Способ определения терморезистентности изолированных из печени крыс лизосом Советский патент 1988 года по МПК G01N33/483 

lib

О СО

р

Изобретение относится к биохимии и касается исследований клеточных структур.

Цель изобретения - упрощение сшэ- соба.

Экспериментальные данные, доказывающие оптимальность значений молар- ности и рН раствора сахарозы и температуры инкубационной среды, прив15- д ены в табл. 1 -.3.

Из табл. 1 видно, что при мвлярно- сти раствора сахарозы выше 0,7 М разрушения лизосом nprt инкубации в указанных условиях не происходит.

Из табл. 2 видно, что только при значении рН инкубационной среды, равном. 6, радрушение лизосом при инкубации в указанных условиях не происходит. ...

Из табл. 3 видно, что максимальной flV была в диапазоне температур от 15 до 30°С. Следовательно, этот интервал температур инкубационной среды следует считать оптимальным, поскольку из- менения термочувствительности в нем были максимальными.

Способ осуществляют следующим образом.

Обогащенную фракцию лизосом полу- чают дифференциальным центрифугирова.нием гомогената печени крыс,, резуспен дируют в О 3.7 М растворе сахарозы, рН 7 до концентра1. лизосомного белка 3-5 мг/мл и используют в качестве исходной суспензии. Последнюю добавляют к предварительно нагретому до 15-30° раствору 0,7 М сахарозы, р;Н 6 с. 1 мМ ЭДТА таким образом, что начальная величина, эк стинкции составляет около 0,4. Скорость разрушения лизосом измеряют по скорости снижения поглощения при 520 нм (л Ад ц/мин) при инкубации проб в указанных условиях в те.чение мин в 1 см термостатиро- ванной кювете на регистрирующем спектрофотометре ДУ-8Б фирмы Белман (США).

Пример. В работе иcпoльз дот интактных самцов беспородных белых крыс массой 120-180 г, после 48 ч голодания. Печень берут у декапитиро- ванных животных. Обогащенную фракцию лизосом получают дифференциальным центрифугированием. Далее определение термочувствительности лизосом проводят согласно предлагаемому способу. Исследуют влияние инкубирова шя исходной суспензии изолированных лизо- сом при в течеш е 24 ч,на терморезистентность зтих частиц. Значения температуры инкубированной среды составляют в интерва 1е от 10 до .

Формула изобретения

Способ определения терморезистент- ности изолированных из печени крыс лизосом путем инкубации их в растворе сахарозы с ЭДТА, о т л и ч а..ю щ и й- с я тем, что, с целью упрощения способа, инкубацюо производят в 0,7 М растворе сахарозы с рН 6 при 15-30°С и о температурной чувствительности судят по скорости понижения оптической плотности суспензии лизосом,

Таблица 1

-Влияние молярности раствора

сахарозы на стабильность

изолированных лизосом

олярность раствора сахарозы, М

0,8

0,7 0,6

0,3 0,25

Степень разруг- шения лизосом, %

б

О

48 57 76

Примечание: инкубацию проб проводят при 15 С в ра створе сахарозы указанной моляриости, рН 7 в течение 1 мин.

Таблица 2 Влияние кислотности инкубационной среды на стабильность изолированных лизосом

рН инкубационной среды

Степень разрушения лизосом, %

7,2 8

35 29 О 19 22

Примечание: инкубацию проб проводят при 10,5° в 0,7 М растворе сахарозы при указанш пс значениях рН в течение 1 мин.

1409926

Т а б л и ц а Зависимость терморезистентности изолированных лиэосом от температуры инкубационной среды

Изобретение относится к биохи- iии и касается исследований клеточг ных структур. Целью изобретения является упрощение способа. Способ заключается в следующем. Фракцию лизосом, полученную из печени крыс, инкубируют в 0,7 М,растворе сахарозы с рН 6 с ЭДТА при 15-30 С и о.температурной чувствительности судят по скорости понижения оптической плотности суспензии лизосом. 3 табл.

Температура, инкубационной среды, С

5

10 15 20 30 40 50

Примечание: терморезистентность изолированных лизосом определяют по скорости их разрушения при инкубации проб при указанной температуре инкубационной среды в 0,7 М растворе сахарозы, рН 6 в течение 1 мин. Скорость разрушения лизосом, как функции от температуры инкубационной среды до (V ) и после (у.,) дополнительной инкубации частиц при 0-4 в течение 24 ч используют для расчета AV У, - yj, .

Изменение терморезистентности изолированных лизосом (ДУ) ЛА /мин

0,5

5

6

6

6

2

3