Штамм бактерий RнIZовIUм меLILотI для оценки конкурентоспособности штаммов клубеньковых бактерий люцерны Советский патент 1988 года по МПК C05F11/08 C12N1/20 C12N1/20 C12R1/41 

со

О)

Изобретение относится к микробиологическим средствам повышения урожайности бобовых растений и предназначено для оценки конкурентоспособности штамг-ioB клубеньковых бактерий люцерны.

Цель изобретения - получение нового конкурентоспособного штамма клубеньковых бактерий люцерны, лишенного способности ассимилировать молекулярный азот.

Штамм бактерий Rhi6;obium meliloti 4076 получен из штамма Rhizobium meliloti CXMl под действием УФ-излуче- ния. Он несет генетическую метку устойчивости к стрептомицину и образует на корнях лйцерны большое количество мелких округлых клубеньков белого цвета.

Штамм депонирован во Всесоюзной коллекции клубеньковых бактерий во ВНИИ сельскохозяйственной микробиологии под номером 4076.

Штамм Rhizobiura meliloti 4076 хорошо растет на питательных средах следующего состава, г/л:

1.Бобовый агар: горох 100; сахароза 20; агар 20; рН 6,8-7,2.

2.Модифицированная среда Парийс- кой: пептон 2,0; дрожжевой экстракт V, 0; маннит 8,0; агар 20,, 0; рН 6,8- 7,2.

3.Маннитно-дрожжевой агар: 5,0; MgS04-7H O 0,2; NaCl ОJ; СаСОз следы, дрожжевой экстракт 1,0; маннит 10,0; агар 20,0; рН 6,8-7,2.

Мофолого-культуральные признаки штамма Rhizobium meliloti 4076 (ВНИИСХМ).

Величина клеток суточной культуры на бобовом агаре 0,5-l, мкм. Клетки имеют вид палочек. Перитрихи. В молодом возрасте.подвижны, при старении утрачивают подвижность. Старые клетки располагаются в полисахарт-щ- ных капсулах. Грамотрицательные. Быстрорастущие. Штрих на бобовом агаре полупрозрачный, слизистый, блестящий. Колонии на агаризованных средах однотипные, круглые, выпуклые, с четкими краями, до 3 мм в диаметре.

При посеве на мясопептонный агар штрихом образует скудный штрих кремо- вато-белого цвета.

Физиологические признаки штамма R.meliloti 4076 (ВНИИСХ 1).

Молоко, с naкt lycoм не пептонизируют, подщелачивают с образованием сли

5

0

5

0

5

0

0

зистои прозрачной зоны на поверхности, затем подкисляют.

Желатину не разжижают.

Клетчатку не усваивают. Аэробы. Оптимум температуры ,1Ц1я роста . Оптимальное значение рН среды 6,8- 7,2. Прототрофы.

Пролин и нуклеиновые основания оказывают стимулирующее действие на рост бактерий.

Отношение к углеводам: растет на средах с углеводами, подкисляя среду. Актшзно усваивают арабинозу, гаг лактозу, глюкозу, лактозу, мальтозу, маннит, сахарозу, фруктозу Слабо усваивают дульцит, инозит, ксилозу, рамнозу, раффинозу, сорбит. Не усваивают декстрин, крахмал.

Отношение к источникам азота; используют соли аммония и азотной кис лоты, карбамид и аминокислоты. Признаки штамма устойчивы.

Штамм несет генетическую метку устойчивости к стрептомицину 1 г/л среды). Имеет серотип штамма 425 а.

Штамм непатогенен.

Пример. Изучение конкурентоспособности производственного штамма 425а и других эффективных штаммов клубеньковых бактерий люцерны.

Оценка конкурентоспособности штам мов заключается в совместной инокуляции проростков люцерны штаммом R.me- liloti 4076 и одним из эффектнвньпс штаммов и дальнейшем установлении преобладания того или иного штамма по методу Амарже.

Титр бактерий штамма 4076 в ино- куляте, необходимый для оценки конкурентоспособности активных штаммов по массе люцерны, определяли в экспериментах с различной концентрацией штамма 4076 в инокуляте. Для этого в экспериментах использовали контраст тно различающиеся по конкурентоспособности активные штаммы R.meliloti CXMl-219 и СХМ1-220, маркированные устойчивостью к стрептомицину и кана- Минину.

Конкурентоспособность штаммов определяли по массе растений согласно

V ::

(Aj;H) Л - Н (Л+Н) - масса при совместной инокуляции активным и неактивным штаммами ;

314096

А - масса лгоцерны при инокуляции активным штаммом; Н - масса люцерны при инокуляции неактивньЕМ штаммом. Результаты совместной инокуляции люцерны парами штаммов (4076 219, 4076 и СХМ1-220) при различной концентрации штамма 4076 приведены в табл. 1.

10

чт

Из данных табл. 1 установлено, по конкурентоспособности штаммы СХМ1-219 и СХМ1-220 резко различаются между собой, что подтверждается как по определению массы люцерны, так и по продуценту клубеньков, сформированных ими, что наблюдается при .соотношении активного штамма к неактивному 1:10.

В табл. 2 приведены результаты, полученные при совместной инокуляции люцерны парами штаммов (4076 и 425а,

096

.

10

15

20

4075 и СХМ1-105, ЛОУГ и г -М1-17 )) при соотногаении активного гмтаммт к неактивному 1:10, как в условиях стерипьного микровегетац1гонного, тпк и вегетационного хопытов. Конкурентоспособность определяли путем оценки массы люцерны и вычислений по указанной формуле.

Из табл. 2 следует, что, используя штамм R.meliloti 4076, можно по методу Амарже (по массе растений) оценивать конкурентоспособность различных штаммов в клубеньковых бактерий люцерны.

Формула изобретения

Штамм бактерий Rhizobium meli- loti ВНИИСХМ 4076 для оценки конкурентоспособности штаммов клубеи1,ко- вых бактерий люцерны.

Изобретение относится к области микробиологических средств повьппения урожайности бобовых растений и предназначено для оценки конкурентоспособности различных штаммов клубеньковых бактерий люцерны. Оценка конкурентоспособности штаммов клубеньковых бактерий люцерны проводят при использовании штамма Rhifcobium meliloti 4076 (ВНИИСХМ), лишенного способности ассимилировать молекулярный азот по методу Амарте. Штамм получен из штамма Rhizobium meliloti СХМ-1 под действием УФ-излучения. 2 табл. i СЛ

Контроль б/и (спонта

заражение)

4076

CXMI-219

СХМ -219+4076 (lO. l)

СХМ1-2194-407б(1:)

СЖ1-2194-4076 (: 10)

СХМ1-220+4076(10:1)

СХМ1-220+4076(1:1)

СХМ1-220+4076(1:10)

Таблиц

100 96 82 42 )00 94 90 92

Контроль б/и (спонПовторность 6-кратная. Повторность 8-кратная,

Таблица 2