Способ определения антиэритроцитарных антител в сыворотке крови животных Советский патент 1988 года по МПК G01N33/534 

00 О5

Изобретение о тносится к имт гуноло- гии и может быть использовано для определения антиэритрог итарных антител в сыворотке крови животных.

Целью изобретения является повьше- ние чувствительности способа за счет метки антител in vivo радиоактивной аминокислотой С-глитщном и подсчета радиоактивности комплекса меченые антитела - эритроциты в сцинтилляци- онном счетчике.

Пример 1. Трехмесячных мышей линии СВА массой 20-22 г иммунизировали .внутрибрюшинно введением эритроцитов барана в 0,2 мл раствора натрия хлорида. Через 72 ч после иммунизахщи в- хвостовую вену животных вводили раствор С-глицина из расчета 1 мкКи/г массы животного, Спустя 60 ч после введения радиоактивной аминокислоты из заднеорбитального синуса животного nacTepoBCKofi пипеткой забирали 0,5 мл крови, Полу ченную сыворотку разводипи в 4 раза 0,02 М фосфатным буфером с рН 7,4 на 0,15 М раствора натрия хлорида и инактивиро- вали в течение 30 мин при , По 0,1 мл приготовленной таким образом сыворотки вносили в лунку 96-ячееч- кого пластикового микротитратора для иммунологических реакций с круглым дном. Затем в ту же лунку добавляли 0,1 мл 5%-ной взвеси эритроцитов.барана и инкубировали 2 ч при 20°С. После инкубахщи эритроциты трижды отмывали центрифугированием (по 5 мин при 1500 об/мин на центрифуге рПН-1) в 0,02М фосфатном буфере с рН 7,4 на 0,15 М растворе натрия хлорида и пе- реносили в счетные флаконы, содержащи 1 сцинтилляционной жидкости. Радиоактивность антиэритроцитарных антител содержащихся в исследуемом образце сыворотки и присоединивщихся к эрит

,

5 0 5О Q -дз

5

poiyiTaM, измеряли с помощью сцинтил- ляционного /}-спектрометра и выражали в ./миHc

В этих условиях среднее количество антител (6 животных) составило 25331,7 ± 19,807 имп/мин„

Пример 2. Иммунизацию мышей и подсчет количества антител проводили, как описано в примере 1, но вводили C-глиlц н в дозе 5 мкКи/г за 24 ч до взятия крови и использовали 10%-ну(о взвесь эритроцитов.

В таких условиях количество антител составило (среднее из 6 животных)

14002.4+ 19,946 имп/мин. Пример 3. Иммунизацию мышей

и подсчет количества антител проводили, как описано в примере 1, но вводили С-глицин в дозе 2,5 мкКи/г за 48 ч до взятия крови и использовали 10%-ную взвесь эритроцитов.

В этих условиях количество антител составило (среднее из 6 животных)

13162.5± 62,0 имп/мин.

Формула, изобретения

Способ определения антиэритроцитарных антител в сьшоротке крови живот- ньк, включающий забор крови, вьщеле- ние из нее сыворотки, термоактивацию и инкубацию сьторотки с эритроцитами, отличающийся тем, что, с целью повьщ1ения чувствительности спо-, соба, перед забором крови за 24-60 ч в вену вводят раствор аминокислоты С-глицина в дозе 1-5 мкКи/г массы, тела, а инкубацию сыворотки осуществляют с равным объемом отмытых изотоническим раствором при рН 7,2-7,6 5-10%-ной взвесью эритроцитов, далее измеряют радиоактивность и по ее величине определяют количество антизри- троцитарных антител.

Изобретение относится к иммуно- логин. Цель изобретения - повышение чувствительности способа. Мышам вводят эритроциты барана. Затем внутри- брюшинно животным вводят раствор С-глицина. Через 24-60 ч у животных производят забор крови. Сьшорот- ку крови разводят и инактивируют. Эритроциты барана добавляют в лунки с сьшороткой крови, инкубируют и центрифугируют.- Радиоактивность антиэри- троцитарных антител измеряют с помощью СЦИНТШ1ЛЯЦИОННОГО р-спектрометра о -