Способ ферментативного превращения соласодина Советский патент 1988 года по МПК C12N9/00 

Изобретемте относится к биотехнологии и может быть использовано в биологии, энзнмологЕги, микробиологии и медицине.

Цель пэобрете шя - увеличение вы- кода дегндрированиогО соласодинй.

Способ эа1стгючаетсл в проведении нкубации соласодина с соласодимдегид огеиазой .в смесн диметилсульфоксяда дасо), хлороформа и поды о соотноше- ИИ 97-;2; (по объему). Фермент ввде. - яют .из растений (семейство olanuni) или микроорганизмов} напри- ер гриб Aspergflfus ochraceus. Полу.енпый ферментный препарат дельную активиость 40 ед/мг белка, (ондантрация белка в препарате со .тапляет 0,5 мг/мл. Белковый препарат 1аходктся в 0,05 М трис-ИС буфера, И 7,4, Соласодин раст13оряют в смеси 1СО-Х 1ороформ. (97:2). до достижения фёдельиой концентрации 0,4 мг/т-ш. 5 получешгый раствор вводится фермен ный препарат соласодиндегидрогеназы ак, чтобы кЪлячество его составило % от объема раствора соласодина. При облюдении указаииы} соотношений ДМСО адороформа и водной фазы, содержащей шрмЕнт (97 : 2:1), образуется гомоген ibrit раствор,, в гсотором з4 фектиа5ю трот екае г превращение соласодина, Зы- од дегидрнрОБанного соласодина воз зетает в iO по сравнению с извес Т -Л.ГМИ способаг и.

I р и м е р К СоласоДим раство-; эяют в 100 ьш смеси .ДМСО: хлорофорз. |96:3) до достижения концентраций ),ц мгДш- Затем добавляют i мл фер- lerirnoro препарата соласодиндегидро- епазы, растзорепного в 0,05 М трис- -HCI буфере, рН 7,А,, содержащего раст 3jjop НАД€ п кокцентрацин 0,1 Mr/MJi 0,5 нг белка ка мл раствора с з| дельиой активностью (О ед/мг. СМЕСЬ о образует истниного рас7 вора, (ланвается па две фа:)Ы1 ДОСО + } хлороформчую. Количество окислен- i|oro соласодина определяется спектро фотометрически по поглощеииш УФ при флне 340 им, специфич1 ой для НЛДФ1, с бразоватяегосл s зквивалснтньт :|естЕак с окисленным соласодином ti л|оде катйлит5Г еской реакции. Количество образов авшегосп ПАДФН 8 ммо-ль/мин :

Пример 2. Соласодин раствор|яют 13 00 мл смеси ДМСО: мтороформ (196:2) до достижетсия концентрации 01,Д wr/wi. Затем добавляют 2 t-m фер

0 , 5 0 5 0

5

jg ..„ 5

ментного препарата силасоднндет илр - - геназы. Наблюдается расслоение системы. Количество образовавшегося ИЛЛФИ 2 ммоль/мин.

П р и м е р 3. При соотношечии даСОгСНСЦгН О 97;2:1 образуется- гомогенный раствор. Количество образовавшегося 32 мкмоль/мин.

При использовании такой однофазной трехкомпонентной системы для растворения соласоднна, содержащей диметил- сульфоксид (ДМСО), хлороформ (сне.Ig) к воду () в соотношении 97s2:J отсутствуют границы раздела фаз и нет затруднений при связывании субстратй ферментом и освобождении продукта реакции (пример З). Такая система позволяет осуществлять пареное электро- . нов при использовании искусственной цепи переноса электронов от кофермен- та к тётразолевым солям, что необхо- . димо при регистрации активности фер ментов.

Предлагаемая Т1 ехкоьтонентная .система ДМСО СНС15 И2.Ь не оказьюает де- катурирующего действия на ферменты (например.) на глутамат- и соласодиндегидрогеназы) при использовании ее в качестве .инкубационной среды.

Для установления указанного соотношения компонентов расслаивающиеся . смеси хлороформа и .воды (1 : I) титровали ДМСО,до исчезновения границы раздела фаз. Установлено, что увеличение содержания хлороформа в смеси приводит к усилению денатурирующего действия ее на ферменты, а при увеличении содержания воды наблюдается выпадение соласодина в осадок. Предел ть- ная растворш-юсть соласодина в дан- . ней системе 0,4 мг/мл.

Таким образом., использование предлагаемого способа позволяет увеличить выход дегидртфованного соласодина при ферментативном превращении соласодина , Формула изобретения

Способ ферментативного превращения соласодина, вкгоочающий инкубацию соласодина с соласодиндегидрогеназой в присутствии органических растворителей j отличающийся тем, 4TOj с целью увеличения выхода дегид- рпрованного соласодина, инкубацию соласоднна с соласоднндегидрогеназой проводят,, смеси д метилсульфоксг да, хлороформа и воды в соотношении 97:2:1 (по объему).

Изобретение относится к биотехнологии, биологии И медицине. Целью изобретения является увеличение выхода дегидрированного соласодина, что приводит к увеличению возможности ; трансформации его в активном центре ферментов, снижение денатурирующего действия инкубационной среды и повышение выхода продукта. Способ заклю- . чается в применении однофазной трех- компонентной системы для растворения соласодина, содержащей диметилсульф- оксид, хлороформ и водный раствор со- ласодиндегидрогенида в соотношении 97:2:1. В однофазной системе отсутствуют границы раздела фаз и нет эатрудне-г НИИ при связывании субстрата ферментом и освобождении продукта реакции,Такая система позволяет осуществлять перенос электронов при использовании ис1сус- ственной цепи переноса электроноз от электронов от кофермента к тетразоле- вым солям, что необходимо при регистрации активности ферментов. Предлагаемая трехкомлонентная система не оказывает денатурирующего действия на ферменты. Использование способа позволяет увеличить выход дегидрированного соласодина. SS3i