+1,9

10 X 20С-М-132,,1-1,6+2,7

J X 25LLS36,,1+26,8-2,7

и 95,5%, активность оно проявляет в отношении ттаммов опухолей КСУ и ОЯ соответственно, а в отношенш ттамма ЛТ1 - превосходит даже сарколизин (результаты 67,9 и 61,0% соответственно получены в одном опыте на крысах).

Данные по изучению действия соединений I-III на число лейкоцитов крови у крыс с лимфосаркомой Плисса приведены в табл. 2,

Из табл. 2 следует, что число лейкоцитов после 10 сут возвращается к норме быстрее в случае применения соединения I (-27,9%), чем рацемата (35,2%).

Формула изобретения

Способ получения диастереомер а N-р-хлор-4-(2-хлорэтилтио)-бутано- Ш -Ь--фенилаланина, отличаю-. m и и с я тем, что Ы-винилацетил-Ь- -фсиилаланин подвергают взаимодействию с 2-хлорэтилсульфенхлоридом в смеси хлороформа и тетрахлорметана при (-20)-(-30)С, выпавший осадок .отфильтровытк ют и фракционной кристаллизацией из эфира выделяют индивидуальный диастереомер.

Таблица 1

III120 90 8x30 КСУ60,5 0,01 -i-20,0 -1,0

10 X 30 ЛП37,3 0,5 +12,3 -5,3

10 X 30 С-М-118,6 0,3 ,7 О

Сарколиэин

IVЛД

17-23 12 10 X 2,3 ЛП61,0 ,05-28,4-2,7

...,„., . ..«. М.4 ,«„--. ----«-- -.- -.---

ТД - терапевтическая доза.

Таблица2

Контроль1

11 III

16,3 ± 1,5 - - 25,7±2,3 - - 25,8+2,А «

15 9,6 + 0.9 -Д1,1 0,01 15,7+ 2,А -38,9 0,02 18,6± 1,0 -27,9 0,02 20 10,0 ± 0,7 -386 0,01 15,4+ 1,3 -40,0 0,01 16,7± 1,7 -35,2 0,01 30 43,0 + 0,7 -20,2 0,5 18,0+ 2,0 -29,9 0,05 20,7+ 2,1 -19,7 0,2

Редактор Е.Корина

Составитель Л.Иоффе Техред А.Кравчук

Заказ 2311ТиражПодписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР

по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4

Продолжение табл.I

Корректор Л.Бескид

Изобретение касается замещенных аминокислот, в частности способа получения диастереомера N- З-хлор-4- -(2-хлорэтиптио)-бутаноил -L-фенил- алаланина (ФА), который обладает про тивоопухолевой активностью и может быть использован в медицине. Цель - разработка способа получения ФА, имеющего лучшую активность, чем известный сарколизин. Синтез ФА ведут из М-винилацетил-Ь-фенилаланина и 2-хлор- этилсульфенхлорида в среде смеси СНС1, и СС1 при (-20)-(-30)Ч с пос- лед тощим отделением осадка и его фракционной кристаллизацией из эфира. Выход ФА 60%, т. пл. 108-115°С; , +78° (диоксан, концентрация 0,84). Испытания показывают, что ФА после 10 сут быстрее восстанавливает норму числа лейкоцитов (-27,9%), чем рацемат (35,2%). В отношении штамма ЛП наблюдается лучшая активность ФА, чем сарколизина. Токсичность ФА (LD|oo ) составляет 100 мг/кг против 120 для рацемата и LDj сарколизина 17-23 мг/кг. 2 табл. с (Л