Питательная среда для культивирования бактерий РSеUDомоNаS FLUoReSceNS ВКПМ-В-4097-продуцента внеклеточного эмульгатора Советский патент 1990 года по МПК C12N1/20 C12P1/04 C12N1/20 C12R1/39 

1

(21)4488906/31-13

(22)28.07.88

(46) 23.05.90. Бкш. № 19

(71)Институт биохимии им. А.Н.Баха

(72)В;И.Маслова, М.М.Якимов и А.Н.Безбородов

(53) 576.8:661.185 (088.8) (56) Авторское свидетельство СССР В 1472496, кл. С 12 N 1/20 1087. (54) ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ. КУЛЬТИВИРОВАНИЯ БАКТЕРИЙ PSEUDOMONAS FLUORESCENS ВКПМ В-4097 - ПРОДУЦЕНТА ВНЕКЛЕТОЧНОГО ЭМУЛЬГАТОРА (-57) Изобретение относится к микробиологии и биотехнологии и представляет собой новую питательную среду для синтеза с помощью Pseudotnonas fluorescens ВКПМ В-4097 поверхностно- активного вещества-эмульгатора. Цель изобретения - увеличение выхода и активности эмульгатора. Эмульгатор получают на оптимизированной питательной среде, содержащей в качестве источника углерода углеводород или нефть. Выход влажного эмульгатора 46,0 г/л. Эмульгирующая активность продукта определяется по высоте образовавшейся эмульсии и составляет в течение пяти минут 9 см, а в течение суток - 7,5 см.

Изобретение относится к микробиологии и биотехнологии и представляет собой новую питательную среду для синтеза с помощью PSEUDOMONAS FLUORESCENS ВКПМ-В-4097 поверхностно-активного вещества-эмульгатора. Цель изобретения - увеличение выхода и активности эмульгатора. Эмульгатор получают на оптимизированной питательной среде, содержащей в качестве источника углерода углеводород или нефть. Выход влажного эмульгатора 46,0 г/л. Эмульгирующая активность продукта определяется по высоте образовавшейся эмульсии и составляет в течение пяти минут 9 см, а в течение суток - 7,5 см.

Изобретение относится к микробиологии и биотехнологии, а именно к питательной среде для культивирования бактерий Ps.fluorescens - продуцента внеклеточного эмульгатора.

Цель изобретения - увеличение выхода и активности эмульгатора.

Сущность изобретения заключается в оптимизации питательной среды для получения нерастворимого эмульгатора с максимальным выходом в результате культивирования бактерий Pseudomonas fluorescens ВКПМ В-4097.

Предлагаемые интервалы концентраций компонентов питательной среды являются оптимальными, так как при меньших концентрациях уменьшаются

выход и активность эмульгатора, а увеличение концентраций не приводит к дальнейшему увеличению выхода и активности эмульгатора, но увеличивает CTOHMOCTij среды и может привести к выпадению некоторых солей.

Пример 1 (питательная среда .содержит минимальное количество компонентов минеральной среды).

Бактерии Ps.fluorescens ВКПМ В-4097 вырарц вают на минеральной среде, содержащей в качестве источника углерода ге.ксадекан. Состав среды, г/л: КаНРО 4,2; КН2Р04 3,2; (NH)7S04 0,5; Mp.SO.} 0,05; СаС1г 0,006| MnClг 0,0005; FeSO,-7НгО 0,0002; Nation, 2HiO 0,0004;

СП

о ел

00

оь ел

o,oooi« нэво, 0,0002;

JnS04 0,0005 в дистиллированной воде Содержание гексадекана 10 г/л, Н 7,2.

Стерилизацию минеральной среды осуществляют при 0,5 атм 30 мин. Вносят в среду инокулят (10%), взятый в экспоненциальной фазе роста культуры.

Культивирование проводят в аэробных условиях при 28 С в колбах по 250 мл на качалке, дающей 220 об/мин. Через 24 ч эмульгатор отделяют от эмульсионного слоя культуральной кидкости центрифугированием (4500 об/мин) при 0°С в течение 25 мин. Выход влажного эмульгатора {считают по весу который составляет 18,2 г/л.

Активность эмульгатора определяют ,по его способности эмульгировать н-алканы и Локбатанскую нефть (содержит, главным образом, нафтены).

Активность эмульгатора образовы- вать эмульсию определяют следующим образом. В пробирку с делениями на 25 мл вносят 5 мл 0,2 М трис-НС1, jpH 8,0, содержащего 0,1 MgS04-7H20, добавляют 5 мл-смеси алканов (С1( 2,0 CW2,0; С154,0 СГ62,0) или неф-rt, и 100 мг эмульгатора. Смесь интенсивно перемешивают с помощью миксера в течение 30 с.

Эмульгирующую активность определяют периодическим измерением высоты столба образовавшейся эмульсии и выражают в сантиметрах. Она составляла через 5 мин 7 см, через 30 мин 6,5 см, через сутки 5 см.

Пример 2. Питательная среда содержит оптимальное количество компонентов .

Используют среду следующего состава, г/л: к4нро4 4,з; 3,4;

(NH4)4S04 2,5; MgS04 0,15; СаС1г 0,013; 0,001; ,0 4 0,0024; NatMo04-2H40 0,002; CuS04 «51ЦО 0,00015; H3B03 0,00033, ZnSO 4 0,0015 в дистиллированной воде. Содержание гексадекана 10 г/л рН 7,2.

Культивирование и выделение эмульгатора, как в примере 1. Выход

46,0 г/л, активность эмульгатора через 5 мин 9 см, через сутки 7,5 см.

Пример 3. Питательная среда содержит максимальное количество компонентов.

Используют среду следующего состава, г/л: KtHP04 4,4, КН2Р04 3,5, (NH4)tS04 3,5; MgS04 0,5; CaCla 0,052; HnClj 0,015 FeS04-7H40 0,0028, Naztlo04-2H; 0 0,003, CuS04 x 0,00025 Н3ВОЭ 0,00045, ZnS04 0,0025 в дистиллированной воде, нефть 20, рН 7,2.

Выход 34,2 г/л, активность эмульгатора через 5 мин 8,6 см, через сутки 7,0 см.

Таким образом, предлагаемая питательная среда с использованием в качестве субстрата гексадекана позволяет увеличить выход эмульгатора и активность по сравнению с известной средой в 3 и 1,5 раза соответственно.

(О

Формула изобретения

Питательная среда для культивирования бактерий Pseudomonas fluores- cens BKIIM B-4097 - продуцента внеклеточного эмульгатора, содержащая углеводороды в качестве источника углерода, Mp,S04, К8НР04, (NH4)tS04, КНгР04, , 11пС1г, FeS(V7H709 Na4Mo04-2H70, дистиллированную воду, отличающаяся тем, что, с целью увеличения выхода и активности эмульгатора, она дополнительно содержит CuS04-5H20, H3B05, ZnS04 при следующем соотношении компонентов, г/л: Углеводороды10,0-20,0

,2-4,4

КНгР043,2-3,5

(NH,)4S040,5-3,5

Hp,S040,05-0,5

)

ач

0,006-0,052 0,0005-0,015 0,0002-0,0028 0,0004-0,003 0,0001-0,00025 0,0002-0,00045 0,0005-0,0025

Остапьное