Способ индикации простагландина Е @ в биологических объектах Советский патент 1987 года по МПК G01N33/52 

1

Изобретение относится к области гистохимии и может быть использова для определения простагландина Ej (ПГЕ)) в тканевых .структурах.

Цель изобретения - повышение тоности способа.

Способ осуществляется следующим образом.

Препарат, исследуемый на наличи

nPEj, помещают под люминесцентный микроскоп, измеряют интенсивность флюоресценции с фильтрами, пропускающими свет с длиной волны 460 и 450 им, и при соотношении показателей интенсивности более 1 определяют наличие ПГЕ в пробе. Способ позволяе определить в относительных единицах наличие nPEj в микроскопируемой клетке, выявить в относительных единицах уменьшение или увеличение уровня исследуемого простагландина в ходе заболевания, лечения или экспериментального воздействия, констатировать полное исчезновение простагландина в объекте.

Пример 1. Способ был примене для выявления ПГЕг во внутрифолли- кулярных люминесцирующих клетках селезенки интактных крыс, а также у крыс после введения антигена. ВысуИз табл. t видно, что через 4 сут после введения антигена в большинстве клеток значение I, уменьшилось, при

этом значения отношения

.li I,

возрастали, что свидетельствует о повышении уровня ПГЕз во внутрифолликуляр- ных клетках селезенки после антигенного воздействия на организм.

П р и м е р 2. Лекарственное вещество метиндол (индаметации) известно своим свойством блокировать

шенные срезы толщиной 20 мкм из нефиксированной ткани селезенки помещали на столик люминесцентного микроскопа МЛ-2 с микрофлюориметричес- кой приставкой ФМЭЛ-1А. С помощью светофильтров микроскопа СС-1, ВС, СЗС и запирающего - ЖС-18 возбуждали люминесценцию исследуемого объекта. Из люминесценции внутрифоллику- лярных клеток, которые ставились в просвет зонда, с помощью интерференционного светофильтра 4 приставки ФМЭЛ-1А выделяли световой поток с длиной волны 450 нм. Его интенсивность замеряли в условных единицах шкалы усилителя прибора (значение I,). Затем измеряли интенсивность светового потока с фильтра 5 приставки (460 нм) и получали значение Ij в той же точке. Далее рассчитывали

значение отношения

IL I,

При наличии

nrEg значения отношения больше единицы, при отсутствии ПГЕг равны 1 или меньше К В клетках интактных и подопытных животных встречались разные варианты значений, что вызвало необходимость вычисления среднеарифметических значений Результаты представлены в табл. 1.

Таблица 1

фермент простагландинсинтетазу -и уменьшать, вплоть до исчезновения,

уровень ПГЕз в клетках, которые его вырабатывают. Были взяты 2 группы крыс по 5 крыс в каждой группе. I группа - всех крыс забивали без воздействия, интактные. II группа каждая крыса получала подкожную инъекцию метиндола в дозе 0,4 мг на 1 крысу и через 20 мин животных забивали. Способ забоя в I и II группах - передозировка эфира. У крыс I

Таблица 2

10

II

0,35 0,9

0,67 0,76

1,8 0,8

31343359

и II групп извлекали вилочковую железу (тимус), резали ее на криоста- те, монтировали и сушили срезы на предметных стеклах, микроскопировали, Микроскопическое исследование проводили на люминесцентном микроскопе Люмам-4 с микроспектрофлюориметричес- кой насадкой ФМЭЛ-1А. Объектом исследования явились аутолюминесциру- ющие премедуллярные клетки тимусных долек.

Каждую клетку сначала подводят к зонду (затемненный кружок) в центре поля зрения. Затем от нее последовательно проводят замеры светового потока с интерференционными светофильтрами, сначала фильтром 4, потом фильтром 5. Показания в условных единицах снимают с усилителя прибора У-5-6. Интактные и подопытиые животные забиты в один день, замеры проведены на одном приборе при полной идентичности всех параметров.Способ индикации простагландина Вычисляют средние арифметические зна- 25 Е в биологических объектах путем

облучения объекта светом в коротковолновой области с последующей регистрацией люминесценции, о т л и15

20

Таким образом, искусственное снижение уровня ПГЕ 2 снижает и числовое значение отношений .

Изобретение позволяет повысить точность определения ПГЕ 2 за счет объективизации способа.

Формула изоб ретенйя

чения для 1 и 12 , затем подсчитывают среднее значение для отношения

1г

--- у интактных крыс и крыс, кото- 1-1

рым вводили метиндол (группа II), У животных с блокированной простаг- ландинсинтетазой (группа II) отно30

повышения точности способа, исследование проводят под люминесцентным микроскопом, измеряют интенсивность флюоресценции .с фильтрами, пропускающими свет с длиной волны 460 и 450 нм, и при соотношении показателей интенсивности более 1 определяют наличие простагландина Еа в дробе.

шение

1г ii

в среднем оказалось меньше I - у интактных живот1. В группе

ных --- больше 1 (табл. 2). 11

Редактор В. Данко

Заказ 4819/47Тираж 776

ВНИМШ Государственного комитета СССР

по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

ПроизБодственно-полигр афическое предприятие, г. Ужгород, ул. Прс ектиая, Д

Таблица 2

II

0,35 0,9

0,67 0,76

1,8 0,8

Способ индикации простагландина Е в биологических объектах путем

Таким образом, искусственное снижение уровня ПГЕ 2 снижает и числовое значение отношений .

Изобретение позволяет повысить точность определения ПГЕ 2 за счет объективизации способа.

Формула изоб ретенйя

повышения точности способа, исследование проводят под люминесцентным микроскопом, измеряют интенсивность флюоресценции .с фильтрами, пропускающими свет с длиной волны 460 и 450 нм, и при соотношении показателей интенсивности более 1 определяют наличие простагландина Еа в дробе.

Составитель Н. Гуляева Техред А.Кравчук

Корректор М. Демчик

Подписное

Изобретение относится к гистохимии. Цель изобретения - повышение точности способа. Препарат помещают под люминесцентный микроскоп и измеряют интенсивность флюоресценции с фильтрами, пропускающими свет с длиной волны 460 и 450 нм. После антигенного воздействия уровень простаг- ландина Ej во внутрифолликулярных клетках селезенки повышается. 2 табл. (/ С м