Способ получения гуанидиновых производных или их солей с малеиновой кислотой Советский патент 1986 года по МПК C07C129/12 C07D231/38 

О4 Изобретение относится к гуанидиновым производным, являюи имся антагонистами гистамина Н-2 и ингибирующим секрецию кислоты желудочйого сока формулы (I) СГзСН2-«Н (СН2Ъ-С-БН2 : где или 5(1а и 16) Целью изобретения является расширение арсенала средств, являющихся антагонистами гистамина Н-2 и проявляющих более сильное подавление действию гистамина Н-2. Пример 1. Триэтиламин (0,082 г) добавляют к суспензии 5{3- 2-(2,2,2-трифторэтил)гуанидиноJ пиразол-1-ил1валериановой кислоты (0,25 г) в тетрагидрофуране (10 мл) при , добавляют аммиак (0,015 г), этилхлорформиат (0,088 г) и смесь перемешивают в течение 30 мин. Добавляют раствор в тетрагидрофуране (5 мл) и смесь перемешивают в течени 30 мин, при этом температура повышается до комнатной. Смесь выЛаривают в вакууме, добавляют к ней водный раствор бикарбоната натрия (5 мл) и экстрагируют этилацетатом ( мл) После сушки над MgSO раствор фильтру ют и фильтрат выпаривают, в результа те чего получают бледно-желтый твердый продукт, который очищают посред ством жидкостной хроматографии умерен ного давления с использованием сили кагеля, и элюируют смесью метанола и в соотношении 1:10 (об/об), в-результате чего получают твердый матв риал. Этот твердьй материал растворяют в этилацетате (ЗА), содержащем следы этилового спирта, и добавляют избыточное количество раствора малеи новой кислоты в ЗА. Выпавший в резул тате осадок извлекают путем фильтрации и перекристаллизовывают из этанола, в результате чего получают малеат 5- 3-(2,2, 2-трифторэтил)гуани1;и но пиразол-1-ил-валерамида, с т.пл. 130°С (выход 30%). ЯМР в dgWCO:7,39(d, IH); 5,66 (d, IH) 4,03 (q, 2Н); 3,94(t, 2Н); 2,08(t, 2Н); l,6(m, 4Н). Пример 2. Проводят испытания по методике примера 1, используя 6-{3- 2-(2,2,2-трифторэтил)гуанидино пиразол-1 ил}гексанамид (16). Получают малеиновую соль с т.пл. 130-131°С ЯМР в d ДМСО: 7,75(d, IH); 6,02 (d, IH); 4,3(q, 2H),- 4,06(t, 2H); 2,03(t, 2H); l,5(m, 6H). Биологические испытания. Испытания на морских свинках осуществляют следующим образом. Правое предсердие морской свинки подве111ивают с натяжением 1 г (изометрическое натяжение) в тканевой ванне с термостатическим регулированием (30 С) емкостью 25 мл, содержащей насыщеннмй кислородом (95% 0,, 5/, СО) буфер Krebs-Henseleit (,4). Ткань стабилизируют в течение ч и в течение этого времени ее промывают 24 раза. Отдельные сокращения регистрируют посредством датчика силового смещения, с использованием измерителя деформации, мгновенные частоты . сокращения регистрируют посредством кардиотахометра. Получают значение контрольной ответной реакции на I мкмоль гистамина, после чего ткань промывают три раза и снова приводят в равновесное состояние до основного показателя частоты. После установления равновесия, длящегося 15 мин, вводят испытываемое соединение до желаемой конечной концентрации. Через 10 мин после введения соединения снова вводят гистамин (1 мкмоль) и ответную реакцию на гистамин в присутствии антагониста сравнивают с контрольной ответной реакцией на гистамин (результат выражают в процентах от контрольной реакции на гистамин). После этого стандартными методами определяют кажущуюся константу диссог циации антагониста гистамина Н-2. Испытание с аминопирином осуществляют следующим образом. Удаляют слизистую оболочку желудка из мышцы дна желудка и промывают ее в буфере t, содержащем на 1 л раствора, г: NaCl 8,077; КС1 0,201; NaHP040,I13, rai,Pq,0,204; CaCl х X 2 HgO 0,132; ,10i; глюкоза 1, с регулированием величины рН до 7,4 посредством NaOH. Ткань тонко измельчают, суспензируют в буфере 1 и промывают в нем тр)и раза. Затем ткань суспензируют в диспергирующей среде: коллагеназа (Sigma Chemical Со, тип V) 100 мг и альбумкн коровьей сыворотки (Miles Laborairories Ltd, фракция V) 100 мг в буфере 1 (100 мл); 50 мл на 10 г чистого веса ткани и термостатируют при 30С и рН 7,4 (поддерживают при непрерывном регулировании) при перемешивании в атмосфере кислорода. Через 30 мин тка ни дают возможность осесть и поверх ностный жидкостный слой удаляют. Вводят свежую порцию диспергирующей среды и продолжают термостатировани с использованием ткани, которая в большей своей части диспергируется в железы и целые клетки через 4060 мин. Оставшиеся большие кусочки ткани удаляют путем фильтрации чере нейлоновую сетку. Смесь желез и кле ток извлекают центрифугированием при 200 X g и суспензируют в буфер 1, содержащем 15 альбумина коровьей сыворотки (Miles Laboratories Ltd, фракция V), Затем железы и клетки промывают три раза буфером 1 и суспензируют в буфере 2, содержащем Eagles MEM (500 мл), апротин ,(Sigma Chemical Со, 10 мг) и HEPES (( оксиэтил)пиперазин-I-ил этансульфокислоты, 150 моль, 20 мл) при поддер жании величины рН 7,4 посредством NaOH; 150 мл на 10 г чистого веса ткани. Эту тканевую суспензию перемешивают в атмосфере кислорода при ,32°С в течение по меньшей мере 1 ч. после чего ее можно использовать. Тканевую суспензию, термостатируют вместе с испытываемым соединением и аминопирином (10 мкмоль), меченым С в диметиламиновой группе (0,1 мкКи/мл) в течение 20 мин. Затем поглощение аминопирина стимулируют путем добавления гистамина и ин гибитора фосфодиэстеразы (IC1 63197 Bio chem.Soc. Special Publucation, 1973, стр. 127-133) до конечных концентраций 10 и 5x10 моль соответственно. Через 18 мин клетки/железы извлекают из термостатированной среды путем фильтрации суспензии через стеклянный микрофибрильный фильтр. Клетки/железы быстро (в течение менее чем 10 с) промывают три раза охлажденным льдом буфером 1. Аминопирин,меченый С/ , удерживаемый тканью, измеряют с помощью сцинтилляционного счетчика, степень инги бирования поглощения испытываемым соединением рассчитывают путем сопро тивления с контрольным образцом. Затем с помощью графиков, полученных в ряде испытаний, проводимых при раз личных концентрациях, рассчитывают концентрацию испытываемого соединения, дающую ингибирование на 50%. Соединения испытывают либо в экспериментах с предсердием морских свинок, либо в экспериментах с аминопирином. Все соединения, подвергнутые испытанию в экспериментах с предсердием морских свинок, являются активными при концентрации в тканевой ванне 10 мкмоль или ниже этой концентрации и более активные соединения показывают полное ингибирование ответной реакции при этой концентрации. Все соединения, подвергнутые испытанию в экспериментах с аминопирином, показывают 50%-ное ингибирование поглощения аминопирина при концентрации 3 мкмоль или менее. Ингибирование секреции кислоты желудочного сока может быть продемонстрировано стандартными испытаниями, например, но способоности соединения предлагаемой формулы при вводе его путем внутривенной инъекции, че- , рез желудок или через рот ингибировать секрецию кислотного желудочного сока, например, у крыс или.у собак, у которых имеется желудочный свищ или денервированные углубления дна желудка и у которых секреция желудочного сока, стимулируется путем ввода секретогенного агента, например гистамина, пентагастрина, бетанехола или пищи. Испытание на крысах проводят следующим образом. Самок крыс (весом 200-230 г) анестезируют путем внутримьш1ечного уретана (1,5 г/кг) и в трахею вводят полную хирургическую иглу. Гибкую трубку пропуркают через пищевод в желудок и укрепляют ее путем стягивания ; в области шеи. Многодырочную пластмассовую трубку (диаметром 3 мм) пропускают в полостную зону желудка через надрез и в двенадцатиперстной кишке закрепляют, привязывая ее посредством хирургической нити к привратнику желудка. Солевой раствор (9 г/лНаС1) пропускают через желудок (посредством вставленной в пищевод полой иглы со скоростью 7 мл/мин, извлекают его из пилорического отвода через каждые 10 мин и собирают в химических стаканах. Секреция кислоты стимулируется путем подкожного ввода специфиеского антагониста Н-2 димаприта, водимого дозой 10 мг/кг, с последующим вливанием 30 мг/кг/ч. Вьщеление ислоты рассчитывают путем титроваия 20 ммоль гидрата окиси натрия 512 10 мин образцов до конечного значения рН 6,4 (выделяемых в течение 10 мин). Когда секреция достигает постоянного значения (плато на кривой, три последовательных показания с расхождением в пределах 5%), испытываемое соединение вводят путем внутривенной инъекции через полую иглу, введенную в левую наружную яремную вену. Затем измеряют секрецию в течение последующих 2 ч. Приготавливают основной раствор каждого испытываемого соединения (10 мг/мл в диметилсульфоксиде) и , разбавляют соответствующим образом соленым раствором так, чтобы обеспечивалась возможность ввода в организм дозы 1 мг/кг (диметилсульфоксид 2%). Испытание на собаках с хроническим свищем осуществляют следующим образом. Испытания проводят на самках собак чистой бельгийской породы весом 9-12 кг, имеющих хронический желудочный свищ. В течение ночи их не кормят, при желании дают воду. В ходе эксперимента собаки слегка сдержанны в стоячем положении. При вводе испытываемого соединения путем внутривенной инъекции свищ открывается и посше полного убеждения в том, что базапьная секреция не происходит в течение 30 мин, начинают осуществлять непрерывное внутривенное вливание секретогенного агента (гистамина, 0,5 мкмоль/ /кг/ч). Пробы желудочной кислоты соби рают каждые 15 мин. Измеряют объем каждой пробы. 1 мл аликвотнуто пробу титру)Т до нейтральной 100 ммоль NaOH с целью определения концентрации кис лоты. Когда достигается постоянная секреция (плато кривой,1-2 ч) путем внутривенной инъекции вводят испытываемое соединение в солевом растворе, пробы кислоты желудочного сока робира ют в течение дальнейших 2-3 ч, в ходе чего непрерывно продолжается вливание секретогениого агента. При исследовании испытываемого соединения путем внутрижелудочного BBOда. после полной убежденности 1з отсутствии базальной секреции в течение 30 мин испытываемое соединение, содер жащееся в 25 МП 0,5%-ной (вес/об.) оксипропилметилцеллкшозы и 0,1%-ного (вес./об.) Твина 80 в воде ЧТвин тор говая марка), вливается по каплям в желудок через дозирующую трубку. 786 вставленную в свищ. Через 1 ч свищ снова открывается и сразу же начинает вливание секретогенного агента аналогично описанному выше. Пробы кислоты желудочного сока измеряют аналогично описанному и приближение секреции кислоты к постоянному значению сравнивают с приближением сек рации кислоты к постоянному значению для контрольного животного, в организм которого не вводят испытуемое соединение. При изучении испытываемого соединения, вводимого чефез рот, оно используется в форме желатиновых капсул вместе с 15 мл воды. Через 1 ч после ввода свищ открывается и сразу же начинается внутривенное вливание секретогенного агента. Пробы желудочной кислоты измеряют аналогично описанному и приближение секреции кислоты к постоянному значению (к плато кривой) сравнивают с приближением секреции для контрольного животного, в которое не вводят испытываемое соединение. Испытание на собаках с денервироBa HHi.iM углублением дна желудка осу- ществляют следуюг.гим образом. Испытания проводят на самцах собак коротконогой гончей весом 14-22 кг. Денервированные углубления в области железы дна желудка у этих собак получаются при подготовке их к испытаниям способом Rudick и др. В течение 4-6 недель животным дают возможность оправиться от операции и затем еще в течение 2-3 мес до обычного использования, чтобы позволить им привыкнуть к процедуре испытаний и секреторным реакциям. Собак не кормят в течение 23 ч перед экспериментом (но они имеют свободный доступ к воде) и в процессе эксперимента они слегка поддерживаются тканевой повязкой. После промывки углубления теплой водой путем подкожной инъекции вливают гистамин со скоростью 10 мкг/мин. Такая доза приводит к менее чем максимальному (60-90% от максимального) увеличению выделения кислоты при всех используемых собаках. Выделения желудочного сока из углубления собирают через казкдые 15 мин в градуированные стеклянные пробирки и измеряют объем секреторных вьщелений, прибли- , жающийся к 0,1 мл. Пробу в количестве 500 мкл разбавляют 5 мл .солевого раствора и величину рН доводУ1т до 7,0 посредством 100 ммоль NaOH. Общее вьщеление кислоты рассчитывают как произведение концентрации кислоты на объем выделенногб желудочного сока. Испытываемые соединения вводят внутривенно (0,1 мл/кг) через лучевую подкожную вену или через рот в виде желатиновой капсулы после достижения постоянной секреции (расхождение в трех последовательных показаниях в . пределах 10%). Секрецию измеряют в течение 3 ч после ввода испытываемого соединения.

Результаты, полученные при испытании на предсердии и с использованием аминопирина, позволяют предска

зать активность данных соединений для испытываемых крыс и собак.

Результаты биологических испытаний.

Соединения испытывают аналогично описанному методу для аминопирина по сравнению с 2-гуанидин-4- 2-(2-циaн3-мeтилгyaш дин)-зтилтиoмeтил тиaзoлoм (соединение А), аналогом по структуре. Соединение А дает 50%-ное подавление действия гистамина Н-2 при концентрации 0,057 мкмоль. Соединения 1 а и 16 дают подавление при 0,0036 и 0,0087 мкмоль соответстве ннр, что на порядок меньше, чем сравнительное соединение и свидетельствует о более высокой актив кости данных соединений как антагони стов гистамина .

Способ получения гуанидиновых производнъ1х формулы о CF3CH2-NH, N-( (I) где п 4 или 5, или их солей с малеиновой кислотой, отличающийся тем, что осуществляют взаимодействие aN MHaKa X кислотой формулы CF CH -TSIH .0 г-м -1 (СН.гЪ- (IT) /L.-iN - -Naj V им. где п 4 или 5, о I с последуюид м выделением делевого IQ продукта в свободном виде или в виде СО соли с малеиновой кислотой.