Штамм бактерий РSеUDомоNаS SpecIeS-продуцент триптофан-синтазы Советский патент 1988 года по МПК C12N9/88 C12N1/20 

Изобретение относится к биотехнологии и касается получения нового . штамма-продуцента триптофан-синтазы (КФ 4o2,1o20)j которая может быть использована для ферментативного ситеза L-триптофана из индола и серин

Цель изобретения - получение штама-продуцента триптофан-синтазы на основе бактерий рода PseudomonaSf обладающего более высокой активНОСТЬЮо

Штамм бактерий Pseudomonas sp. BKTIM В-3835 (Ml5) является trpA мутантом бактерий Pseudotnonas sp. М, вьщеленных из сточных вод Минского завода медпрепаратоз. Бактерии Pseudomonas sp. MIS, выращенные в среде с ограниченным количеством L-трипто фана,, обладают ТС-Б активностью три тофан-синтазы, на много превосходящую у известных продуцентов Brevi- bacterium . Среда, применяемая для культивирования Pseudoinona s s М15,состоит издешевыхи легкодос- тупных веществ. Время, затрачиваемое на культивирование штамма, составляет всего 12 ч, вместо 24 ч у известногооПри вьфащивании Pseudomonas sp. Ml5 не надо создавать вы- сокую степень аэрации культуры.

Штамм Pseudomonas sp. Ml5 имеет следующие характеристики.

Морфологические признаки. Клетки дрямые палочковидной формы с округ- лыми концами 0,6х2-3 ц, , подвижные с 2-4 монополярньгми жгутиками, грам- отрицательные, спор не образуюто

Культуральные признаки. Колонии на агаризованных питательных средах (мясо-пептонном агаре, Кинг В агаре) гладкие плоские круглые край ровньй серовато-белые Через 24 ч пр 28°С образуют колонии размером 2- 3 ммо Рост по уколу в МПА умеренньй в основном на поверхности среды, В жидкой питательной средеобразует итенсивную муть.

Физиол ого-биохимические признаки По отношению к кислороду - ойлигат- ньй аэроб. Оптимальная температура роста 28-30 С, рН среды в пределах 6,8-7,3. Азот утилизируют в виде солей аммония, мочевины, нитратов.

Пигменты Образует желто-зеленьй водорастворимый флуоресцирующий пиг мент на среде Кинг В. Внутриклеточного пигмента не образует.

Реакция на оксидазу и каталазу положительная. Реакция Фогес-Прос- кауэра отрицательная. Индол не образует. Тест на анаэробную аргинил- дегидролазу положительный. Реакция на анаэробную денитрификацию отрицательная., Лецитиназная активность отсутствует

Не гидрализует крахмал, желатину, Твин-80.

В качестве источника углерода использует глюкозу, глицерин, сахарозу, галактозу, мальтозу, фруктозу, этанол, метанол, тирозин, фенилала- ЛИН, орнитин, глицин, лейцин, глута- миновую кислоту, аспарагиновую кислоту. Не утилизирует арабинозу, ман- нозу,.ксилозу, лактозу, маннит, раффинозу, дульцит, сорбит, целлобиозу, инозит, серин, лизин, триптофан, антраниловую кислоту, ацетамид.

Пример 1. Бактерии Pseudomonas sp. М15 инокулируют в 1минималь- ную среду, г/л: Na.,HP04 - 6; 3; NaCl 0,5; 1; CaCl 0,015; 2; глюкоза 2 л, содержащую L-триятофак в концентрации 0,005 г/л и культивируют при 28 С с аэрацией 12 ч. Выращенные таким образом бактерии Pseudomonas sp. Ml5 об ладают ТС-Б активностью триптофан-синтазы, равной 200 нмоль/мин/мг белка

II р и ме р 2. Бактерии Pseudomonas sp. Ml5 инокулируют в известную среду г/л: 1; (NH4)aS04 25; MgS04. 1; MnS04- 0,008| глюкоза 130; фумаровая кислота 12, уксусная кислота 3; биотин.0,00005; тиамин гидрохлорид 0,002 г/л; L-тирозин 0,,65; DL метионин 0,4; CaCOj 50; гидролизат соевых бобов 50, рЫ 6,5 и культивируют при 28°С с аэрацией 12 ч. Вьфащенные таким образом бактерии Pseudomonas sp. М15 обладают активностью триптофан-синтазы, равной 170 нмоль/мин/мг белка

И р. и м е р 3. Бактерии Pseudomonas sp. М15 инокулируют в среду, используемую для культивирования представителей рода Pseudomonas, г/л 10; NaNH4HP04-4H O 3,5| 0,2; лимонная кислота 2 г/л; глюкоза 2; рН 7,0, содержа- щую L-триптофан в концентрации 0,005 г/л, и культивируют при 28 С с аэрацией 12 ч. Выращенные таким

- 1440923

образом бактерии Pseudoraonas sp. М15 ностью триптофан-синтазы по сравне- обладают ТС-Б активностью триптофан- нию с известным. Время, затрачивае- синтазы, равной 190 нмоль/мин/мг мое на выращивание Pseudomonas sp. белка.с М15, в 2 раза меньше, чем для Вгеvibacterium flavnm.

Определение ТС-Б активности триптофан-синтазы осуществляли по обще- Формула изобретения принятой методике. Этот же метод использовался для штамма прототипа. 10 Штамм бактерий Pseudomonas speТаким образом, предлагаемьй штамм cies BKIIM В-3835 - продуцент трипто- обладает более высокой ТС-Б актив- фан-синтазы.

Изобретение относится к биотехнологии и касается получения нового штамма-продуцента триптофан-синтазы, которая может быть использована для ферментативного синтеза L-триптофана, из индола и серина. Цель изобретем НИН - получение штамма-продуцента триптофан-синтазы на-основе бактерий рода Pseudomonas, обладающего более высокой активностью Штамм Pseudomonas ВКПМ В-3835 (Ml5) является trpA. мутантом бактерий Pseudomonas sp. М, вьщеленных из сточных вод Минского завода медпрепаратов. Бактерии Pseu- g domonas sp. Ш5, вьфащенные в минеральной среде с ограниченным количеством L-триптофана, обладают ТС-Б активностью триптофан-синтазы, катализирующей превращение индола и серина в L-триптрфан, равной 200 нмоль/мин/мг белка. (Л 4 4i О ;о N5 00