Штамм вируса гепатита утят для изготовления вакцины против вирусного гепатита утят Советский патент 1990 года по МПК C12N7/00 

Изобретение относится к ветеринарной вирусологии и касается создания нового штамма вируса гепатита утят, пригодного для получения вакцины против вирусного гепатита утят.Цель изобретения - новый штамм вируса гепатита утят, соответствующий по антигенной структуре- эталонному и циркулируюпшм вирусам и характеризующийся высокой иммуноген- ностью и высокой репродуктивной ак- fi-W

гивностью в развивающихся эмбрионах кур (РЗК).

Штамм выделен от павших по причине вирусного гепатита утят, затем аттенуирован и адаптирован к 8-9- дневным РЭК. Хранится в коллекции микроорганизмов Всесоюзного государ- ,ственного научно-контрольного института ветеринарных препарг1гов Госаг- ропрома СССР под номером 08 и называется К-УИИИП.

4

сл

О9

Морфологические признаки. Вирусные частицы округлой формы величиной 20-40 им.

Культуральные свойства. Штамм К-УНИИП репродуцируется в 8-9-дн ных РЭК,.

Адаптационные свойства. Штамм К-УНИИП вирусного гепатита.утят адаптирован к куриным э м брионам. П этом штамм сохраняет патогенность для РЭК и РЭУ и иммуногенность для утят. Биологическая активность штамма К-УНИИП на РЭК 6-7 Ig ЭЛД 50/0,2 мл, а биологическая активность штамма ЗМ-УНИ1Й1 5-6 Ig ЭЛД 50/0,2 мл на РЭУ, т.е. гомологичной для исхрдного вируса среде культивирования.

Антигенные свойства. Родственен штаммам вируса гепатита, выделенным в СССР. На введение штамма К- УНИИП в организме утят образуются вирус нейтрализующие аититела.100%устойчивость утят к экспериментальному заражению вырабатывается при введении 10000 ЭЛД 50/0,2 ип К-УНИИП и 100000 ЭЛД 50/0,2 мл штамма ЭМ-УНИИП.

Вирулентные свойства. Штамм вирулентен для однодневных утят при внутримышечном введении 5-10 ЭЛД 50/0,2 мл. При заражении 8-9-дневн РЭК вызьшает их гибель через 48-72 Гибель РЭУ при заражении их гепатита из штамма ЗМ-УНИИП настпает через 72-96 ч. Стабильность биологических свойств прослежена д 200 пассажа на РЭК.

Штамм К-УНИИП вируса гепатита утят безвреден вызывает иммунитет у 100% привитых утят при внутримышечной аппликации в дозе 10 ЭЛД 50/0,2 мл (разведение 1:100), биoл гическая активность в пределах 10 10 ЭДД 50/0,2 мл и может быть использован в качестве вакцинного.

Пример. Изготовление жидко вкрус-аакцины против вирусного гепатита утят.

Куриные эмбрионы заражают в 8-9 дневном возрасте в аллантоисную полость суспензий вируса из штамма К-УНИИТ в дозе 10-10 ЭЛД 50/0,2 (разведенным 1:100 на физиологическом растворе), а затем инкубируют

в течение 24-72 .ч при температуре 37+1 С и относительной влажности 60- 70%. Зараженные эмбрионы просматривают с помощью овоскопа 2 раза в день

в течение 3 сут. Все эмбрионы, погибшие за первые 24 ч после заражения, выбраковывают, а 11огибшие после 24 ч и позднее используют для отбора вируссодержащего.материала, предварительно охладив из при 2-4 С в течение 2-3 ч. Эмбрионы вскрывают в ус- 1говиях строгой асептики, стерильными ножницами срезают часть скорлупы

В области расположения воздушной камеры, стерильным пинцетом снимают подскорлупную оболочку и аллантоисно- амниотическую (экстраэмбриональную) жидкость отсасывают с помощью вакуум- насоса в стерильные флаконы емкостью не более 1 л и добавляют антибиотики., преимущественно пенициллин и стрепто- мишт по 1000 ЕД/мл вакцины или ген- тамицин 2-2,5 мкг/мл, а также ниста-

тин в количестве 500-1000 ЕД/мл.

Из каждого флакона делают высевы экстраэмбриональной жидкости на питательные среды. До выяснения результатов проверки экстраэмбриональной жидкости на стерильность флаконы с вируссЬдержащим материалом хранят при +2-4 с. Для изготовления вакцины используют только свободную от контаминации бактериями и грибами аллан- тонсно-амниотическую жидкость, кото- . руто сливают в одну емкость в асептн- ческих условиях, смешивают и добавляют антибиотики, преимущественно пенициллин и стрептомицин по 1000 ЕД/мл или гентамицин 2-2,5мкг/мл, а также нистатин в количестве 500- 1000 ЕД/мл. После смешивания вакцину разливают в стерильные флаконы емкостью 100 или 200 мл. Флаконы быстро закрывают резиновыми пробкамн и обкатывают металлическими колпачками. Все изготовленные серии вакцины подвергаются контролю на стерильность, безвредность, биологическую активность и иммуногенность.

55

Формула изобрете ни я

Штамм вируса гепатита утят ВГНКИ № В ДЛЯ изготовления вакцины против вирусного гепатита утят.