Способ определения фагоцитарной активности крови рыб Советский патент 1987 года по МПК G01N33/48 

Изобретение относится к способам контроля реакции иммунитета рыб с использованием микроорганизмов.

Целью изобретения является повышение точности определения активности фагоцитоз а „

Поставленная цель достигается тем, что, согласно способу определения активности фагоцитоза лейкоцито в рыб, включающему добавление к стабилизированной крови рыб взвеси микробов, инкубацию полученной смеси с последующим подсчетом количества микробов, захваченных лейкоцитами, используют взвесь Aeromonas hydrophi la, инкубацию проводят при 29-31°С, а активность определяют по количеству микробов, фагоцитированных 25-ю лейкоцитами

Пример Из хвостовой вены .рыбы берут 0,25 мл крови и смешивают ее в пробирке с 0,25 мл 2%-ного раствора лимонно-кислого натрия. Затем .туда же добавляют 0,25 мл двухмиллиардной взвеси Aeromonas hydrophila. Пробирку со смесью помещают на 25 - 30 мин в водяную баню с температурой 30, После прогревания для остановки фагоцитоза добавляют 1 каплю 1%- ной осьмиевой кислоты, смесь центрифугируют, затем осторожно пипеткой отсасывают надосадочную жидкость. Каплю верхнего -слоя образовавшегося осадка, состоящего из лейкоцитов, на носят на предметное стекло, делают, мазки. Мазок высушивают на воздухе, фиксируют смесью Никифорова, окрашивают -по способу Романовского Окра- шенный мазок микроскопируют, подсчи- тывая при этом количество микробов, фагоцитированных 25-ю лейкоцитами, находящимися в различных полях зрения о

Для упрощения и ускорения подсче- та используют балльную систему оценки сшпз фагоцитоза, представленную в табл. .

В зависимости от количества балло

делают вывод о состоянии рыбы: 10-15 баллов - слабоположительная реакция, характерная для ослабленной особи; 16-25 баллов - положительная реакция свойственная здоровым особям; более 25 баллов - резко положительная реакция, свойственная здоровым особям,

Для данного примера: в 6-ти лейкоцитах нет фагоцитированных 1 шкробов,

в 8-ми - 1,2 фагоцитированных микроба, в 10-тя - 4-6 фагоцитированных микробов, в 1-ом 9 фагоцитированных микробов„

По табл. 1 выводят цифровой показатель фагоцитоза в баллах: 0x6 0; 1 X 8 8; 2 X 10 20; 1 X 3 3.

Общее количество баллов 31 о Вывод: резко положительная реакция

В табл. 2 представлены данные определения фагоцитарной активности крови рыб.

Формула изобретения

Способ определения фагоцитарной активности крови рыб, включающий добавление к пробе крови взвеси микробов, инкубацию полученной смеси с последующим подсчетом количества микробов, захваченных лейкоцитами, .отличающийся тем, что, с це- лью повьшения точности способа, используют взвесь Aeromonas hydrophila, а инкубацию проводят при 29-31 С,

Таблица 1

Количество фагоцитированных микробов в одном лейкоците

1-3 4-7 8-10 не более

- количество лейкоцитов,

Таблица 2

М + m

а

(t

(t (t

)

30 О )

+ 2,51 + 2,31

18,8 19,8 19,3 4- 2,46 17,7 + 3,92

Изобретение относится к способам контроля реакции иммунитета рыб с использованием микроорганизмов. Цель изобретения - повьппение точности определения активности фагоцитоза лейкоцитов. Для этого из хвостовой вены рыбы берут 0,25 мл крови и смешивают ее в пробирке с 0,25 мл 2%-ного раствора лимонно-кислого натрия. Затем туда же добавляют 0,25 мп двухмиллиардной взвеси Aeromonas hydrophila. Проводят инкубацию смеси при 29-31 С 25-30 мин. Фагоцитарную активность определяют по количеству микробов, фагоцитированных 25-ю лейкоцитами. 2 табл. 00 00 to ю ю Oti