Способ выделения бактерий семейства ЕNтеRовастеRIасеае Советский патент 1988 года по МПК C12Q1/04 

со оо.

О5 О5 О)

Изобретение относится к медидинс- сой микробиологии и касается выделе- WH бактерий семейства Enterobacte- riaceae.

Цель изобретения - повьпиение селективности способа за счет избирательного подавления грамположитель- ной микрофлоры.

Пример. Исследуемый матер ал взвесь фекалий засевают петлей, на поверхность питательной среды - агара с эозин-метиленовым синим (Левина), содержащей 1 мкг/мл фенасала (5,2 -дихлор-4- нитросалициланилида) , подращивают при 24 ч, изучают выросшие колонии с последующим пересевом культур из колоний и их идентификацией. Среди выросших колоний бактерий обнаружены энтеробактерии - сальмонеллы, эгаерихии, энтеробактерии и не обнаружены грамположительны бактерии.

В 1 л дистиллированной воды внося 50 г сухой среды - агара с эозин-ме- тиленовым синим (Левина), кипятят до полного растворения, добавляют 1 мл раствора фенасала в диметилсульфокси де концентрацией 1000 мкг/мл (раствор готовят путем растирания в фарфоровой ступке 10 мг фенасала в 10 мл диметилсульфоксида), разливают среду в стерильные чашки Петри, высушивают с открытыми крышками. Среда прозрачна, сохраняет цвет исходной среды Левина, пригодна в течение 7- 10 сут.

П р и м е р 2. Исследуемый материал - отделяемое инфицированной раны засевают петлей на поверхность пита- тельной среды Аселя-Либермана, содержащей 5 мкг/мл фенасала (5,2 -ди- хлор-4-нитросалициланилида), подращивают при 37° С. в течение 24 ч, изучют выросшие колонии с последующим пересевом культур из колоний и их идентификацией. Выросшие на питательной среде вишневого цвета нероящиеся колонии цвета среды содержат бактерии Proteus miraMlis. Колоний грам- положительных бактерий не обнаружено

В 1 л дистиллированной воды вносят 35 г сухого питательного агара (производства Дагестанского НИИ питательных сред), кипятят до растворения, добавляют 10 г лактозы, 0,6 г краски конго красный, 5 мл раствора фенасала в диметилсульфоксиде концентрацией 1000 мкг/мл, разливают

5

0 5 0

5 0 5

0 5

0

5

в стерильные чашки Петри, подсушивают с открытьши крьш1ками. Среда прозрачна, сохраняет исходный вишнево- красный цвет, пригодна в течение 7- 10 сут.

Пример 3. Исследуемый материал - мочу засевают петлей методом секторных посевов на поверхность питательного агара, содержащего 10 мкг/мл фенасала (5,2 -дихлор-4- нитросалициланилида), подращивают в течение 24 ч, изучают выросшие колонии с последующим пересевом культур из колоний и их идентификацией. В выросших колониях обнаружены эше- рихии, колоний грамположительных бактерий нет.

Сравнительное изучение селективных и дифференцирующих свойств трех сред - агара с эозин метиленовым синим (Левина), Аселя-Либермана и питательного агара, приготовленных с добавлением фенасала (1-10 мкг/мл), но без стерилизации автоклавировани- ем; этих же сред (без фенасала),при- готовленных в соответствии с инструкцией, со стерилизацией автокпавиро- ванием (121 С, 20 мин) и без стири- лизации автоклавированием показало, что фенасал полностью подавляет грам- положительную микрофлору, содержащуюся в составе сухой основы сред и или ее компонентов (краска конго красный) , а также грамположительные бактерии, вносимые при посеве, в то время как энтеробактерии всех видов растут в виде колоний, типичных по форме, размерам и окраске, и питательные среды не изменяют своей прозрачности и окраски. Указанные среды (без фенасала), приготовленные без последующей стерилизации автоклавированием, не пригодны к работе ввиду пророста спороносной грамположитель- ной микрофлоры, содержащейся в сухой среде или ее компонентах. Эти же среды, приготовленные со стерилизацией автоклавированием, не угнетают роста грамположительных бактерий, содержащихся в посевном материале. Чувствительность сред Левина, Аселя- Либермана, питательного- агара, содержащих дополнительно 1-10 мкг/мл ф ена- сала, равна чувствительности исходных питательных сред (при посеве 0,1 мл из этого разведения исходной одномиллиардной взвеси бактерий на питательных средах предлагаемого

способа вырастали 8-10 колоний бактерий при таком же количестве колоний на этих же средах без фенасала).

Таким образом, примене;ние фенасала в составе питательных сред повышает селективность вьщеления энтеро- бактерий за счет избирательного подавления роста грамположительных бактерий. Дополнительным преимущест- ством применения фенасала является упрощение приготовления сред для выделения энтеробактерий, так как исклчается трудоемкая и энергоемкая сте- рштизация сред автоклавированием.

Формула изобретения

Способ вьщеления бактерий семейства Enterobacteriaceae путем посева исследуемых микроорганизмов на плотную питательную среду с последующим выращиванием посевов и исследованием вьфосших колоний отличающийся тем, что, с целью повы- шения селективности способа за счет избирательного подавления грамполо- жительной микрофлоры, выращивание осуществляют в присутствии 5,2-ди- хлор-А-нитросалициланилида в концентрации 1-10 мкг/мл питательной среды

Иэабретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано для избирательного выделения бактерий семейства Enterobacteriaceae из исследуемого материала. Цель изобретения - повышение селективности способа за счет избирательного подавления грамположительной микрофлоры. Способ заключается в том, что исследуемый материал высевают на плотную питательную среду, предназначенную для выравнивания искомых микроорганизмов, при зтом в-среду в процессе приготовления вносят 5,2-дихлорг 4-нитросалицш1анилид в концентрации 1-10 мкг/мл среды. Вьфащивание осуществляют в обычньк условиях. На данной среде вырастают только грам- отрицательные Шкроорганизмы, которые затем идентифицируют по общепри- д нятой для данных микроорганизмов схе- ® ме. (Л