Способ получения производных силибинина Советский патент 1988 года по МПК C07D407/02 A61K31/357 A61P17/02 A61P39/00 

о

Изобретение относится к способу получения новьпс производных силибини- на, которые обладают фармакологической активностью и эффективны при ле- чении цирроза печени и токсическшс и метаболических поражений печени, а также оказьгоают фармакологическое действие при лечении ожоговых ранений и при отравлении грибами.

Цель изобретения - получение но-и вых соединений с ценными биологическими активными свойствами.

Силибин, ранее известный как Silymarin 1,являющийся ценным лекар- ственным препарх том для лечения заболевания печени, состоит из двух изомеров: силибинина и изосилибина.

При терапевтическом применении си- либина возншсают трудности, связан- ные с тем, что он практически не растворяется в воде, и поэтому на основе его нельзя приготовить силибинсо- держащие растворы для инъекций или препараты, для которых необходимым условием является определенная растворимость в воде.

Описаны,производные сиЛибина, обладающие некоторой растворимостью в воде. Однако в этом случае имеет нес- то очень сложная смесь полуэфиров янтарной кислоты. Эта смесь является потому такой сложной, что у силибина имеется пять гидроксильных групп, которые могут этерифицироваться. Кроме то го, силибин является смесью двух -указанных изомеров положения, а используемая для этерификации янтарная кислота является дикарбоновой кислотой, которая может образовьшать как моно- так и диэфиры. Для фармацевтических ; целей продуЕст, состоящий из большого числа самых различных неидентифицированных соединений, является непригодным.

Данный способ позволяет получить подходящие для фармацевтических целей водорастворимые производные силибинина, которые можно было бы точно идентифицировать как индивидуаль- ные химические соединения. .

СилибининЬвые производные определенных алкановых и алкиленовых дикар боновых кислот удовлетворяют этим . требованиям.

Д р и м е р 1. Получение силибинина, не содержащего изосилибинин. Суспензию 500 г с содержанием силимарина около 70% при соотношении изомеров силибин:силидианин:сили- кристин 3:1:1, причем силибин содержит около 1/3 изосилибинина в 2 кг метанола, что соответствует 2,53 л, нагревают при перемешивании в течение 15 мин до кипения, Из полученного таким образом раствора спустя это время уже может выпадать в осадок некоторое количество силибининао После этого отгоняют в вакууме 0,75- 1,25 кг (0,96-1,58 л) метанола и остаток оставляют стоять при комнатной температуре в течение 10-28 дней Вьшадающий в осадок силибинин от- фильтровьшают и двалоды промьшают холодным метанолом порциями по 50 мл. После высушивания при 40°С в ваку- уме полученный сырой силибинин подвергают дальнейшей очистке следующим образом.

60 г сырого силибинина растворяют при нагревании в 3 л технического уксусноэтилового эфира, после чего смешивают раствор с 20 г активированного угля и кипятят смесь при перемешивании в течение 2 ч с. обратным холодильником. Затем ее фильтруют до Ъолучения прозрачного раствора, который упаривают при 50 С и пониженном давлении до примерно 250 мл. Концентрат перемешивают в течение 15 мин с помошью прибора ультратурракса и при перемешивании добавляют к нему 25 мл метанола, после чего смесь оставляют стоять на ночь при комнатной температуре. Перед отфильтрованием на нут- че выпадающего при этом осадка силибинина смесь еще раз перемешивают в течение 5 мин с помощью ультратурракса. Полученный на нутче осадок дваж- лы промывают уксусноэтиловым эфиром порциями по 50 мл.и высушивают в течение ночи в вакуумном сушильном шкафу при 40 G. Затем полученный продукт измельчают и продолжают сушить в вьш1еуказанных условиях в течение еще 48 ч.

П р и м е р 2. Получение силиби- нин-С-2 ,3-дигидросукцината.

50 г силибинина растворяют при 45 С в 70 мл пиридина, добавляют к раствору 50 г ангидрида янтарной кислоты, перемешивают смесь в течение примерно 8 ч при , добавляют к ней 30 мл этанола и продолжают перемешивание до образования гомогенной смеси. Затем при интенсивном перемешивании добавляют к ней для омыления

314368754

фениловьгх эфиров в течение примерно относится к карбонильной функциональ- 30 мин 60 мл воды. После перемеши- ной группе пиронового кольца при дли- вания в течение примерно часа при фениловые эфиры количественно гидролизуются. Полноту гидролиза контролируют с помощью высокопроизводи-: тельной жидкостной хроматографии. Гидролиз прекращают, быстро добавляя к смеси 1,7 л уксусноэтилового эфира.

Для отделения избытка янтарной кислоты и пиридина разбавленный ук- сусноэтиловым эфяром реакционный раствор дважды шэдвергают экстракции водой порциями по 5 л, насыщенной ук- сусноэтиловым эфиром и имеющей рН 1,85 (подкисление до этого рН осуществляется с помощью разбавленного водного раствора соляной кислоты). Экстракция осуществляется противотоком. При этом насьщ(еннун) уксусноэти- ловьм эфиром подкисленную промывную воду подают с помощью насоса в цирне волны 1635 . Вторая линия име- g ет дли ну волны 1730 см и OVHOCHT- ся к обоим эфирным карбонильным функ- циональньм группам.

Н-ЯМР-спектр подтверждает, что в ходе реакции произошла двукратная эте10 рификация. Так, полу енное путем интегрирования соотнощение ароматических протонов и протонов метилена остатка янтарной кислоты (м.д. в районе 5,9-7,1) равна 8:8. Отношение

15 этих протонов метиленовой группы

(м.д, 2,6) к протонам метила меток- си- группы (м.д. 3,8) равно 8:3, та-- КИМ образом, -согласуется с вышеприведенным значением.

20 Химические сдвиги, обнаруженные в процессе С-исследований также свидетельствуют об этерификации обеих спиртовых ОН-групп, так как химические сдвиги сильнее всего изменяются у

относится к карбонильной функциональ- ной группе пиронового кольца при дли-

не волны 1635 . Вторая линия име- ет дли ну волны 1730 см и OVHOCHT- ся к обоим эфирным карбонильным функ- циональньм группам.

Н-ЯМР-спектр подтверждает, что в ходе реакции произошла двукратная этерификация. Так, полу енное путем интегрирования соотнощение ароматических протонов и протонов метилена остатка янтарной кислоты (м.д. в районе 5,9-7,1) равна 8:8. Отношение

этих протонов метиленовой группы

(м.д, 2,6) к протонам метила меток- си- группы (м.д. 3,8) равно 8:3, та-- КИМ образом, -согласуется с вышеприведенным значением.

Химические сдвиги, обнаруженные в процессе С-исследований также свидетельствуют об этерификации обеих спиртовых ОН-групп, так как химические сдвиги сильнее всего изменяются у

Изобретение относится к гетероциклическим соединениям, в частности к способу получения производных сили- бинина формулы О ,СНг-0-СО-А 1-СООМ ОСНз о 0-СО-А1Н-СООМ где Alk - алкиленовый остаток с 1-4 атомами С. и М- Н или атом щелочного металла, которые используются в медицине. Получение целевого соединения ведут взаимодействием 1 мае.ч. сили- бинина в 1-2 мае.ч. пиридина с 1- 3 мае.ч. соответствующего ангидрида дикарбоновой кислоты {перемешивание) при 40-50 С последующим добавлением этанола до образования гомогенно( смеси. Затем при интенсивном перемешивании постепенно добавляют воду, ,. при этом имеющиеся сложные эфиры гид- ролизуются до ароматически связанных ОН-групп и после окончания гидролиза реакционную массу разбавляют этил- ацетатом, промьгоают подкисленной до рН 1,5-2,4 водой, насьпценной этил- ацетатом. Полученную этилацетатную фазу концентрируют, обрабатьшают этанолом, выделяют соединения формулы

куляционном контуре навстречу по от- 25 атома cVi и соседних атомах углеронощению к разбавленному реакционному раствору и поддерживают путем добавления разбавленной соляной кислоты рН 1,85 до тех.пор, пока это значение его после пропускания уксусноэтилового эфира не остается постоянНЬ1М.

Затем уксусноэтиловую фазу для извлечение из нее избытка соляной .. кислоты дважды подвергают экстракции противотоком водой порциями по 3,4 л насыщенной уксусноэтиловым эфиром. Как только рН промьшной воды становится больше 4,5, органическую фазу .

количественно отделяют, упаривают при до Р в количеству, соответствующему

40-50 С в вакууме до 1/12 первоначального объема (0,2 л) и разбавляют в 125 мл этанола.

Целевое соединение получают путем переосаждения из смеси этанола и во- 45 пературе, отсасывают вьтадающий осаопределенному аналитически содержанию твердого вещества в указанном растворе, перемешивают суспензию в . течение еще часа при комнатной темды и высушивания при 50 С в вакумме в течение 15ч.

Для получения пробы для анализа целевое соединение трижды переосаждают из смеси этанола и воды и высушивают при 50°С в вакууме в течение 15ч.

На FD-масс-спектре имеется пик, соответствующий ожидаемой молекуляр ной массе 682.

На ИК-спектре в области СО-валентной частоты имеются две перекрьшающиеся линии, причем одна из них, как это имеет место в случае cилибининaJ

0

5

да С,-2, (14 а также у атома С.

Рассчитано,%: С 58,07; Н 4,43; О 37,50.

Cj,,o.s

Найдено,%; С 58,05; Н 4,57;

О 37,311 .

П р и м е р 3. Получение динатрие- вой соли силибинин-С-2 З-дигидро- сукцината.

К полученному в соответствии с примером 2 -этанольному раствору добавляют по каплям при перемешивании и внещнем охлаждении до 5-9 С 6%-ный этанольный раствор едкого натпературе, отсасывают вьтадающий осаопределенному аналитически содержанию твердого вещества в указанном растворе, перемешивают суспензию в . течение еще часа при комнатной тем0

док бежевого цвета, суспендирзтот его дважды (каждый раз в течение 5- 10 мин) с помощью турракса в 150 мл этанола и снова отсасьшают. Для удаления остатков уксусноэтилового эфира продукт затем суспендируют в течение 14 ч при комнатной температуре в 280 мл этанола, снова отсасьшают, промьшают 70 мл этанола и высушива- g ют в течение 15 ч при 40-45 С в вакуумном сушильном шкафу. После этого предварительно высутпенный продукт измельчают, проссеивают до размера зерна менее 0,2 мм и сушат в течение

еще 48 ч при 40-45 С в вакууме. В результате получают 52 г целевого соединения (выход 69%) .

Полученное целевое соединение не имеет определенной температуры плавления. Оно начинает спекаться при температуре около 80 с, а при температуре около 100 С плавится с образованием лузырей.

УФ-спектр в метаноле: д,с,с

288 нм; . е 1,73-10

и

О

0 СН2-0-СО-СН2-

.

. ои.

- - ч -соон

со-сн -сно-с

50 г ci-шибннина при 45°С растворяют в 100 мл пиридина, добавляют 150 г ангидрида янтарной кислоты, смесь перемешивают примерно 8 ч при 5 добавляют 40 мл этанола и перемешивают до тех .пор, пока не об- разуется гомогенная смесь. Затем, при интенсивном перемешивании для омыления сложных фениловых эфиров в течение примерно 30 мин добавляют 60 мл воды. Спустя примерно 2 ч перемешивания при 30 С сложные фениловые эфиры .количественно п-вдролизуются. Полноту пздролиза определяют с помощью тех высокого давления. Гидролиз прекращают быстрым добавлением к полученной реакционной смеси 1,7 л этилацетата.

Дальнейшую обработку осуществляют как описано в примере 2.

Физико-химические свойства этого соедине ния щ;ентичны соединениям примера 2.

Соединения формулы (I) , в частности динатриевая соль силибинин-С-2 , 3- дигидросукцината, оказывают явно выраженное фармакологическое действие при лечении ожоговых ранений. Кроме того, несмотря на то, что в результате описанной обработки эти соединения являются производными сштб,ини- на, они полностью сохраняют фармакологическую активность силибинина, являющегося известнь1м средством для лечения заболеваний печени. Особенно эффективны они при лечении цирроза, печени и токсических и метаболи- тических поражений печени.

Молекулярный вес целевого соединения равен 726,56. Оно представляет собой микрокристаллический порогаок светло-бежевого цвета без специфического запаха и с солоноватым вкусом. Оно легко растворимо в воде и плохо растворяется в этаноле и ацетоне. В диэтиловом эфире и хлороформе оно практически нерастворимо.

П р и м е р 4. Получение силиби- ннн-С-2 ,3-дигидросукцината

5

0

5

0

5

0

5

Соединения формулы (I) обладают, кроме того, необьпсновенно высокой активностью при лечении отравлений грибами, в особенности очень опасного отравления бледной поганкой (Amanita phalloides). С их помощью можно также с успехом лечить отравления гало- генированными органическими растворителями, такими как четыреххлористый углерод, трихлорэтилен, хлороформ и т.п. В случае профилактического применения соединения формулы (I) предупреждают перечисленные заболевания .

Лекарственные препараты, содержащие указанные соединения, в большинстве случаев применяются систематически, например, в виде пилюль, капсул,

растворов, в композиции с ОбЬЕЧНЫМИ

носителями и, при желании, с обычными вспомогательными добавками. Днев- нал доза для взрослого человека составляет примерно 50-500 мг в зависимости от состояния пациента и тяжести заболевания.

Опыты с динатриевой солью силибинин-С-2 , 3-дигидросукцината (сили- сук-на).

Появляющиеся при ожогах симптомы вызьшаются, в частности, интоксикацией организма продуктами термического некроза тканей. То, что за это ответственны аутоинтоксикативные процессы после тяжелых ожогов кожи, было доказано многочисленными способами. Особенно убедительными являются опыты по перекрестной трансплантации обожженной и необожженной

кожи здоровым животным и соответственно животным с ожогами. При этом установлено, что здоровые животные с пересаженной им обожженной кожей гибли, тогда как на животных с ожогами пересаженная здоровая кожа не оказывала, никаког о вредного действия

При ожогах кожи вьщеляются в свобод- ном виде или вновь образуются цельй ряд различных химических соединений. Несмотря на их большое число, удалось установить структуру некоторых их этих соединений..

В частности, удалось показать, чтО образующиеся при ожогах кожи соединения аналогичны соединениям, образующимся при переокислении ли- :. пидов. Имеет место также аналогия Е о тношении токсического действия , этих соединений. Особенно поразительным является факт образования обладающих токсическими свойствами насыщенных и ненасьаценных альдегидов с различной длиной цепи вследствие пер- окисления липидов и термического поражения кожи. Поэтому можно предполо- i жит1, что ожоги приводят к окислительному повреждению клеточных структур .

Поэтому были исследованы аутоокси- дативные изменения мембранных липидов, являющиеся следствием аутоинтоксикации после тяжелых ожогов. Исследовались, в частности, изменения состава жирных кислот мембранных липидов. Кроме того, определялось, в какой степени предлагаемые производные силибина оказывают влияние на указанные изменения состава жирных кислот мембранных липидов.

Изменения состава жирных кислот мембранных липидов в результате тяжелых ожогов.

Самцы крыс Wistar со средним ве- сом 360 г,, разделенные на три группы, получали достаточное количество воды и сухого . До начала опытов комнатная температура равнялась 22 С. После начала опытов животные содержались при 30 С.

Ожоги кожи наносились с помощью

л

медного штемпеля поверхностью 20 см при постоянном давлении и температуре 250с. Для того, чтобы предотвратить термическое поражение расположенных глубже органов, кожу животных натягивали на охлаждаемый воздухом шпа

10

|5 20 2530

68758

тель. Таким образом можно очень точно наносить ожоговые травмы, время извлечения от которых оказьшается , строго постоянным.

Перед началом проведения опытов животным,давали наркоз (50 мг/ке нембутала).После нанесения ожога для предупрежд.ения шока им внутрипарен- терально вводили 20 мл раствора лак- тата Рингера.

Все животные были разделены на 5 групп:

а)нормальная группа: животные, которым не наносили ожогов;

б)контрольная группа I: животные, которых лечили только силибини- ном (в течение 6 дней вводилось 75,5 мг сили-сук-на);

в)контрольная группа .II; мнимо оперированные животные;

г)животные которым были нанесе50 250

5

ны ожоги: 25%, 250 С, 20 с, 0,5 ат;

е) группа испытуемых животных: животные, которым в течение 6 дней интрапарентерально вводили 75,5 мг сили-сук-на, начиная за день до нанесения ожогов.

Для выделения микросом животных после окончания проведения опытов обескровливали под наркозом. Затем у них извлекали печень, взвешивали- ее и сразу погружали в охлаждаемую льдом изолирующую среду (0,25 моль сахарозы, 1 ммоль ЭДТА, 10 ммоль Трис НС, рН 7,2). Печень разрезали на кусочки и гомогенизировали в указанной среде. С помощью дифференциального центрифугирования микросом- Q нук) фракцию гралулировали. Микросомы вновь суспендировали и подвергали центрифугированию, после чего готовили суспензию, 1 мл которой соответствовал 1 г ткани печени. 5 Липиды определяли по методу J.Folch (простой метод выделения и очистки суммарного содержания липидов из животных тканей, модифицированному Bligh и Dyer (Ускоренный ме- - тод экстракции и очистки суммарного количества липидов).

Экстрагированные микросомные липит дь1 омьшяли едким натром. Свободные жирные кислоты этерифицировали путем добавки к смеси метанольного раствора BFj. После отгонки метанола и удаления гидрофильных побочных продуктов количественно определяли эфи- ры жирных кислот.

У животных,которым ожоги не наносились, не было обнаружено никаких заметных изменений состава жирных кислот. Таким образом, наркоз и незначительное оперативное вмешательство не приводят к изменению микро- coMHbiX липидов. Поэтому для дальнейшего сравнения данные по нормальной и контрольной группам животных объединяли в одну контрольную группу.

Сравнение здоровых животных и животных, которым были нанесены ожоги, относительно состава микррсомных жирных кислот показало значительныйсдвиг от ненасыщенных к насьпцейным - жирным кислотам.

При распределении жирных кислот в микросомных липидах печени по изменениям, вызванным термическим поражением, видно, что содержание пальмитиновой кислоты (С1 6) возрастает после нанесения ожогов с 25,1 до 34,4% от общего содержания жирных кислот. В случае стеариновой кислоты (С18) содержание ее у животных, кото pbw были нанесены ожоп.-составляет 46,8% по сравнению с 13,2% у животных из контрольной группы. В случае олеиновой кислоты (С18:1) наблюдалось незначительное снижение содержания. Содержание линолевой кислоты (018:2) После нанесения: ожо- гов снизилось до примерно 1/3 по сравнению с исходным количеством, И в случае арахидоновой кис лоты (С20:4) после нанесения ожогов было обнаружено только 31% ее по сранению с исходным количеством.

Влияние сили-сук-на на содержание жирных кислот у з оровых животных и жив отньгх, которым наносились ожоги, показано в таблице.

Как видно из таблицы 1, лечение производным силибинина формы (1) в случае здоровых (контрольных) животных: не приводит к существенньм изменения по сравнению с животными, не получавшими препарата. В случае же животных которым были нанесены ожоги, лечение приводит к полному прекращению снижения ненасыщенных жирных кислот.

Следовательно, ожоговые травмы : приводят к изменению состава 5кирных кислот в микросомных липидах. Можно предположить, что это связано с окислительным поражением мембран.

0

5

0

5

Это следует, в частности, из резкого снижения содержания ненасыщенных жирных кислот с несколькими двойными связями.

Используемые производные силибини- нз формулы (I) могут ингибировать ок- сидативное разрушение клеток, и они таким образом,с успехом могут использоваться для нарушения механизма о. - сидативного разрушения после тяжелых ожогов.

Аутотоксические реакции после тяжелых ожогов могут привести в частности, к оксидативному поражению клеток. Поэтому были поставлены опыты, в которых изучалось, какое действие оказьюают стандартизированные термические травмы на индуцировац- ный РИА бластогенез Т-лимфоцитов селезенки и периферийной крови крыс. Изучалось также то действие, которое оказывает предлагаемые производные силибинина такого рода лимфоцитные функциональные поражения после тяжелых ожогов.

Действие стандартизированной термической травмы на индуцированный РИА бластогенез Т-лимфоцитов селе- 0 зенки и периферийной крови крыс.

На кожу слины крыс Wistar с помощью медного штемпеля наносили ожоги описанным способом. В качестве . контрольной группы служили животные с мнимыми ожогами, с которыми проводили те же манипуляции, но без нанесения ожогов. Через 2,4,7 и 9 дней у животных с нанесенными ожогами, а также у контрольных животных под эфирным наркозом извлек.ли селезенку и обескровливали их.

Гепаринизированную кровь для вьще- ления из нее лимфоцитов наносили слоями на раствор Ficoll-Hypaque (плот- 5 ность 1,077). Затем осуществляли центрифугирование и полученные лимфоциты испытьшали на жизненность с помощью трипана голубого. Для выделения лимфоцитов из селезенки последнюю измельчали, протирали Через сито и с помощью лизисного раствора отделяли от сопутствующих эритроцитов по G-ay.

После этого в целях уменьшения содержания в суспензии одноядерных кле- ток в результате адгезии на стенках сосуда (5%) клеточную смесь инкубировали в течение 30 мин в сосуде ; в присутствии 5%-ной инактивирован- /

5

0

0

5

11

ной термическим способом сыворотки эмбрионального теленка. Для культивй рования клетки помещали в плоскодонные пластины для микротитрования и добавляли к ним 20%-ную сьшоротку эмбрионального теленка. Таким образом, путем измерения внедрения н-тимидина (2 Ci .(микромоль) в DNA клеток определялся спонтанный блас- тогенез.

В ходе предварительных опытов было установлено, что оптимальная ми- тогенная стимуляция наблюдается при РИА-концентрации (митоген-фитемаглю- тинин) 5 мкг/мл. В ходе этих опытов по оптимизации клеточной тестовой системы бьшо также установлено, что максимальная стимуляция повторного синтеза DNA происходит через 72 ч. Кроме того, бьшо установлено, что оптимальная концентрация сыворотки эмбрионального теленка, при которой наблюдается наивысшая стимуляция, равна 20%.

Спонтанный бластогенез определяли путем измерения внедрения Н-ти- мидина в DNA клеток. Клетки отбирались через 18 ч после добавления Н-тимидина, причем -нулевая точка для 18 ч совпадает с моментом максимальной стимуляции.

Для определения влияния предлагаемых производных силибинина группу крыс подвергали лечению производным силибинина. С этой целью животным раз в день впрыскивали 75,5 мг сили- сук-на. Лечение продолжалось, начиная с дня нанесения ожога и до дня извлечения органа (максимум до девятого дня) .

Для оценки результатов, полученных в опытах с контрольными животными, тем из них, которым не были нанесены ожоги, и подвергавшихся лечению сили-сук-на, был рассчитан индекс с стимуляции. Е-го численное значение, представляет собой частное от деления средних значений стимулированных и контрольных проб. Из полученного таким образом индекса стимуляции для каждого подопытного животного рассчитывался средний индекс стимуляции для группы животных.

Полученные результаты выражены через этот индекс S1 .

При изучении влияния использовавшегося сили-сук-на на бластогенез лимфоцитов видно, что в случае жи3687512

вотных с нанесенными ожогами пониженная стимулируемость клеток явно увеличивалась в результате воздействия с силибинина.

Уже на второй день у животных, которым вводился сили-сук-на, наблюдалось в 10 раз более высокая чзшстви- тельность лимфоцитов крови по отно10 шению к РИА. На четвертый день после нанесения травмы у животных,подвергав- шихся лечению, величина индекса стимуляции для лимфоцитов крови равнялась 8, тогда как соответствующая величина

15 для животных, не подвергавшихся лечению ,- равнялась 1,5.

В случае клеток из селезенки все индексы стимуляции у животных с нанесенными ожогами и не подвергав20 шихся лечению значительно меньше 1. Введение животным силибинина приводит к существенному улучшению во все дни, причем максимум наблюдается на седьмой день после нанесения

25 травмы.

Были проведены также сравнительные опыты, которые показали, что у здоровых животных сили-сук-на не приводит к каким-либо существенным из30 менениям стимулируемости при индуцированном РИА бластогенезе Т-лимфоци- тов из селезенки и периферийной крови.

Таким образом, использовавшийся в соответствии с изобретением силибинин существенно стимулирует бластогенез лимфоцитов животных с нанесенными ожогами.

Кроме того, было установлено, что

0 у животных, получавших лечение произ водными силибинина, общий катаболизм был меньше,так как животные после нанесенной термической травмы снова быстро прибавляли в весе.

5 Отравление грибами.

Отравления, вызьшаемые бледной поганкой, относятся к тяжелейшим отравлениям, известным в медицине. Хотя отравления, вызьшаемые бледной поган-

л кой, составляют всего 10-30% от всех отравлений грибами, отравление именно этим грибом вследствие его опасности уже издавна вызывает наибольший интерес медиков. В ранних публикациях

приведены даннь1е по смертельному исходу от этого отравления, который составляет 30-50%. Благодаря современной интенсивной медицине, по дан

- ным статистических исследований

5

он о

он

0-СО-А1К-СООМ

где Alk - йГлкиленовый остаток с 14 атомами углерода; М - водород или щелочный металл, отличающийся тем, что

1 мае.4. силибинина формулы

Q

-ОСНз

(II)

ип -ин

он О

растворяют в 1-2 мае.ч. пиридина и подвергают взаимодействию с I- 3 мае.ч. ангидрида дикарбоновой кислоты формулы

0 С-А1К-СЮ 0

где Alk имеет указанные значения,

40 при перемешивании при -40-50 С с .последующим добавлением этанола до образования гомогенной смеси, в которую при интенсивном перемешивании постепенно добавляют воду, при этом

45 имеющиеся сложные эфиры гидролизу- ются до ароматически связанных ОН- групп, и после окончания гидролиза реакционную массу разбавляют этил- ацетатом, промьшают подкисленной до

50 РН 1,5-2,5 водой, насыщенной этил- ацетатом, полученную этилацетатную фазу концентрируют, обрабатьшают этанолом, выделяют соединения .формулы (I), где М - водород, и/или дейет55 вием спиртового раствора гидроокиси (III) щелочного металла переводят в соль. ,

сн -о-со-лш-соои

ОСНз

(I)

ЖивотныеС16I CISC18:lC18:2C20:4.

Здоровые (KOHT-29,8% 37,2%8,9%9,6%16,2%

рольная группа I)6,2 ±12,3±1,1±3,3±4,9

С нанесенными25,4% 37,5%7,8%11,4% 18,0%

ожогами±6,0 ±8,6±1,0±5,3±9,1