Способ выявления антител Советский патент 1990 года по МПК G01N33/53 

Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии.

Целью изобретения является повы- .шение точности выявления антител при помощи агглютинационных реакций.

Пример 1. По предлагаемому способу исследуемую на антитела к шигеллам Зонне пробу сыворотки титруют в объеме 0,05 мл в 0,85%-ном растворе NaCl, содержащем 0,03% бычьего сывороточного альбумина. Во все разведения пробы и контроль (0,05мл растворителя) добавляют по 0,025 мл 0,5%-ной взвеси антигенного диагностикума Зонне И2 эритроцитов барана. Сенсибилизирующая зона антигена для этого диагностикума - 6,25 мкг/мл (оптимальная доза антигена для приготовления диагностикума, используемого в РПГА, - 50 мкг/мл). Через 15 мин в

эти же лунки добавляют по 0,025 мл 0,5%-ного антительного диагностикума Зонне из куриных эритроцитов. Учет реакции проводят через 90 мин при агглютинации в контроле. Титром реакции является максимальное разведение сыворотки, дающее задержку гемагглюти- нации.

По известному способу определяли антитела при помощи РПГА с использованием антигенного диагностикума, приготовленного с оптимальной дозой сенситина - 50 мкг/мл. Титром реакции является максимальное разведение сыворотки, дающее агглютинацию. Каждое определение повторяли 8 раз.

Полученные результаты приведены в табл.1. Видно, что чувствительность предлагаемого способа почти в 3 раза выше, чем известного, точность пред5Л

го & го

&л

лагаемого способа, оцениваемая по разбросу результатов измерения (коэффициент варьирования), совпадает с точностью известного способа.

Пример 2. По предлагаемому способу определяли в сыворотке крови антитела к Toxoplasma gondii с использованием антигенного эритроцитар ного диагностикума, приготовленного с дозой 62,5 мкг/мл сенситина, и антительного эритроцитарного диагностикума. В остальном способ осуществляли, как в примере 1.

По известному способу определяли антитела при помощи РПГА с использованием антигенного эритроцитарного диагностикума, приготовленного с оптимальной дозой - 250 мкг/мл.

Каждый опыт повторяли 8 раз. Результаты приведены в табл.2.

Видно, что чувствительность предлагаемого способа в 3 раза выше в сравнении с известным, а точность обоих способов не различается.

Пример 3. Выбор оптимальной дозы антигена-сенситина Зонне для приготовления антигенного эритроцитарного диагностикума, используемого в предлагаемом способе. Способ осуществляли, как в примере 1, но использовали серии антигенного диагностикума, полученные с разными (1,6- 100,0 мкг/мл) дозами сенситина. Параллельно применяли известный способ Каждый опыт повторяли 4-8 раз. Результаты приведены в табл.3.

Оптимальной дозой антигена для известного способа является та минимальная доза сенситина, которая обеспечивает получение максимального титра агглютинации, а для предлагаемого способа - та минимальная доза сенситина, которая обеспечивает получение максимального титра задержки агглютинации. Видно, что оптимальней до

0

5

0

5

0

5

зой Зонне для известного способа является 50 мкг/мл. Лучшие результаты предлагаемого способа получены с ди- агнрстикумами, приготовленными с антигенами, взятыми в дозе в 4 и 8 раз меньшей (12,5 и 6,25 мкг/мл), чем доза, оптимальная для агглютинации диагностикума антителами. С дозой 3,1 мкг/мл в контроле слабая агглютинация, а с диагностикумом, приготовленным с дозой антигена 1,6 мкг/мл, агглютинация эритроцитов в контроле отсутствует. Следовательно, при двух последних дозах антигена-сенситина предлагаемый способ невыполним. Таким образом, оптимальная чувствительность предлагаемого способа обеспечивается применением антигенного диагностикума на бараньих эритроцитах, приготовленного с антигендм в дозе в 4-8 раз меньшей оптимальной для агглютинации диагностикума антителами.

I

Таким образом, предложенный способ обеспечивает более высокую чувствительность определения антител при помощи реакции агглютинаиионного типа при сохранении высокой специфичности и точности определения.

Формула изобретения

Способ выявления антител путем добавления к исследуемой сыворотке бараньих эритроцитов, сенсибилизированных специфическим антигеном, с последующей оценкой результатов в реакции пассивной гемагглютинации, отличающийся тем, что, с целью повышения точности способа, через 10-15 мин после добавления бараньих эритроцитов вносят куриные эритроциты, сенсибилизированные тем же антигеном, причем для сенсибилизации бараньих эритроцитов используют антиген в 4-8 раз уменьшенной дозе. I

Таблица 1

Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии. Цель изобретения - повышение точности выявления антител. Способ осуществляется следующим образом. В исследуемую пробу вносят эритроцитарный диагностикум из бараньих эритроцитов, приготовленный с уменьшенной в 4-8 раз дозой антигена в сравнении с оптимальной дозой антигена, а через 10-15 мин - антительный диагностикум из куринных эритроцитов той же специфичности. Положительный результат учитывают по отсутствию агглютинации эритроцитов.

Известный 6017± 1 ,1 Предлагаемый

17440t 1,1

Р« 0,001

3,1± 0,8 2,9± 0,7

0,9 Р 0,8

Известный 2560 ±1,1 ПредлагаемыйР«0,00

7674±1,1

Способ

Средний титр антител при сенсибилизирующей дозе антигена, мкг/мп

100 I 50 I 25 1 12,5 j 6,2 Г 3,1 1 1,

Известный64001165 6400±1, 1600Я,3 800+1,0600±1,2Отр.

Предлагаемый Отр.

Отр.

4800±1,2 I9200±,2 19200il,2 1920011,3 Слабая

аггл. в контроле

Нет задержки агглютинации эритроцитов. Нет гемагглютинации в контроле.

Таблица 2

4,8±1,2 3,3±0,8

0, 0,3

Таблица 3

Отр.

«