Способ оценки способности препаратов, восстанавливающих метгемоглобин, проникать через клеточную мембрану Советский патент 1961 года по МПК G01N33/49 G01N21/00 

СПОСОБ ОЦЕНКИ СПОСОБНОСТИ ПРЕПАРАТОВ,

ВОССТАНАВЛИВАЮЩИХ МЕТГЕМОГЛОБИН, ПРОНИКАТЬ

ЧЕРЕЗ КЛ,ЕТОЧНУЮ МЕМБРАНУ

Заявлено 18 июня 1960 г. за № 670951/31 в Комитет по делам изобретений и открытий при Совете Министров СССР

Опубликовано в «Бюллетене изобретений № 15 за 961 г.

Известные способы оценки способности препаратов, восстанавливающих метгемоглобин, проникать через клеточную мембрану, основанные на принципе восстановления метгемоглобина в растворе гемолизата, пе позволяют определить скорость проникновения исследуемого препарата внутрь эритроцитов.

В предлагаемом изобретении для измерения скорости проникновения исследуемого препарата внутрь эритроцитов определяют оптическую плотность раствора гемолизата до и после восстановления метгемоглобина в оксигемоглобин.

Пример. В мерную центрифужную пробирку наливают 6,0 мл свежей оксалатной или гепаринизированной крови и меткой фиксируют уровень. В ту же пробирку доливают свежеприготовленный 1%-ный раствор нитрата натрия приблизительно в количестве одной трети объема крови, несколько раз перемешивают и оставляют на 30 минут для образования в эритроцитах нитритного метгемоглобина. Центрифугированием отделяют плазму крови от эритроцитов и четыре раза промывают эритроциты избытком физиологического раствора, центрифугируя взвесь. В результате получают отделенные от плазмы и отмытые от нитрита натрия эритроциты, часть из которых содержит нитритный метгемоглобин. Затем добавляют физиологический раствор до исходной метки и тщательно перемешивают. 0,5 мл полученной взвеси гемолизируют в мерной колбе емкостью 50 лгл добавлением 25 мл 0,067 молярного фосфатного буферного раствора (рН 6,60) и доводят до метки водой. Гемолизат центрифугируют для отделения жидкой его части от стром эритроцитов. Затем с помощью любого спектрофотометрического метода определяют оптическую плотность раствора, т. е. исходную концентрацию метгемоглобина в эритроцитах.

Afb .140:145- 2 -, .

Далее выясняют, обладает ли исследуемый препарат способностью восстанавливать метгемоглобин в растворе гемолизата. Для этого к 50 мл полученного гемолизата прибавляют 10 мг (1 мл 1%-ного раствора) исследуемого препарата и через определенный промежуток времени отмечают, произошло ли восстановление метгемоглобина (по изменению оптической плотности гемолизата). Если факт восстановления метгемоглобина изучаемым препаратом подтвердился для раствора гемолизата, переходят к изучению способности данного препарата проникать внутрь цельного эритроцита. Для этого к оставшейся части взвеси эритроцитов прибавляют 1,0 мл 1%-ного раствора исследуемого препарата, тщательно перемешивают и оставляют на 30 минут. Затем трехкратным промыванием физиологическим раствором и центрифугированием удаляют избыток препарата, оставшегося в жидкой части взвеси. К эритроцитам вновь добавляют до метки физиологический раствор и перемешивают. 0,5 мл этой взвеси гемолизируют, как это было описано выше, и определяют конечную концентрацию метгемоглобина.

Предмет изобретения

Способ оценки способности препаратов, восстанавливаюш.их метгемоглобин, проникать через клеточную мембрану, основанный на принципе восстановления метгемоглобина в растворе гемолизата, отличающийся тем, что, с целью определения скорости проникновения веш,ества внутрь эритроцитов, определяют оптическую плотность раствора.