Известны штаммы грибов Aspergillus огуzae, например Aspergillus oryzae КС, используемый в спиртовом производстве для осахаривания вместо солода. Этот Н1тамм обладает активной сс-амилазой, но содержит недостаточное количество протеолитических ферментов, поэтому его .применяют в смеси со штаммом гриба Aspergillus awamori 22, который имеет высокую декстринолитическую и мальтазную активность.
Предлагаемый штамм Aspergillus oryzae 8fl отличается быстрым ростом и способностью образовывать активные амилолитическне и протеолитические ферменты, сочетание которых необходимо для полного осахаривания крахмала и гидролиза белковых вендес.тв сырья. Это позволит применить в спиртовом производстве одну культуру гриба Aspergillus oryzae 8fl, вместо применяюш,ейся в настояш,ее время смеси вышеописанных культур, одна из которых образует комплекс амилолитических ферментов, а вторая служит источником протеазы.
Штамм Aspergillus oryzae 8fl имеет следуюш,ую характеристи.ку.
Морфология. Конидиеносцы без перегородок, бесцветные, с возрастом приобретают легкий коричневатый оттенок. Большей частью гладкие, на некоторых имеются редко расположенные небольшие вмятины или очень
маленькие пологие бугорки. Конидиеносцы в длину достигают 194-350 мк и в поперечнике 8,3-10,1 мк.
Пузыревидные вздутия имеют шаровидную или слегка удлиненную форму 15,4-27,02Х XI3,2-27,02 мк. Стеригмы однослойные, удлиненные, цилиндрические, на некоторых пузыревидных вздутиях они слегка расширенные или даже клиновидные 11,6X4,6-5,8 мк. Чаще стеригмы расположены на верхней частн пузыря. Конидии шаровидные с гладкой оболочкой, их диаметр варьирует от 3,8 до 11,58 мк.
Конидиальные головки шаровидные или слегка удлииеиные 22-48X22-44 мк.
Гифы бесцветные, в поперечнике они имеют от 3,96 до 7,92 мк, иногда они колбовидно утолшены 8,8 мгс.
На синтетической среде Чапека на третьи сутки носле посева диаметр колонии в среднем достигает 3,9 см и спорообразуюшей зоны 3,4 см. Колонии бархатистые, в центре слегка клочковатые, ближе к периферии онн становятся желтоватыми. Преобладают зеленые тона. Обратная сторона колонии беловатая.
На сусло-агаре (7° Баллинга) на третьн сутки диаметр колонии достигает 4,5 см и снорообразующей зоны 4,0 см. Б центре расположены колонии выпуклые с более высоким
мицелием, чем по краю. Они окрашены в желтовато-зеленоватый цвет € преобладанием желтоватых тонов. Обратная сторона колонии бесцветная.
На агарнзованном 4%-ном огваре солодовых ростков на третьи -сутки диаметр колонии достигает 3.0 см и спорообразующей зоны 2,7 см. Колонии пушистые, выпуклые, покрытые довольно высоким мицелием. В центре они желтоватые, остальная часть колонии беловатая. Обратная сторона их бесцветная.
На пшеничных отрубях (без принудительной аэрации), слой которых равен 1,5-2,0 см, в колбах к 30 час культивирования превращаются в плотный корж, полностью прорастаюш;ий мицелием. Спорообразование начинается к 36 час, к 48 час становится обильным.
На рисовых отрубях (65%) и рисовой шелухе (35%) к 35 час образуется плотный корж, Спорообразование начинается к 35 час роста, обильным оно становится к 42 час.
Отношение к с а х а р а м. Интенсивно окисляет глюкозу, мальтозу, сахарозу, ксилозу, сорбит, слабее - галактоз}, рафинозу, декстрин и маниит и очень слабо - галактозу и рабинозу. Газообразование наблюдается только на среде с сахарозой.
Штамм Aspergillus oryzae 8fl сильно гидролизует крахмал, разжижает желатину н пег тонизирует молоко. Оптимальная температура роста штамма 30°С, его оптимальная влажность 55% и оптимальное значение рН 6,0-6,5.
Ферментативная активность культуры Aspergillus oryzae 8fl (при лабораторных условиях культивирования) в сравнении с ферментативной активностью культур Aspergillus oryzae КС и Aspergillus awamori дана в таблице.
50%. Через сутки культивирования при ЗОС отруби покрываются обильным мицелием, а через двое - вся толш,а отрубей пронизывается светло-зелеными спорами. Через сутки роста гриба среда становится очень рыхлой и подвижной, превращаясь в пыль.
2-3-суточную культуру из колб пересевают в посевные кюветы на отруби, влажность которых составляет 40-45%, толщина слоя 1 - 1,5 см, температура культивирования 30°С. Р1нтенсивиое спорообразование начииается после 24 час роста. Через 48 час роста вся толща среды пронизывается спорами, среда подсыхает, начинает крошиться. Такой споровый материал имеет на 1 г 700-750 мли. спор. При более длительном культивировании (65- 72 час) происходит полное видоизменение спорового материала. Последний при легком встряхивании превращается в сильно оылящий порошок, содержащий до 1-1,5 млрд. спор на 1 г.
Полученный посевной материал обладает
большей сыпучестью и рыхлостью, чем посевиой материал Asperg illus oryzae КС и Азрегgillus awamori 22, и служит для получения
производствеииой культуры.
Выращивание последней осуществляют на пшеничных простерилизованных отрубях, увлажненных стерильной водой до влажности 60-61%. Количество посевного материала берут из расчета 0,03-0,04% к весу отрубей.
Выращивают гриб Aspergiillus oryzae 8fl в производственных растильных камерах, емкость которых равна 250-300 кг по сухим отрубям. В нервые 8-10 час в каждой камере поддерживают температуру 32°С и относительную 1;лал ность воздуха 85-90%. В этот период споры набухают. К концу периода появляется первый мицелий.
Из данных таблицы видно, что штамм Азpergiillus oryzae 8fl обладает ббльшими активностями как амилазньши, так и протеазными, чем Aspergillus oryzae КС и Aspergilius awamori 22.
При получении цосевяой культуры Aspergillus oryzae 8fl в лабораторных условиях трехсуточную культуру гриба, вырантенную на косом сусловом агаре, пересевают на стерильные пшеиичиые отруби с влажностью 45 -
Во второй период (последующие 8-10 час) происходит обильный рост :мицелия и интенсивное выделение тепла. Температуру в камере в этот период поддерживают в цределах 25-27С и относительную влажность воздуха 100%.
Через 20 час роста вся толща среды прорастает мицелием. Интенсивно растет ферментативная активность, температура воздуха в камере 28-29°С и относительная влажпость воздуха 90-95%. 24-часовая культура Aspergillus oryzae Sfl легко дробится, не имеет спор. Выход культуры по отношению к исходной среде составляет 68-70%.
В процессе культивирования гриба определяют накопление ферментов во времени. Установлено, что, например, амилолитическая активность штамма Aspergillus oryzae 8fl через 24 час его роста составляет 35 edjz абсолютно сухой культуры, а штамма Aspergillus oryzae КС через 24 час роста только 19,6 ед1г абсолютно сухой культуры.
Штамм Aspergillus oryzae 8fl за 24 час роста накапливает всех ферментативных активностей больше, чем обе используемые в настояш;ее время культуры плесневых грибов Aspergillus oryzae КС и Aspergillus awamori 22.
Полученная сухая поверхностная культура Aspergillus oryzae Sfl была испытана в лабораторных и производственных условиях для осахаривания спиртовых заторов с последуюш,им их сбраживанием. Использование этой культуры обеспечивало интенсивность процесса осахаривания и сбраживания и получение высоких выходов спирта с низким содержанием остаточного сахара.
Предмет изобретения
Штамм гриба Aspergillus oryzae. 8fl. Синтетическая среда. Па синтетической среде Чапека колонии бархатистые, в центре слегка клочковатые, ближе к периферии они становятся желтоватыми. Преобладают зеленые тона. Обратная сторона колонии беловатая. Па третьи сутки носле посева диаметр колонии в среднем достигает 3,9 см и спорообразующей зоны 3,4 см.
Морфология. Конидиеносцы без перегородок, бесцветные, с возрастом приобретают легкий коричневатый оттенок. Конидиеносцы большей частью гладкие, на некоторых имеются редко расположенные небольшие вмятины или очень маленькие пологие бугорки. Конндиеносцы в длину достигают 194-350 мк и в попереч.нике 8,3-10,1 мк.
Пузыревидные вздутия имеют шаровидную или слегка удлиненную форму 15,4-27,02Х XI3,2-27,02 мк. Стеригмы однослойные, у.;.лнненные, цилиндрические, на некоторых пузыревидных вздутиях они слегка расширенные или даже клиновидные 11,6X4,6-5,8 мк. Чаще стер.игмы расположены на верхней части пузыря.
Конидии шаровидные с гладкой оболочкой, их диаметр от 3,8 до 11,58 мк. Конидиальные головки шаровидные или слегка удлиненные размером 22-48X22-44 мк. Гифы бесцветные, в поперечнике они имеют от 3,96 до 7,92 мк, иногда они колбовидно утолщены 8,8 мк.
Органические среды. Па сусло-агаре на третьи сутки диаметр колонии достигает 4,5 см и спорообразующей зоны 4,0 см. В центре колонии выпуклые с более высоким мицелием, чем по краю. Они окрашены в желтовато-зеленоватый цвет с преобладанием желтоватых тоиов. Обратная сторона колонии бесцветная.
Па пшеничных отрубях к 30 час культивирования образуется плотный корж, которьп полностью прорастает мицелием. Спорообразование начинается к 36 час, к 48 час становится обильным.
Па рисовых отрубях и рисовой шелухе к 35 час об,разуется плотный корл{, спорообразование начинается к 35 час роста, обильным оно становится к 42 час.
Отношение к сахарам. Пнтенсивно окисляет глюкозу, мальтозу, сахарозу, ксилозу, сорбит, слабее - галактозу, рафинозу, декстрин и маннит.
Желатина. Желатину разжижает. М о л о к о. Пептонизнрует. К р а X м а л. Крахмал гидролизует сильно.
