Штамм гриба ASpeRGILLUS FUмIGатUS-продуцент целлюлазы Советский патент 1988 года по МПК C12N9/42 C12N1/14 

4ib 4ib

Изобретение относится к биотехнологии и может найти применение в процессах переработки целлкшазо- содержащих материалов для получения глюкозы и микробного белка. Цель изобретения - выявление быстрорастущего штамма, обладающего более высокой активностью целлкхпазы и значительным уровнем целлобиазЫо Активность- штамма A.fumigatus на среде с опилками составляет 2,5 ед/мл цел- люлазы по отношению к фильтровальной- бумаге, что равно 5,3 ед/мл по хлопковому волокну (С,), и 0,725 ед/мп целлобиазы против 5,0 ед/мл (С,) и 0,7 ед/мл у A.terrcus АТ-490. Активность достигается на сутки культивирования раньше. SS (Л

СО

to

Изобретение относится к г-мкро- биологической промышленности, а-именно к производству ферментативных пре паратов - целлюлаз - с помощью высо- коактивных штаммов микроорганизмов, Целлюлазы находят широкое применение в процессах переработки целлюлазо- содержащих отходов с целью получения глюкозы и микробного белка, созда- кия легкоусвояемых кормовj расщепления целлюлозного компонента клеточных стенок для увеличения выходов соков и лекарственных веществ при их экстракции5 осахаривания целлю- лозы в ряде других отраслей народного .хозяйства о

Цель изобретения - вьшвление быстрорастущего штамма, обладающего более высокой активностью целлюлазы и значительным уровнем целлобиазы.

Отбор микром1-тцетов по признаку продукции секретируемой целлюлазы в процессе широкого скрининга . цел- люлозоразрушающих микроорганизмов ряда образцов почв позволил вьвде- лить наиболее активньй штамм Asper-

gillus fumigatus ВКПМ F-316 (К 84)„ Штамм обладает следующими jcyAb- турально-морфологическими признака- ми. Колонии на сусло-агаре до 1 см в диаметре появляются уже на 2-е сут роста при 28 С, Сначала поверхность их чисто белого цвета, с началом спороношения голубовато-серо-зеленая обратная сторона светло-оливковая На 6-й день диаметр колонии достигает 3 см, окраска темнеет до зеленовато-черной. Запах отсутствует. Конидиальные головки крупные - колон- чато-компактные 120-200 мкм на 50- 100 мкм. Конидиеносцы гладкие толщиной 6-9 мкм с шаровидным вздутием на конце размером 18-25 мкм. Стериг- мы одноярусные, конидии в массе темно-зеленые круглые 3-3,5 мкм в диаметре Афлатоксины (коевую кислоту) на диагностической среде для токси- нообразующих грибов не вьщеляет.

Колонии на агаре Чапека несколько меньших размеров, конйдиальные головки не превьш1ают 180 мк в длину Колонии на агаризованной среде Сабуро для дрожжей и грибов до 4 см в диаметре широко растущие барха- тистые, затем типично хлопьевидные темно-зеленые до черно-зеленых. Конидиальные головки 300 мкм на 50 мкм плотно прижатые компактные в виде

колонки. Конидиенос1 ;ы размером 200- 300 мкм на.5-8 мкм с шаровидным вздутием 20-30 мкм в диаметре. Конидии до 3,5 мкм в диаметре шаровидные ,

Физиолого-биохимические признаки Штамм гетеротроф, сапрофит, аэраб. Оптимальный рН слабокисльй 5-6. Однако заметный рост наблюдается в широком диапазоне рН от 3,8 до 7,6 Оптимальная температура выращивания 28 С, при крайних значениях от 10 до 45 С рост очень слабый, колонии точечные о Штамм не патогенен, не вызывает микотоксикозов человека к животных, что подтверждено результатами опытов с 2 ш1ами и отсутствием вьщеления токсинов на диагностической среде Харченкоо

Определение видовой принадлежности штамма проведено по Пидоплич- ко. Общую целлюяолштическую активность по отношению к фильтровальной- бумаге определяли стандартнь ш методами с последующим измерением редуцирующих Сахаров по Сомод си-Нель- сону, целлобиазную активность - по расщеплению паранитрофенил- A-D-гли- козида.

Применение нового быстрорастущего штамма A.fumigatus- К-84 позволяет добиться высокого уровня цел- люполитической активности в куль- туральной жидкости при относительно коротком времени культивирования на различных средах для производства целлюлаз.

Пример 1. 1Чтамм A.fumigatus- К-84 выращивают на среде, содержащей мас.%; свекловичньй жом 4,0, солодовые ростки 1,4, зернокартофельная барда 5,0, аммоний серно-кисльй 0,6, калий фосфорно-кислый однозамещен- ный 0,2, магний сернокисльй 0,06; нитроцеллюлоза (содержание азота 13,56%) 0,5. Исходньй рН среды 6,0. Инокулятом служит трехсуточная.куль тура, выращенная на жидком сусле, внесенная в среду из расчета 2% на 250 МП среды в конической колбе объемом 2 л. На 4-е сут роста и При принудительной аэрации прокачиванием 120-150 об/мин общая активность целлютазы достигает 2,6 мг глюкозы/мл.ч, активность jb -глюко- зидазы 0,329 мкмоль/мл„мин.

П р и м е р 2. Культивирование штамма Д, futnigatus- К-84 ведут на

среде, описанной в примере 1, в лабораторном ферментере емкостью. 10 л при. барботировании атмосферным воздухом, Инокулят добавляют в количестве 5% от объема среды Максимальные значения ферментативных активностей, указанных в примере 1, достигаются на 3-й сут культивирования о

П р и м е р 3. Культивирование штамма A,fumigatus-K-84 ведут на среде следующего состава, мас.%: свекловичный жом 4,0, кукурузный экстракт 0,01, пептон 0,05, аммоний серно- кисльй 0,50, калий фосфор- но-кисльй однозамещенный 0,2, магний серно-кислый 0,06, нитроцеллюлоза (содержание азота 13,56%) 0,5. Исходный рН среды 6,0. Инокулят выращивают на глюкозо-пептонной среде, г/л: глюкоза 5, пептон 5, ристьм натрий 3, вода водопроводная в течение 3 сут и вносят в среду в количестве 5% на 250 мл среды в конической колбе емкостью 2 л. Культивирование проводят при на качалке 120-150 об/мин в течение 4 сут Общая активность целлюлазы составляет величину 4,4 мг/мл.ч, глюкози- дазы 0,823 мкмоль/мломин.

Пример 4о Культивирование штамма A.fumigatus - К-84 проводят, .как в примере 3 но в лабораторном

ферментере емкостью 10 л„ На 3-и сут - целлюлазную и й- глюкозидазную акроста достигались величины активностей, указанные в примере 3.

II р и м е р 5. Культивируют штамм на среде, содержащей, г/л: опилки 2,0, нитрат натрия 2,5, хлорид кальция 0,3, сульфат магния 0,3, дрожжевой экстракт 0,5, в условиях, описанных в примере 1„ Величина активтивность по сравнению штаммами.

с известными

40

Формула изобре-те. ния

Штамм гриба Aspergillus fumiga- tus ВКПМ F-316 - продуцент целлюла- зы.

440920-

ности по отношению к фильтровальной бумаге на 3-й сут культивирования составляла 1,7 мг гл./мл.ч. J5-глюg козидазы 0,130 мкмоль/мл.мин.

Культивирование на среде, указанной в примере 1, дает в это время величину активности к фильтру 2,4 мг глюкозы/мл.ч., , -глюкозидазы

10 0,290 мкмоль/мл.мин, а на среде, описанной в примере 3-4,0 мг глюкозы/мл.ч и 0,725 мкмоль/ ш.миНо

Примерб, Активность штамма A.fumigatus - К-84 на среде с опил15 ками, как описано в примере 5, на 4-е с ут культивирования составляет 2,4 ед/мп-целлюлазы по отношению к - фильтровальной бумаге, что равно 5,3 ед/мл по хлопковому волокну (С,)

20 и 0,725 ед/мл целлобиаза против 5,0 ед/мп.(С() и 0,7 ед/мл (целлобиаза) у A.terreus АТ-490, однако такая активность достигается у А. fumiganus К-84 на 1 сут культиви25 рования меньше, чем у Aoterreus АТ-490.

Штамм А.fumiganus - К-84 в качестве продуцента целлюлаз (/1-глю- козидазы) может быть эффективно ис30 пользован в. производстве препаративных форм целлюлолитических ферментов без изменения существующ11х технологических схем. Применение нового штамма позволяет повысить

тивность по сравнению штаммами.

с известными

Формула изобре-те. ния

Штамм гриба Aspergillus fumiga- tus ВКПМ F-316 - продуцент целлюла- зы.