Питательная среда для культивирования грибов рода ASpeRGILLUS - продуцентов тирозиназы Советский патент 1989 года по МПК C12N1/14 C12N9/88 C12N9/88 C12R1/66 

4

со сд ч

Изобретение относится к микробио- ло1|ической, промышленности, а именно к йитательной среде для культивиро- вайия грибов рода Aspergillus - про- ду1 ентов тироэиназы, фермента, осу- щефтвдяющего трансформацию L -тиро- зийа в L -диоксифенилаланин (L -ДОФА)

;Цель изобретения - повышение ак- ти;}ности тирозиназы.

Питательная среда имеет следующий

состав, маСо%

0,25-0,50

.OJO-0,11

0,0931-0,1000

0,050-0,055

0,050-0,055

0,0010-0,0015

0,0010-0,0015

to

0,0010-0,0015 0,50-0,55 Остальное

Сахароза

.

NH4NO,

MgS04 .7H2.0

КС1

FeS04- 7H.

CuSO 5H20

L -тирозин

Гидролизньй

лигнин

Дистиллированна вода

Эта питательная среда отличается от известной введением гидролизного лигнина, которЬй является отходом це|ллюлозно-бумажной промышленности, Концентрации минеральных солей

(1 Н2Р04, ,, Mgso4 7H20, KCip

г4з04 7Н; о) взяты соответственно. С1|еде Чапека. Эти количества являют- оптимальными для роста грибов. Пределы концентраций сахарозы, лигнина, тирозина и являгот- сг оптимальными и основаны на экспе- риментальньгх данных. Концентрации L|-тирозина и ,0 выше ОLoo15% не влияют на активность ти- рЬзиназы, а ниже 0,001% активность и рост гриба.снижаются. Существен- нЬе влияние на активность имеет кон- цЁнтрация лигнина и сахарозы, Вве- д|8ние гидролизного, лигнина в состав среды приводит к эффективному повышению тирозиназной активности продуцентов. Концентрация лигнина выше 01,55% не влияет на активность, а 0,5% активность резко снижается.- .

15

20

Aspergillus на известных и предлагаемой средах представлены в.табл.U

П р и м е р 1. Берут сахарозу 5 г, KHjPOti 1 г, , 0,931 г, MgS04 0,5 г, КС1 0,5г, FeS04 0,01 г, CuS04- 5H20 0,01 г, L -тирозин 0,01 г растворяют в дистиллйрот ванной воде с расчетом, чтобы конечный, объем был t л. После растворения добавляют 5 г (0,5 мас.%) измельченного гидролизного лигнина Волжского целлюпозно-дрожжевого комбината и стерилизуют при 0,8 атм 20 мин. Параллельно готовят среду Чапека и известную среду (без лигнина). Одновременно производят посев восьми штаммов из вцдов flaviis и flavipes на трех средах. Культивирование осуществляют при 29°С на качалках. Ти- розиназную активност ь определяют по способности биомассы превращать L -тирозин. После определенного- времени роста биомассу собирают фильт- 25 рапдей, промывают дистиллированной водой (поглощение .промывных вод при 280 нм ниже 0,01). Биомассу инкуби- руют с раствором тирозина в 0,01 м . Ш фо.сфатном буфере при аэрации при 25°С В качестве контроля берут ми- .де.плий в буфере. За единицу активности принимают количество фермента, который приводит к увеличению оптической плотности реакционной смеси при 280 нм на 0,001 за минуту. PQ- зультаты показали что при роста бов на среде с лигнином их активность эффективно увеличивается (табл,1).

Пример 2. Готовят питательную среду (среду А) следующего состава, мас.%: сахароза 0,25; KHiP04 0,1; NH4NO} 0,0931; 0,05; KCl 0,05; FeS04 7НгО 0,001; CuS04 ) 5HiO 0,001 г L -тирозин 0,001; гид ро- лизный лигнин 0,55 дистиллированная вода остальное. Культивирование грибов и определение тирозиназной активности проводят аналогично примеру 1.

30

35

40

45

Результаты представлены в табл.2, 50 Пример 3. Готовят питательПри концентрации сахарозы 0,5%ную среду (среду Б) следующего сосг рибы хорошо растут и,обладают высо-тава, мас,%: сахароза

к(ой активностью, а ниже.0,25% рост0,11; NK4NO, 0,1; MgSO ,055;

зг-рибов относительно слабый, хотяКС1 0,055; FeS04 7H2.0 0,0015;

удельная активность биомассы не сни- 55Си304-5НгО 0,0015; L -тирозин 0,0015;

гидролизный лигнин 0,5.5; дистиллированная вода остальное. Культивирование грибов и определение тирозиназзнается,

Сравнительные-данные по выращиванию различных,штаммов грибов рода

Си304-5НгО 0,0015; L -тирозин 0,0015;

гидролизный лигнин 0,5.5; дистиллированная вода остальное. Культивирование грибов и определение тирозиназной активности проводят аналогично примеру 1.

Результаты представлены в табл.2.

Таким образом, предлагаемая питательная среда позволяет направленно повысить тирозиназную активность продуцентов рода Aspergillus (VB 60-100 раз), упростить состав среды за счет исключения органических добавок, пептона и дрожжевого экстракта, снизить себестоимость среды за счет исключения органических добавок и уменьшения количества L -тирозина и сахарозы.

Формула изоб

Р е т е н и я

Питательная среда для культивиро- вания грибов рода Aspergillus - продуцентов тирозиназы, содержащая источники углерода, азота, ., MgS0., CUS04-5H20, L -тирозин

1449577

и дистиллированную воду, о т л и - чающаяся тем, что, с.целью повышения активности.тирозиназы, g она дополнительно содержит отход . целлюлозно-бумажного производства - гидролизный лигнин, КС1,. FeSO.H-O, при этом питательная среда содержит в качестве источников углерода и 10 азота сахарозу и соответственно при следующем соотношении компонентов, мас.%:

0 25-0-,50 0,10-0,11 0,0931-0,1000 0,050-0,055 0,050-0,055 0,0010-0,0015 0,0010-0,0015

5

Сахароза

KHjP04

,

0

5

MgS04-7H,tO KCl

CuS04 ЗНгО L -тирозин

ГидрОЛИЗНЬЙ

лигнин Дистиллированная вода

0,0010-0,0015 0,50-0,55 Остальное

Изобретение относится к микробиологической промьшшенности и представляет собой питательную.среду для культивирования грибов рода Aspergil- lus - продуцентов тирозинаэы. Цель изобретения - повьшшйие активности тирозиназы. Питательная среда имеет следующий состав, мас.%: сахароза 0,25-0,5; KHiP04 0,10-0,11; NH.NO, 0,0931-0,,1; MgS04-7HiO 0,05-0,055; KCl 0,05-0,055; FeS04 . 0,001- 0,0015; CuS04-5H20 0,001-0,0015; L -тирозин 0,001-0,0015; гидролизный лигнин 0,5-0,55; дистиллированная вода остальное. 2 табл. с SS (Л

Asper- Flavi