Способ получения монофосфатов полипренолов Советский патент 1988 года по МПК C08C19/24 C07F9/113 

00

to

Изобретение относится к хиьши полимеров и органической химии и может быть использовано в биохимических исследованиях. Изобретение позволяет получать монофосфаты полипренолов с выходом 80-85% и упрощенным способом что достигается исполвэсванием -в способе получения монофосфатов полипренолов путем взаимодействия .-полиН пренолов с замещенными солями ортофос- форной кислоты в присутствии трихпор ацетонитрила в среде апротонного органического растворителя моно-(тетра-н- бутиламмоний)-фосфата, проведением процесса при молярном соотношении полипренол:фосфат: трихлорацетонитрил, § равном 1:4-10:25-50, последующим осаж- денлем неорганических фосфатов амми- у/) аком и обработкой суммы фосфорилиро- ванных производиых полипренолов водным раствором 4-диметиламинопиридина г или N-метилимидазола..

О) СП

Изобретение относится к химии полимеров и оргаиическбй хи}«и, а именно к способу получения ионофосфатов л

С-«С CHj/ СН,где а 1-3; б « 1-15; в О-. и может быть использовано в биохимических определениях.

Целью изобретения является повы- шение ш рсода целевых продуктов и упрощение способа,

В качестве исходных полифенолов используют фарнезол, морапренол и долихол.

В качестве органического ,растворителя используют любой апрптонный растворитель, в котором хорошо растворим как моно-(тетра-н-бутил аммоний)-фосфат, так и фосфорилируе- мый полипренол, например ацвтонит- рил, его смесь с бензолом или четы- реххлористым углеродом, хлороформ или хлористый метилен. В случае применения для фосфорилирования выспшх полипренолов только ацетонитрила реакционная смесь должна содержать трихлорацетонитрил (в котором хорошо растворяются все полипренолы) в таком количестве, чтобы после прибавления всего количества ацетонитриль- ного раствора моно-(тетра-н-бутил- аммоний)-фосфата реакционная смесь оставштась гомогенной (объемное отношение трихпорацетонитрилгацетонит- рил / s3),

В качестве нуклеофильного катализатора применяют 4-диметиламинопири- дин или К метилимидачоЛв

Пример 1. Получение морапре- шшфосфата.

Морапренол (о(-ненасыщенный С jy- полипренол из листьев шелковицы, 100 мг, 130 ) растворяют в 0,5 МП (5 ммоль) тризшора1 ;етонитрила и прибавляют при встряхивании 1,2 мл р аствора но но-(тетр а-н-бутил аммоний) фосфата (540 мкмоль) в ебс. ацетонит риле. Через 15 мин растворители удаляют в вакууме, 2 раза отгоняют от- остатка по 1 мл толуола. Остаток р астворякгг в 1 ,5 мл тетрагидрофурана и прибавляют 0,3 МП 25%-ного аммиака Через 16-15 мин прибавляют 5 ют толу

липренолов, причем последние имеют общую формулу

/СН,

Ч

Н

CHs

сн-сЯ|-сН|- -он,

ij ,

0

5 Q

5

5

ола и 5 мл метанолу. Перемешивают, дают отстояться, надосадочную жид кость отделяют, осадок промывают дважды смесью толуол - метанол 1;1. Раствор и промывную жидкость упаривают досуха, 2 раза с 3 мл пропанола для удаления толуола, растворяют в 1 мл пропанола и постепенно при встряхивании прибавляют 40 мл дистиллированной воды, К раствору прибавляют 30 мг (245 мкмоль) 4-диметиламинопи- ридина и кипятят 8 ч с обратным холодильником. Прибавляют при охлаждении 60 мл пропанола упаривают досуха . на роторном испарителе, остаток растворяют в смеси хлороформ: метанол 2:1 (30 мл) и перемешивают 1 ч с избытком даузкса 50W 8 (Ру ), Смолу ровьгоают, промывают этой же смесью растворителей, прибавляют 0,5 мл 25%-ного аммиака и упаривают раствор досуха. Остаток растворяют в толуоле и через 3 Ч при 4 С осадок удаляют, Толуольный раствор упаривают, остаток растворяют в 50 мл смеси хлороформ: метанол 2:, наносят на колонку с DE-52(OAc), 1x10 см, уравновешенную той же смесью растворителей, промывают колонку 30 мл этой смеси и 30 мл метанола и злюируют целевой продукт 40 мМ раствором ацетата аммония в метаноле (50 мл). Продукт однороден по тех в системе хлороформ:метанол: вода 60:25:4 R g 0,50, По данным анализа отношение кислотолабильного фосфата и полипренола составляет 1,05:1 (теор, 1:1), Выход ПО мкмоль (85%),

П р и м е р 2, Получение долихил- фосфата,

Долихол (е -насыщенный С 95 полипренол из печени свиньи, 100 мг, 76 мкмоль) растворяют в 0,2 мл абс, бензола, прибавляют 0,4 МП (i4 ммоль)- трихлораце- тонитрила и, при встряхивании, 1,5 мл раствора моно-(тетра-н-бутиламмоний)- фосфата (750 мкмоль) в абсолютном ацетонитриле. Через 10 мнн растворн- тали удаляют в вакууме, отгоняют 2

раза по 1 мл толуола, растворяют в 3,5 мл тетрагидрофурана и прибавляют 0,8 мл 25%-ного аммиака. Через 20 мин прибавляют 10 МП толуола и 5 мл метанола, упаривают досуха и 3 раза с 2 мл толуола растворяют в 20 мл толуола. Через 10 мин толуольный слой отделяют от сиропообразного осадка, остаток про№1вают 2 раза по А мл смеси толуол - метанол 1:1. Раствор упаривают досуха и 2 раза с 3 мл пропано- ла, растворяют в 1,5 мл пропанола и постепенно при встряхивании прибавляют 40 мл дистиллированной воды. К опалесцирующему раствору прибавляют 60 мг (490 мкмоль) 4-диметнламинопири дина и кипятят с обратным холодильником 10 ч. По охлаждении прибавляют 70 мл пропанола, упаривают досуха и 2 раза с 2 мл пропанола, растворяют в 30 мл смеси хлороформ:метанол 2:1 и перемешивают с избытком дауэкса 50Wx8 (Ру) в течение 2 ч. Смолу отфильтровывают, промываюгг зтой же смесью растворителей, прибавляют 0,2 мл 25%-ного аммиака, упаривают досуха и 2 раза с 2 мл толуола растворяют в 20 мл толуола и выдерживают 4 ч . Осадок отделяют, промывают толуолом, упаривают досуха толуольный раствор, остаток растворяют в 50 мл смеси хлороформ: метанол 2:1 и наносят на колонку с ;iE-Ii2(OAc), 1 Ю сМ уравновешенную той же смесью растворителей. Элюируют долихилфосфат 50 мл 40 мМ раствора ацетата аммония в смеси хлороформ:метанол 2:1. Продукт однороден по тех в системе хлороформ: метанол:вода 60:25г4, Rr 0,65. По данным анализа отношение долихолгкислото лабильиый фосфат: общий фосфат составляет 1:0:0,96 (теор. 1:0:1). При необходимости ацетат аммония удаляют на колонке с 1 Н-20 (пример 1). Выход 61 мкмоль (80%).

Пример 3. Получение фарнезил- фосфата.

Фарнезол (о(-ненасыщенный С ,у-поли- ,пренол, смесь изомеров, 50 мкл, 200 мкмоль) растворяют в 0,5 мл (5 ммоль) трихлорацетонитрила и прибавляют 2 мл раствора моно-(тетра-н- бутиламмоний)-фосфата (1 ммоль) в ацетонитриле. Через 10 мин растворители удаляют в вакууме, остаток раст- воряют .в 3 мл тетрагидрофурана и прибавляют 0,6 мл 25%-ного аммиака. Через 20 мин прибавляют смесь 5 мл.

5

0

5

0

5

0

5

0

5

метанолами 10 мл толуола, перемешива- ют, дают отстояться, осадок отделяют, промывают толуолом и метанолом,упаривают досуха и 2 раз а с 3 мл пропанола растворяют в I мл пропанола и при встряхивании прибавляют 40 мл дистиллированной воды. К полученному раствору прибавляют 60 мг (490 мкмоль) 4 диметиламинопиридина и кипятят 10 ч с обратным холодильником. После охлаждения прибавляют избыток дауэкса (Ру), перемегаивают 1 ч, смолу отфильтровывают, прибавляют 0,5 мл 25%-ного аммиака, упаривают досуха, прибавив предварительно 80 мл пропанола,и 2 раза со смесью толуол:метанол 1:1. Растворяют в толуоле, через 3 ч при отфильтровывают осадок, промьгоают толуолом и смесью толуол: метанол 1:1 и упаривают досуха. Остаток растворяют в 50 мл смеси хлороформ: метанол 2:1, наносят на колонку (1, см) с.ЛЕ-52 (ОАс ), уравновешенную той же смесью растворителей, промывакгг 30 мл зтой смеси и 30 мл метанола и элюируют 100 мл 40 ьд раствора ацетата аммония в метаноле. Продукт однороден по ТСХ в системе хлороформ:метанол:вода 60:25:4, Rf 0,35, выход 160 мкмоль (80%), отношение фарнезол:кислотолабильный фосфат 1:0,97 (теор.1:1).

Пример 4. Все операции проводят аналогично примеру 3, но из 20 мкп (80 мкмоль) фарйезола, 0,2 мл (2 ммоль) трихлорацетонитрила и 400 мкмоль моно-(тетра-н-бутш1- аммоНИИ)-фосфата и с использованием на стадии гидролиза 40 мкл (500 мкмоль) N-метшшмидазола в ка- .честве нуклеофильного катализатора. Выход 66 мкмоль (83%) фариезнлфос- фата.

Пример 5. Аналогично примеру 3, но моно-(тетра-н-бутиламмоний)- фосфат растворяют в 0,5 мл хлороформа, предварительно пропущенного через колонку с оксидом алюминия II степени активности. Выход фарнезил- фосфата 162 мкмоль (81%),

П р и м е р 6 (контрольный). Аналогично примеру 1, но с 250 мкмоль МОно-(тетра-н-бутиламмоний)-фосфата. Выход морапренилфосфата 65 мкмоль (50%).

П р и м е р 7 (сравнительньА). Фикапренол (й(-нёнасыщенного С 55 ппли- пренола из листьев фикса) раствопяют

в трихлорацетонитриле и постепенно прибавляют к этой смеси при перемешивании раствор бис-(триэтиламмоний)- фосфата я ацетонитриле. Процесс проводят при молярном отношеиии полипре- нол:бис-(триэтш1аммоний)-фосфат:три- хлорацетонитрил: Is2,3-l5, После удаления растворителей и растворения остатка в смеси хлороформа и метанола неорганические фосфаты удаляют, экстрагируя водой, а органический слой подвергают анионообмеиной хроматог- рафин на ДЭАЭ-целлюпозе. Выход фика- пренилфосфата составляет 20%.

Формула изобретен И я

Способ получения монофосфатов по- липренолов взаимодействия поли0

S

0

преьолов, содержащих атомы углерода Cjj замещенными аммониевыми солями ортофосфорной кислоты в присутствии трихлорацетонитрила в среде апротонного органического растворителя, отличающий ся тем, что, с целью повыиения выхода целевых продуктов и упрощения процесса, в качестве замещенной аммониевой соли ортофосфориой кислоты используют моно-(тетра-и-бутиламмоний)-фосфат и процесс проводят при молярном отношении полипренол:моно-(тетра-н-бутил- аммоний)-фосфат:трихлор ацетонитрил lsA-10:25-50 5 с последующей последовательной обработкой полученного продукта аммиаком и водным раствором 4- диметиламинопиридина или N-метилими- дазола.