Способ количественного определения N-ацетилглюкозоаминил-N-ацетилмурамовой кислоты Советский патент 1987 года по МПК G01N31/16 

Изобретение относится к биохимии микроорганизмов, в частности к способам количественного определения диса- харидов.

Цель изобретения - повышение чув- ствительпости способа за счет предварительной обработки образца 0,45- 0,55 М кислотой при 95-100 С в течение 15-20 мин.

Пример 1. 2,13мг дисахарида (с содержанием основного вещества по способу ТУ 86,0%) помещают в колбу вместимостью 25 мл, добавляют 5 мл 0,45 М раствора НС1, колбу помещают ,в водяную баню и гидролизиругат при 99 С в течение 20 мин. После охлаждения добавляют раствор NaOH до рН 6,9,

П р и М е р 3. 2,98 мг дисахарида помещают в колбу вместимостью 25 мл, добавляют 5 мл 0,50 М раствора НС.104, колбу помещают в водяную баню и гиддоБодят обьем колбы до метки дистиллированной водой. Из нриготовленного 20 ролизируют при 100 С 18 мин. После раствора в химические пробирки со шли- охлаждения добавляют раствор NaOH до фом берут по 0,5 мл, добавляют 0,1 мл

рН 7,5, доводят объем раствора в кол бе до метки дистиллированной водой. Из приготовленного раствора в химираствора тетрабората калия, закрывают пробками и выдерживают 5,5 мин при.

100 С. После охлаждения до комнатной 25 ческие пробирки со шлифом берут по

температуры добавляют 3 мл раствора п-диметиламинобензальдегида и выдерживают в термостате 20 мин при 37 С. После охлаждения до комнатной температуры измеряют оптическую плотность при 583 нм относительно холостого опыта, содержащего вместо анализируемого раствора 0,5 мл дистиллированной воды. Сох ласно Р змеренной оптической

плотности ,322 по градуировочному gg руемой пробе

графику находят концентрацию дисахарида ,037 мг/0,5 мл.

Содержание дисахарида в анализируемой пробе

Х- O OJ -llllOO -86 97 2,13-0,5 ь,У/о.

Относительное стандартное отклонение +,2%. Расхождение между наиболее отличающимися значениями трех параллельных определений +2,0% (абс.).

П р и М е р 2. 2,45 мг дисахарида помещают в колбу вместимостью 25 мл, добавляют 5 мл 0,55 М раствора НС1, колбу помещают в водяную баню и гид40

0,0515.25-100 2,98.0,5 Относительное стандартное отклонение + 1 ,8%.

ормула изобретения

Способ количественного определения N-ацетилглюкозoaминил-N-aдeтил- , 45 мурамовой кислоты, включающий обработку образца тетраборатом кал.ия и п-диметиламинобензальдегидом с последующим фотометрированием, отличающийся тем, что, с це- ролнзируют при 97 с 15 мин. После ох- 50 повьшения чувствительности, об- лаждения добавляют раствор КОП до рН разец предварительно обрабатьшают 6,5, доводят объем колбы до метки 0,45-0,55 М кислотой цри температу- дистиллнрованной водой. Из приготов- ре 95-100 С в течение 15-20 мин, ленного раствора в химические пробир- затем щелочью доводят рН до 6., 5-7,5, ки со шлифом берут но 0,5 мл, добав- gg а обработку тетраборатом калия прово- ляют 0,1 мл раствора , закрыва- дят в течение 5-6 мин.

втиПИ Заказ 4;213/33Тираж 776 . Подписное

Произв о-полигр, пр-тие, г. Ужг ород, ул. Проектная, 4

ют пробирками и выдерживают 5,0 мин при 100 с. Далее поступают но примеру 1 .

Согласно измеренной оптической плотности ,367 по градуировочному графику находят .концентрацию днсаха- рида ,042 мг/0,5 мл.

Содержание дисахарида в анализи- руемой пробе

0,042.25-100

2,45.0;5 Относительное стандартное отклонение il,5%.

П р и М е р 3. 2,98 мг дисахарида помещают в колбу вместимостью 25 мл, добавляют 5 мл 0,50 М раствора НС.104,, колбу помещают в водяную баню и гидролизируют при 100 С 18 мин. После охлаждения добавляют раствор NaOH до

ролизируют при 100 С 18 мин. После охлаждения добавляют раствор NaOH до

рН 7,5, доводят объем раствора в колбе до метки дистиллированной водой. Из приготовленного раствора в хими0,5 мл, добавляют 0,1 Мл раствора KjВО , закрывают пробками и вьщержи- вают 6,0.мин при 100 С. Далее поступают -по примеру 1.

Согласно измеренной оптической плотности ,453 по градуировочному графику находят концентрацию дисаха- рида ,0515 мг/0.,5 мл.

Содержание дисахарида в анализируемой пробе

0,0515.25-100 2,98.0,5 Относительное стандартное отклонение + 1 ,8%.

ормула изобретения