Способ получения стабильного водорастворимого гемин-аргинатного или гемин-лизатного комплексного соединения для лечения порфирии Советский патент 1988 года по МПК A61K35/14 

00 00 4ib

00 00

Изобретение относится к медицине, а именно к способам получения физиологически активных веществ, предназначенных для применения в таб- летк ах, капсулах или для инъекций при лечении некоторых видов железо- дефицитных анемий и порфирии. Цель изобретения - получение более стабильного препарата. Для этого осуществляют реакцию слабо растворимого в воде кристаллического гемина с подходящим основанием, например аминокислотой, такой как L-лизин или L-ap- гинин. Молекула гемина несет две карбоксильные группы, взаимодействующие с основными аминогруппами L-лизина или L-аргинина. Гемин-аргинат или ге- мин-лизинат растворяют в воде. Осуществляют реакцию кристаллического гемина с L-ЛИЗИНОМ или L-аргинином в молярном отношении 1:2 и 1:3 при интенсивном перемешивании в смеси растворителей, включающей органический растворитель (ацетон) и воду в соотношении 300:10-300:20 при 20 С в течение 10-15 ч. Полученный им препарат безопасен и эффективен при лечении острой гепатитной порфирии. 2 табл. I СО

О4

Изобретение относится к медицине, в частности к способам получения физиологически активных веществ, предназначенных для применения в таблет- ках, капсулах или для инъекций при лечении порфирии и некоторых видов же- лезодефицитных анемий.

Цель изобретения - получение более стабильного препарата.

Способ осуществляют следующим образом.

Осуществляют реакцию слабо растворимого в воде кристаллического гемина с подходящим основанием, например ами нокислотой, такой как L-лизин или L- аргинин в смеси растворителей, содержащей воду и ацетон. Состав растворителя, а именно отношение органического растворителя к воде, важен с точ- ки зрения медицинской ценности целевого продукта. Содержание воды в смеси растворителей столь мало (около 7/J), что ни гемин, ни достаточно легко растворимый L-аргинин не раство- ряются. Реакция имеет место при интенсивном, перемешивании и определенном рН раствора. Полученный продукт выделяют и высушивают. Таким образом, соединение гемина получают в суком виде и оно растворимо в воде, что существенно как с медицинской, так и с фармакологической точки зрения.

Молекула гемина несет две карбоксильные группы, которые взаимодейст- вуют с основными аминогруппами L-ли- зина или L-аргинина.

Гемин-аргинат и гемин-лизинат, полученные по предлагаемому способу, растворяют в воде и через определен- ные промежутки времени измеряют рН растворов -и сравнивают эти значения с рН механической смеси гемина и L-аргинина, растворенных в воде.

Результаты исследований представ- лены в табл. 1,

Из табл. 1 следует что рН гемин- аргината и гемин-лизината стабильны (рН около 8) в течение 24 ч. С другой стороны, рН механической смеси очень медленно уменьшается, вероятно в результате очень медленной реакции между карбоксильными группами гемина и аминогруппой L-аминокислоты. Поэтому таким способом невозможно получить продукт, имеющий терапевтическу ценность. Гемин-аргинат и гемин-лизинат, полученные по предлагаемому способу, представляют собой комплексное

5 0

0

5

соединение, полученное в результате реакции L-аминокислоты с карбоксильными группами гемина.

Для определения, с одной стороны, оптимального молярного отношения двух реагентов и, с другой стороны, наиболее подходящего состава смеси растворителей с гемином и аргинитом, проводят следующие тесты.

Осуществляют реакцию кристаллического гемина с L-лизином или L-аргини- ном в молярном отношении 1:2 и 1:3 при интенсивном перемешивании в смеси растворителей, включающей органический растворитель и воду в различных отношениях. Выпавшее в осадок вещество фильтруют, промывают и сушат.

Растворимость вещества в воде определяют путем растворения 1,0 г гемин- аргината, полученного в каждом тесте, в 50 мл дистиллированной воды, при интенсивном перемешивании в

низ 1 ч.

Растворы центрифугируют (3500 об/ /мин), остаток промывают 10 мл дистиллированной воды и 10 мл ацетона, высушивают и взвешивают. Нерастворимый остаток в основном представляет собой непрореагировавший гемин.

Результаты тестов представлены в табл. 2.

Образовавшееся в некоторых тестах смолистое вещество можно перевести в порошковую форму. При этом установлено, что желательно иметь отношение гемина к аргинину или лизину 1:3, а предпочтительньй растворитель должен включать 300 мл ацетона и 20 мл воды, так как для того, чтобы реакция между гемином и L-аргини- ном или L-лизином произошла соответствующим образом, необходим большой избыток L-аргинина или L-лизина.

Пример 1.6,26 г кристаллического гемина (0,01 М) и 3,48 г кристаллического L-аргинина (0,02 М) в лабораторном стакане, снабженном механической мешалкой и содержащем смесь растворителей из 300 мл ацетона и 20 мл воды, интенсивно перемешивают в течение 10 ч. Полученный продукт фильтруют, промывают ацетоном и сушат. Выход гемарин-аргината 9,5 г (95%). Количество нерастворимого остатка определяют по описанному способу и получают 0,14 г (14%).

П р и М е р 2. 6,52 г кристаллического гемина (0,01 М) и 4,38 г

кристаллического L-аргинина (0,025 М) обрабатывают по примеру 1, а перемешивание производят в течение 12 ч. Выход гемин-аргината 11,1 г (100%), нерастворимый осадок 0,042 г (4,2%).

ПримерЗ. 6,52г кристаллического гемина (0,01 М) и 5,23 кристаллического L-аргинина (0,03 М) обрабатывают по примеру 1, а перемеши- вание проводят в течение 13 ч.

Выход гемин-аргината 12,0 г (95%), нерастворимый остаток 0,0005 г (0,05%).

Пример4. 6,52 г кристапли ческого гемина (0,01 М) и 4,39 г кристаллического L-лимина (0,03 М) обрабатывают по примеру 1, а перемешивание проводят в течение 13 ч.

Выхбд гемин-лизината 10,8 г (99%) , нерастворимый остаток 0,020 г (2,8%).

Пример 5. 6,52 г крйсстапли- ческого гемина (0,01 М) и 6,1 кристаллического L-аргинина (0,035 М) обрабатывают по примеру 1.

Выход гемин-аргината 12,0 г (95%), нерастворимый остаток 0,0005 г (0,05%)

Примерб. У самцов крыс Спраг Доулей (180-250 г) вызывают порфирию подкожным введением 300 мг/кг 2-ал- лил-2-изопропилацетамида (AIA) в течение 3 дн. Другую группу крыс обрабатывают AIA и гeмин-L-apгинaтным комплексом, полученным по примеру 3, 10 мг/кг интраперитонеально в течение 3 дн.

У обработаннб1х AIA крыс дневная экстрекция мочевого по фобилиногена (рве) повьшается от средней величины 0,08 ммоль (интервал 0,05-0,13) до 6,79 ммоль (интервал 9,91-12,70), а дневная экскреция мочевой дельта-ами- нолевулиновой кислоты (ALA) от 0,20 ммоль (0,15-0,23) до 7,77 ммоль (2,49-11,50). С другой стороны, у крыс, обработанных Д1А и веществом, полученным по примеру 3, повышение экскреции в моче РВС (до 0,28; интервал 0,09-0,45 ммоль/день) и ALA (до 0,51, интервал 0,23-0,83 ммоль/день) меньше.

Синтезная активность дельта-ами- нолевулиновой кислоты (ALA) в эритро- 1щтах (3,96; интервал 2,23-6,06 ммоль ALA/4/1О ретикулоцитов) и в печени (15,4; интервал 12,5-17,1 ммоль) (ALA) мг белка/ч)у А1А обработанных крыс вьше, чем соответствующие величины (1,42; интервал 0,82-1,72 ммоль

Q

0

5

0

„

5

0

ALA/4/10 ретикулоцитов и 11,5; интервал 9,8-13,7 ммоль ALA/мг белка/ч) у крыс, обработанных AIA и материалом, полученным по примеру 3.

Активность гем-оксигеназы (НО) снижается в большей степени y.AlA обработанных крыс до неизмеримого уровня, тогда как у крыс, обработанных AIA и материалом, полученным по примеру 3, НО активность составляет 16j2 ммоль/мин/мг белка (интервал 9,3-29,3).

Порфириногенное действие AIA обработки может быть также предотвращено внутримышечным введением reMHH L-ap- гинатного комплекса, полученного согласно примеру 3, в дозе 10 мг/кг. Однократное внутривенное введение (20 мг/кг) вызьшает такой же анти- порфириногенный эффект.

Исследования показали, что этот препарат является эффективным, как и гематкн.

Пример 7, Биохимическое действие стабильного и легко растворимого гем-производного, полученного по примеру 4, изучено на десяти пациентах с острой } епатитной порфирией в бессимптомной фазе болезни. Шесть .пациентов с острой перемежающейся порфирией (AIP) получали 2 мг (два) или 3 мг/кг/день (четыре) в периферическую вену в течение 4 дн. Во время лечения средняя мочевая экскрек- ция порфобилиногена падала от 194 ммоль (интервал 60-465) до 17,2 ммоль (24 4/7j1-30), а дельта- аминолевулиновой кислоты от 133 ммоль (интервал 47-281) до 13,8 ммоль (24 4/8,1-23,4). У четы-. рех пациентов с перемежающейся пер- )ирией 3 мг/кг/день гем-производного в течение 4 дн снижался средний фекаль-. ный протопорфины от 650 ммолъ/г (интервал 193-1140) до 89 м oль/г/ /день сухого веса (62-103) и копро- порфирии от 232 мколь/т (интервал 102-360) до 23 ммолъ/г сухого веса (8,5-40).

У двух пациентов с AIP три курса гем (3 или 4 мг/кг/день в течение трех или четырех днеГО проведены во время острого приступа. У 21-летней женщины абдоминальные симптомы исчезли во время второго дня лечения в двух случаях, У 43-летнего мужчины с абдоминальной болью и периферической невропатией боль исчезла, а невропатия стала улучшаться после по следней из четырех последовательных инфузий.

Тромбофлебит возник у девяти пор- фирических пациентов во время 51 ин- фузии. Не найдено других побочных эффектов или аномальностей в химии крови, включая изучение коагуляции.

Таким образом, предлагаемый гем- препарат является безопасным и эффективным при лечении острой гепатитной порфирии.

Гемин-аргинат0,02937/25

Гемин-лизинат0.,02760/25

Гемин+Ь-арги-0,0160/25+

нин0,01307/25

Формула изобретения

Способ получения стабильного водо- растворимого гемин-аргинатного или гемин-лизатного комплексного соединения для лечения порфирии путем пере- мешивания гемина с L-аргинином или L-лизином в соотношении 1: 2-1:3,5 и со смесью растворителей, состоящей из ацетона и зоды в соотноггении 300:10-300:20 при 20°С в течении 10-154.

Таблица 1

8,22 8,22 8,22 8,10 7,97 8,13

10,13 9,81 9,33

Таблйца2

8

Продолжение табл.2