Способ получения антибиотика олеандомицина Советский патент 1962 года по МПК C12P19/62 

il

Известно кзльтивирование продуцента антибиотика олеандоыицина на средах, содержащих муку бобовых, барду или энзиматический гидролизат белка в качестве источника азота, а глюкозу и крахмал в качестве нсточНИКОВ углевода. Также известны очистка антибиотика, основанная на экстракции его из культуральной жидкости не смен.1нвающимися с водой растворителями, и выделение свободного основания путем испарения растворителя при пониженном давлении или выделении соли основания при действии соответствующей кислотой на раствор основания в воде или органическом растворителе.

Предлагаемый сиособ получения аптибиотика олеандомицина позволяет значительно увеличить выход препарата и упрощает технологический процесс. Это достигается тем, что на первой стадии иолучения аитибиотика (на стадии фермеитации) применяется среда, в состав которой вводится И-нропиловый спирт и кашалотовый жир, а па стадии выделения, вместо известного метода выделения твердого препарата солянокислого олеандомицина путем упаривания .водиого раствора и последующей сушки концентрата, проводится добавление к бутилацетатиому экстракту раствора соляной кислоты в бутилацетате.

ленни питательной среды, а остальное количество (0,5--1,0%) в процессе ферментации. Пропиловый спирт вводят в фермеитащюиную среду непосредственно перед посевом мицелия гриба. Такая среда обесиечивает получение культуральной жидкости, содержащей примерно в два раза (180%) больше олеандомицина, чем получаемые ранее культуральные жидкости. Выделение антибиотика из культуральиой жидкости основано на извлечении антибиотика бутилацетатом при рН 9,5-10,0, реэкстракцщ его иодкислеииой водой, повторного перевода в тот же растворитель и осаждении соли добавлением раствора соответствующей кислоты Б том же растворителе к предварительно сконцентрированному в вакууме бутилацетатному экстракту олеандомнцнна.

Пример 1. Среду, содержащую 2,5% соевой мукн, 0,5% кукурузного экстракта (сухой

вес), 0,75% глюкозы, 0,75% крахмала, 0,2 карбоната кальция, разливают в колбы Эрленмайера, стерилизуют в автоклаве при 120° С и засевают спорами, полученными на пшене. После посева культуру .выран1,ивают в термостате при 27±1°С на круговой качалке в течение 24 час. Содержимое колб асептически передают в посевной аппарат, содержащнй среду того же состава, п выращивание продолжают еще 40-48 час при 27±1°С. Готовый посевной мицелий в возрасте 40- 48 час в количестве 10% по объему асептически добавляют в фермеитациоииую среду, состоящую из посевиой среды с добавлеиием при ее ириготовлепии кашалотового жира в количестве 0,5%. Неиосредствеиио перед посевом мицелия в фермеитационпую среду асептически добавляют пропиловый спирт в количестве 0,75%. В процессе фермеитации до 96 час прибавляют остальное количество кашалотового жира 0,5-1%. Через 160 час содерл аиие олеаидомицииа, определяемого биологическим методом, достигает 650 мг1мл. Для выделения аитибиотика фильтрат культуральиой жидкости помещают в экстрактор, оборудованный мешалкой, добавляют 0,5 объема бутилацетата и доводят рН 20%-ным раствором едкого иатра до значения 9,5-10,0 при иостояииом иеремешиваиии. К бутилацетатиому экстракту добавляют подкисленную воду в количестве 30% к объему взятого экстракта и реэкстрагируют аитибиотик при рН 1,8-2,0. Водный раствор повторно извлекают бутилацетатом при рН 9,5-10,0 и соотношении объемов водная фаза-бутилацетат 1:0,5. Второй бутилацетатный экстракт концентрируют в вакууме до исходиого объема. Соляиокислый олеандомицин осаждают прибавлением 4-5% раствора соляной кислоты в бутилацетате, иромывают бутилацетатом и высушивают в вакууме при 70° С и остаточном давлении 10-15 мм рт. ст. После перекристаллизации из этилацетата получают кристаллический продукт с т. пл. 129-132°С и содержаиием 725 мг/мл. Выход от активности культуральной жидкости составляет 55%. Пример 2. К 10%-ному раствору солянокислого олеаидомицина, полученному как описано в примере 1, добавляют один объем бутилацетата и доводят рП 20%-ным раствором едкого натра до значения 9,3-9,6. После разделения фаз к бутилацетатиому экстракту добавляют при перемешивании 15%-иый раствор фосфорной кислоты в бутилацетате в количестве 1 моль на 1 моль исходного солянокислого олеандомицина и выпавший осадок отфильтровывают. Получают белый кристаллический препарат фосфорнокислой соли олеандомицина с т. пл. 146-148° С и содержанием 715 мг/мл.

Предмет изобретения

Способ получения антибиотика олеаидомицина на питательной среде, содержащей соевую муку, кукурузный экстракт, глюкозу, крахмал и углекислый кальций, отличающийся тем, что, с целью увеличения выхода и упрощеиия процесса, в питательную среду добавляют Н-пропиловый спирт и кашалотовый жир, а выделение его производят добавлением к бутилацетатному экстракту раствора соляной кислоты в бутилацетате.