Способ качественного определения сарколизина и продуктов его гидролиза в крови и солевом водном растворе Советский патент 1961 года по МПК G01N33/50 

Для лечения злокачественных опухолей наряду с хирургическими и лучевыми методами лечения приобретает значение химиотерапия пораженных тканей. В лекарственной терапии опухолей большое значение имеют способы быстрого и простого определения противоопухолевых препаратов, представляющих собой в основном группу хлорэтиламинов. Известные способы опредеутения хлорэтиламинов, к которым относится и сарколизин, например, косвенный способ электрометрического титрования Н и С1 ионов, способ мгновенного определения гипосульфитного титра, способ меченых по углероду атомов, способ спектрофотометрического определения в сочетании с хромографией на бумаге трудоемки, продолжительны и рассчитаны на наличие значительного количества исследуемого вещества.

Предлагаемый способ качественного определения сарколизина и продуктов его гидролиза в крови и солевом водном растворе является экспресс-методом, причем чувствительность при его применении определяется гаммами. С целью упрощения и ускорения процесса определения, в исследуемую жидкость вносят трихлоруксусную кислоту, нингидрид и полученную смесь прогревают на кипящей водяной бане. Пример 1. Определение сарколизина в крови.

В одну пробирку наливают 1 мл контрольной плазмы, в другую - 1 мл плазмы исследуемой крови; в каждую пробирку добавляют по 0,2 мл 60%-ной трихлоруксусной кислоты и перемешивают смесь стеклянными палочками. В одну из пробирок приливают 1 мл 1%-ного нингидрина и тотчас тщательно перемешивают. Затем добавляют 1 мл 1%-ного нингидрина в другую пробирку и также тотчас перемешивают. Затем обе пробирки ставят в кипящую водяную баню на 10-15 мин, после чего сравнивают окраски смеси в пробирках. В опытной пробе

№ 142075 - 2 при надичии сарколизина появляется розоватое окрашивание смеси. Таким образом можно обнаружить сарколизин при содержании его 0,02 мг/мл. Продолжительность анализа 15-20 мин. Значительный гемолиз (более 90-100 мг/%) может мешать качественному определению сарколизина в кр6ви. Пример. 2, ,л(Эпр(еделение сарколизина в солевом водном растворе.

На часовое стекло-микропипеткой наносят две одинаковые по объему капли солевого раствора: одна капля-контрольная проба (без сарколизина), другая - исследуемая на содержание сарколизина. К каждой из капель прибавляют по такому же объему 1%-ного раствора нингидрина, нагревают в течение около 30 сек над. пламенем газовой горелки, затем дают остыть в течение 3-5 мин, после чего стекло вновь нагревают не менее 30 сек. В результате повторного нагревания в опытной пробе ясно вырисовывается интенсивно окрашенный коричневокрасноватый ободок. Незначительное окрашивание ободка может появиться и в контрольной пробе за счет некоторого окисления нингидрина, однако в опытной пробе ободок окрашен гораздо ярче в результате реакции нингидрина с фенилаланиновым остатком сарколизина. Предел чувствительности реакции равен 0,18 сарколизина в капле, что составляет открываемый минимум препарата порядка 0,009 мг/мл- В случае работы с более концентрированными раствора.ми сарколизина повторное прогревание проб может не требоваться.

Описанный способ проведен в Институте экспериментальной и клинической анкологии; по данным проверки установлено, что кроме сарколизина окрашивание получается и при взаимодействии нингидрина с продуктами гидролиза сарколизина в.водном растворе.

Предмет изобретения

Способ качественного определения сарколизина н продуктов его гидролиза в крови и солевом водном растворе, отличаюшийся тем, что, с целью упрощения и ускорения процесса, в исследуемую жидкость вносят трихлоруксусную кислоту, нингидрин и полученную смесь прогревают на кипящей водяной бане.