Способ определения чувствительности лизосом к рН среды Советский патент 1991 года по МПК G01N33/52 

Изобретение относится к биохимии и может быть использовано для исследования лизосом.

Цель изобретения - упрощение способа.

Способ осуществляется следующим образом.

Обогащенную фракцию лизосом ресус- пендируют в 0,7 М растворе сахарозы, рН 7, до концентрации лизосомного белка 3-5 мг/мл. Эту суспензию добавляют к предварительно охлажденному до 15°С раствору сахарозы, рм SD-O, содержащему 1 нМ эти- лендиаминтетраацетата, таким образом, чтобы начальная величина оптической плотности смеси была около 0,4. О скорости разрушения лизосом судят по скорости снижения экстинкции проб при 520 нм при инкубации проб в течение 1 мин в термоста- тируемой кювете на регистрирующем спектрофотометре.

Способ поясняется следующим примером.

Пример. Методом дифференциального центрифугирования получали лизосомы из печени интактных самцов белых беспородных крыс массой 120-180 г после 48 ч голодания.

Исследовали влияние инкубации исходной суспензии изолированных лизосом при 0-4°С в течение 24 ч на чувствительность их к изменению рН среды. Показано, что устойчивость лизоссм к изменению рН возрастала при рН 3-8.

Способ позволяет упростить определение рН-чувствительности лизосом за счет непосредственного ее измерения при инкубации проб в кювете спектрофотометра.

Формула изобретения

Способ определения чувствительности лизосом к рН среды, включающий инкубацию их в растворе сахарозы с этилендиа- минтетраацетатом и определение степени разрушения лизосом по снижению оптиче яг

fe

1 о ьо

CJ

ю

317023124

ской плотности при 520 нм, отличаю- способа, инкубацию проводят в 0,7 М рас- щ и и с я тем, что, с целью упрощения творе сахарозы при 15°С.

Изобретение относится к биохимии и может быть использовано для исследования лизосом. Цель изобретения - упрощение способа. Способ состоит в инкубации лизосом в растворе, содержащем 0,7 М сахарозы и этилендиаминтетраацетат, при рН 5-8 и регистрации скорости разрушения лизосом по снижению экстинкции при 520 нм. Способ позволяет упростить определение за счет непосредственного измерения рН-чув- ствительности лизосом в кювете спектрофотометра.