Штамм вируса ЕСНО-11 используемый для приготовления диагностических препаратов Советский патент 1987 года по МПК C12N7/00 C12N7/00 C12R1/91 

Изобретение относится к медицинской вирусологии и может быть использовано при производстве диагностических препаратов,

Цель изобретения - повышение чувствительности и специфичности штамма .

Штамм ECHO-11 выделен от больного ребенка и получен путем посева инфекционного материала на чувствительную культуру клеток ФЭЧ с последующим проведением двух пассажей на этой же культуре клеток и является новым антигенным вариантом.

Штамм допонирован в Государственной Коллекции вирусов Института вирусологии им, Д.И.Ивановского под номером ГКВ № 1853 и характеризуется следующими признаками.

Культурально-морфологические признаки.

При культивировании штамма № 1853 на клетках ФЭЧ, первичных клетках почек обезьян, на перевиваемых клетках ai -41 , RH и ЛЭЧ вызывает четко выраженный цитопатогенный эффект, характерный для энтеровиру- сов, Титры вируса на этих культурах клеток достигает 5,0-7,0 Ig ИЩ /мл. Клеточные линии НЕр-2 и ПЭТ (почки эмбриона телят) не чувствительны к штамму № 1853 вируса ЕСНО-11.

Устойчив к действию хлороформа, эфира. В присутствии 1М раствора хлористого магния и хлористого кальция штамм сохраняет инфекционные свойства в культуре клеток после прогревания при 50 С в течение 1ч.

Обладает характеристикой rct40i.

Антигенные свойства.

Штамм после 4-5 пассажей на клетках ФЭЧ и первичных клетках почек обезьян (ПО) не вызывает агглютинации эритроцитов человека всех трех групп. Не патогенен для мьш1ей-сосун- ков. Стимулирует продукцию специфических антител в сфганизме кроликов.

Антисыворотка к штамму ff 1853 нейтрализует штамм Gregori и штаммы, выделенные от больных с поражением сосудистого тракта.

Пример 1. Получение диагнос- тикума. Лиаг ностические препараты дл постановки иммунологических реакций получают путем заражения культуры клеток фибробластов эмбриона человека (ФЭЧ) . Ф ЗЧ выращивают в матрасах емкостью 0,25 л. В матрас высевают

6 млн клеток на 30 мл среды роста. Состав сред1 1 роста: 0,5% гидролизат лактальбум1ша и 10% нативной сыворотки крупного рогатого скота без консерванта. Клетки формируют монослой через 48-72 ч инкубапци при З7 с.После достижения монослоя среду роста сливают, клетки однократно отмывают

раствором Хенкса и заражают вирусом ЕСНО-11 штамм № 1853. Вирус вносят в объеме 1 мл на 30 мл среды поддержания (из расчета, что заражающая доза составляет 0,1 ТПЛу на 1 клетку).

После равномерного распространения инокулята по поверхности клеток через 60i5 мин контакта при температуре 37°С, матрасы с монослоем заливают средой поддержания, состоящей из среды 199 без сыворотки.

Инфицированные культуры инкубируют при 37 С до наступления полной дегенерации клеточного пласта. Для

освобождения от клеточного детрита содержимое матрасов подвергают термолизису (одно-двукратному замораживанию при температуре минус 20 С с пос- лед тп1цим оттаиванием при температуре

23i3 С) . Полученный препарат может быть использован для определения титра антител к вирусу ЕСНО-11 у больных с целью расшифровки вспышки заболеваний предположительно энтеровирусной этиологии, а также для изучения иммунологического фона у здорового населения.

0

5

0

5

П р и м е р 2. Получение иммунной сыворотки. Для получения иммунной сыворотки к штамму № 1853 иммунизируют кроликов весом 2-3 кг трехкратно с интервалами в 3 и 2 недели между введениями. Вирус вводят внутривенно в объеме 10 мл (титр вируса 7,0 Ig ). Через 10 дней после последней иммунизации производят обескровливание животных. Полученную сыво ротку инактивируют при 56±1°С в течение 30f5 мин и используют в реакции нейтрализации.

Использование штамма № 1853 в качестве антигена в реакции нейтрализации дает возможность установить диагностическое (в 4-128 раз) нарас- тание титра вируснейтрализующих антител у 66,6% обследованных больных при изучении вспьшжи заболеваний среди детей с синдромом увеита. Примене 1346674

иие известного штамма Gregori при акции нейтралиэагдаи проб крови (I и изучении тох же образцов сывороток II) от больных, выделявших и не вы- позволяет выявить иммунологические сдвиги в крови больных у 11% обследо- ванпых. Наличие положительной серо- конверсии у больных, но вьщелявших вирусы, позволяет серологически подтвердить факт инфицированности этой группы лиц вирусом ЕСНО-11, явившим- ю тител. ся причинным агентом возникновения

вспышки заболевания, сопровождавшего- Формула изобретения- ся синдромом поражения глаз у детей

раннего возраста.Штамм вируса ЕСНО-1I, ГКВ 1853,

В таблице представлены в качестве 15 используемый для приготовления диаг- примера результаты исследований в ре- ностических препаратов.

деливших вирусы.

Использование вируса ЕСНО-1I штамм ГКВ № 1853 позволяет в большем проценте случаев выявить положительную сероконверсию у больных, а также определить более высокий уровень анЗаказ 5096/26 Тираж 499Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР

по делам изобретений и открытий 1)3035, Москва, Ж-35, Раушская наб,, д.4/5

.Производственно-полиграфическое предприятие, г.Ужгород, ул.Проектная, 4

акции нейтралиэагдаи проб крови (I и II) от больных, выделявших и не вы- тител.

деливших вирусы.

Использование вируса ЕСНО-1I штамм ГКВ № 1853 позволяет в большем проценте случаев выявить положительную сероконверсию у больных, а также определить более высокий уровень ан

Изобретение относится к медицинской вирусологии и может быть использовано при производстве диагностических препаратов. Цель изобретения - повьппение чувствительности и специфичности штамма. Штамм вьщелен от больного ребенка, депонирован под номером ГКВ № 1853. Используя штамм № 1853, получают диагностикум (I) и иммунную сыворотку (II), которые используют для определения титра антител к вирусу ЕСНО-11 у больных (I) и в реакции нейтрализации (II). 1 табл. (Л э it; 3 35