Способ определения токсичности лизосомотропных химических веществ Советский патент 1989 года по МПК G01N33/48 

1. .

Изобретение относится к медицине, а именно к спо собам определения токсичности химических веществ.

Цель изобретения - упрощение способа и ускорение способа.

Цель достигается за счет подбора физико-химических факторов, совокупное действие которых вызывает необходимую степень лабилизации лизо- i сом, т.е. около 50%. Интервальные значения, указанные в формуле факторов, выбраны с учетом этого обстоятельства. Так, снижение концентрации раствора сахарозы вызывает увеличе- ние степени лабилизагрии лизосом (табл. 1), а снижение температуры - уменьшение (табл. 2).

Пример1. В работе использовали интактных самцов беспородных белых крыс массой 120-180 г после 48 ч голодания. Печень брали у де- капитированных животных, промывали на льду ледяным физиологическим раствором, промокали бумажными фильтрами, тщательно очищали от соединительной ткани и взвешивали. Обогащенную фракцию лизосом получали методом дифференциального центрифугирования. Раствор сахаро зы, содержащий 1 мМ ЭДТА, готовили на фосфатно-цитратном буфере, рН которого доводили до 7 концентрированным раствором NaOH. Производили исследования влияния кадаверина на стабильность интактных изолированных лизосом.

Пробу инкубировали в те чение ; .- 5 мин в 0,7 М растворе сахарозы рН 7 при 50 с. Скорость распада ли-., зосом V, относительно контрольного значения равна 17,0 (Д о/мин) 10 . В пробу добавляли кадаверин, до кон- . центрации 1 мМ и инкубировали аналогичным образом. Скорость лизиса лизосом V, составила 4,5 (.) . Отношение V,/V около 4, т.е. более 1. Следовательно, исследованное вещество обладает протекторньм

(Л

с

ilk ф to

со

со

314

лизосомотропным действием и не токсично в этом плане для организма.

Пример 2. Способ выполняют как в примере 1. В пробу добавляют вместо кадаверина дезоксихолат натри до концентрации, равной 0,1%, Степень лабилизации лизосом составила 76%. Отношение степени лабилизации этих частиц при инкубации в указан- ных в примере 1 условиях к степени лабилизации, вызванной дезоксихола- том натрия 55%/76% - менее 1,

Следовательно, дан|1ое вещество вызывает разрушение лизосом и оказыва- ет при попадании в клетки ткани токсическое действие на организм.

Пример 3. Способ выполняют как в примере 1. Вместо кадаверина в пробу добавляли додецилсульфат нат- рия до конечной концентрации 0,1%. - Степень лабилизации была близка к 100% (95%). Отношение 55%/95% менее 1. Следовательно, данное вещество - также как и предыдущее токсично для организма животного.

Таблица

Влияние молярности раствора сахарозы на стабильность лизосом.

Примечание: пробы инкубируют при 50° С в растворе сахарозы указанной молярности рН 7 в течение 5 мин.

Таблица 2 Влияние температуры инкубационной среды на стабильность изо- лированных лизосом.

Изобретение относится к биохи- НИИ. Цель изобретения -,упрощение и . ускорение способа. Фракцию лизосом инкубируют в 0,7 М растворе сахарозы при 45-50 С и регистрируют изменение оптической плотности до и после добавления в среду инкубации лизосом исследуемого вещества. Если значение отношения первого показателя к второму больше 1, то значит исследуемое вещество обладает протекторным лизо- сомотропным действием. 2 табл.

Формула изо б р е т е н и я

Способ определения токсичности лизосомотропных химических веществ путем исследования физико-химических свойств лизосом, отличающийся тем, что, с целью упро1це ния и ускорения способа, исследуют стабильность шизосом путем инкубации их в 0,7 М сахарозе при температуре инкубационной среды 45-50°С, при этом регистрируют изменение оптической плотности полученной суспензии в минуту до и после добавления в среду инкубации лозосом с исследуемого вещества и при значении отношения первого показателя к вто- рому менее единицы определяют токсичность.

Примечание: пробы инкубируют при указанной температуре в раст- д воре сахарозы 0,7 М рН 7 в течение 5 .мин.