Способ определения антистрептолизин- @ -овых антител в крови (его варианты) Советский патент 1988 года по МПК A61K39/385 

00 О)

00

со

00

Изобретение относится к иммунологии. Цель изобретения - упрощение и повышение точности определения. В сьгаоротку крови вносят окисленный стрептолизин- 0, суспензию эритроцитов и перемешивают. В смесь добавляют восстанавливающий раствор, имеющий тиольную группу. Измеряют скорость гемолиза и по калибровочному графику определяют титр антител в исследуемом образце. Способ обеспечивает кинетическое определение антител в процессе гемолиза. 2 с. и 1 з .п. ф-лы. СО

ы

Изобретение относится к области медицины, преимущественно к диагно- стике инфекционных заболеваний, и может быть использовано для выявлени антител к гемолитическому стрептококку.

Целью изобретения является упрощение и повьшение точности определения.

Способ поясняется следуюпщми примерами.

Пример 1, Определение анти- стрептолизин- 0 -овых антител в цельной крови,

К 0,01 мл цельной крови, взятой для исследования, добавляют 2 мл за- буференного физиологического раство- ра 0,15 М при рН 7,0 и 20°С, содержащего 5 с V/мп окисленного стрепто- лизина , После тщательного перемешивания смесь оставляют при комнатной температуре на 15 мин, после чего к реакционной смеси прибавляют 0,1 мл восстанавливающего раствора, содержащего дитиоэритритол (дитио- т еитол, меркаптоэтанол или их смесь в концентрации 0,001 моль/л, реакционную смесь перемешивают и измеряют ее оптическую плотность при 600 нм, Анализ полученной при этом спек- трофотометрической кривой показал, что изменение в спектральном поглощении реакционной смеси составляет 21,5 деления/мин. Это свидетельствует о том, что исследуемый образец крови имеет титр антистрептолизин - 0 -овьгх антител 430 ME, В то же время определение по известному способу дало величину, равную 333 ME,

П р и м е р 2, Определение анти- стрептолизин- 0 -овых антител в сыворотке крови, I

Раствор окисленного стрептолизина- 0 использовали в концентрации 5 с V/мл, причем к этому раствору предварительно добавляли промытые эритроциты (0,1 мл эритроцитарного отстоя на каждые 40 мл раствора окисленного стрептолизина- 0 в физиологическом растворе), Использовали эритроциты человека круппы О, Rh (можно использовать эритроциты кролика) , Для определения титра антител 0,01 МП исследуемой сыворотки приба ляют к 4 МП раствора окисленного стрептолизина- 0, содержащего суспензию эритроцитов, и смесь тщательно перемешивают.. Затем смесь остав

ляют в течение 15 мин при комнатной температуре, после чего добавляют 0,2 мл восстанавливающего раствора,

содержащего дитиоэритритол, как описано в примере 1, Было выявлено, что скорость изменения спектрального поглощения равна 28,5 делениям/мин. Это соответствует титру антител 260 ME, -,

Предложенный способ по сравнению с известным обеспечивает кинетическое определение антистрептолизин- 0 -овых антител в процессе гемолиза при использовании окисленного стрептолизина , что обеспечивает большую точность измерения.

Формула изобретения

0

5

5

0

f. Способ определения антистрептоли- зин- 0 -овьгх -антител в крови путем внесения в исследуемый образец окисленного стрептолизина- 0, инкубации и определения гемолиза, отличающийся тем, что, с целью упрощения и повышения точности определения, лиофилизированный окисленньй стре.птолизин- 0 вносят в изотоническом буферном растворе при рН 7,0 в концентрации 4-8 с V/мл и после инкубации смеси в нее вносят восстанавливающий- агент, имеющий в своем составе -тиольную группу и находящийся в изотоническом забуференном при g рН 7,0 растворе в концентрации 0,001 моль/л, после чего измеряют скорость гемолиза и при помощи калибровочного графика, построенного для- образцов с известным содержанием антител, определяют титр антистреп- толизин- 0 -овых антител в исследуемом образце,

2, Способ определения антистрептолизин- 0 -овых антител в крови путем 5 внесения в исследуемый образец окисленного стрептолизина- 0, инкубации и определения степени гемолиза, отличающийся тем, что, с цепью упрощения и повьш1ения точности определения, в качестве исследуемого образца используют сыворотку крови, в которую вносят лиофилизироваиньй окисленньй стрептолизин- 0 в изотоническом забуференном при рН 7,0 растворе в концентрации 4-8 с V/мл и после инкубации смеси осуществляют дополнительную стадию прибавления эритроцитов в количестве, эквивалентном образцу цельной крови, после че0

0

иЗ .13678384

го вносят восстанавливающий агент, антистрептолизин- 0 -овьгх антител в имеющий в своем составе тиольную груп- исследуемом образце, пу и находящийся в изотоническом за- 3. Способ по пп.1 и 2, о т л и - буференном при рН 7,0 растворе в кон- чающийся тем, что в качестве центрации 0,001 моль/л и измеряют восстанавливающего агента используют скорость гемолиза, после чего при дитиоэритритол, или меркаптоэтанол, помощи калибровочного графика, пост- или дитиотреитол в концентрации роенного для образцов с известным .0,001 моль/л, или смесь этих агентов содержанием антител, определяют титр ю с конечной концентрацией смеси

0,001 моль/л.