Питательные среды для культивирования возбудителя туляремии Советский патент 1961 года по МПК C12N1/20 C12Q1/04 

Микроб туляремии крайне прихотлив к условиям жизнедеятельности, поэтому для его культивирования непригодны простые питательные среды. Известные питательные среды для культивирования возбудителя туляремии готовятся на основе агара с примесью крови и желтков и без них. Отличие предлагаемой питательной среды заключается в введении в ее состав аминопептида-2. Эта среда может быть рекомендована для лабораторий, так как она легко изготовляется с заранее заданными свойствами и не требует применения дефицитных материалов.

Рекомендуется следующая рецептура сред.

1.Высокочувствительная среда: аминопептид-2 60%

агар Д 2,5%,

дифибринированная кровь кролика 5%,

дистиллированная до 100%.

Эта среда характеризуется ростом 1 микробной клетки туляремии и урожайностью 3-3,6 млрд. микробных тел с каждого 1 с.н среды (при УСЛОВИИ засева на пробирку с 5 см скошеннот среды 5 млн. микробных тел в 0,1 см физраствора).

При добавлении крови среда становится непрозрачной. После засева микроба туляремии пробирку в горизонтальном положении укладывают в термостат при минус 36 минус 37°.

2.Прозрачная среда для получения роста из органов животных зараженных туляремией, и получения роста микробов туляремии в пересевах:

аминопептид-2 20-25%. агар Д 5%,

вода дистиллированная до 100%.

Эта среда дешевле желточной, прозрачна. Рост из органов отмечается в срок 1--3 суток после посева, а в пересевах через 1 сутки.

№ 140956--- 2 3. среда с кровью или желтком для получения роста из органов животных:

аминопептид-2 20%,

сухой питательный агар 5%,

кровь (желток) 5(10%),

дистиллированная вода до 100%.

По указанным рецептам питательную среду готовят по следующей методике.

Сухой агар, промытый водой, расплавляют в фосфатном буфере рН 7,4 или в дистиллированной воде. Полученный агар стерилизуют в автоклаве при 120° в течение 30 мин.

В охлажденный до 60° .агар добавляют стирильно подогретый до 50° аминопептид (подогрев осуществляют в запаянной ампуле), затем смесь нагревают до кипения, после чего при 50° добавляют кровь или желток (если это предусмотрено рецептурой), перемешивают и разливают по пробиркам или чашкам Петри.

Среда без крови и желтка хранится длительное время (до 4-5 месяцев).

Добавление крови и желтка лучше проводить за несколько дней перед употреблением.

Туляремийный отдел Иркутского противочумного института провел апробацию питательных сред, предложенных для выращивания туляремийного микроба.

Питательные среды готовились по описаной л етодике.

Качество питательных сред проверялось как посевом на них титрованных доз вирулентных туляремийных штаммов (№ 22 и 541), так и высевом из органов белых мышей, зараженных В. tularense 220.

В заключении институт указывает, что среды с аминопептидом при обогащении их кровью обладают «чувствительностью и могут быть рекомендованы для применения их в диагностической практике.

Предмет изобретения

Питательные среды для культивирования возбудителя туляремии, на основе агара с примесью крови и желтка или без них, отличающиеся тем, что, с целью замены дефицитного цистина, в их состав введен аминопептид-2.