Способ определения содержания алифатических альдегидов в растворе Советский патент 1989 года по МПК C12Q1/66 

1

Изобретение относится к способам определения количества алифатических альдегидов в растворе и может быть применено в аналитической химии, биохимии, медицине и Сельском хозяйстве

Цель изобретения - повьшение чувствительности способа.

Изобретение заключается в том, что берут культуру люминесцирз ющнх бактерий PhotobacteriTim fischeri или Beneckea harveyi с содержанием клеток 10 в 1 мл водного раствора хлористого натрия 0,3-0,5 мас.%, об- рабатьшают клетки 5-70 10 мас.% нитрозогуанидина в течение 10- 30 мин; рассеивают бактерии на чашки

Петри с твердой средой состава, пептон 1-1,5; агар 1,8-2; мя- сопептонный бульон 5-6; морская вода 3,6-3,8 на 1 л воды, после чего отбирают отдельные тусклые колонии, которые отвечают светоизлучением на добавку 0 -10 % тетрадеканаля и высеивают колонии на жидкую питательную среду состава, мас.%: натрий фосфорнокислый двузамещенный 0,5- 0,7; калий фосфорнокисльш однозаме- щенньй 0,2-0,3; аммоний фосфорнокислый двузамещеиный 0,04-0,06; магний сернокислый 0,009-0,011; пептон 1,0, дрожжевой экстракт 0,2, хлористьш нат-рий 0,3, остальное вода; культивируют при 18-25°С в течение 8-16 ч.

4: 1C

сл

о

()

затем осаждают бактерии центрифугированием, отделяют,клетки и вносят их в водный раствор, содержащий-, масД: хлористый, натрий 0,3-0,5; глицерин 0,03-0,05; тритон Х-100 инкубируют суспензию клеток при перемешивании при 20 -23°С в течение 3-4 ч; разводят суспензию клеток водным.раствором хлористого натрия О,15-0,35 масо% до оптической плотности 0,1-1,0; переносят 0,25-1,0 мл суспензии клеток в кювету люминомет- paj добавляют 0,01-0,05 мл исследуемого раствора и измеряют уровень биолюминесценции в течение 5 с, по которому судят о содержании алифатических альдегидов в растворе.

Предлагаемый способ имеет предел чувствительности определения алЬде- гидов в 1000-10000 раз вьппе известного (2,1 «Ю -Ю мас.%), с диапазоном измерения количества альдегида в пределах 8 порядков.

Материалы, представленные в таб- лице, иллюстрируют достижение цели.

Из таблицы видно, что чувствительность предлагаемого способа в 1000- 10000 раз выше, спектр определения алифатических альдегидов шире и чис- ло используемых мутантов больше.

Пример 1. Берут культуру люминесцирующих бактерий Р. fischeri с содержанием клеток 10 в 1 мл в 0,3,маСо% хлористого натрия; инкубируют 30 мин с 5 .% нитрозо- гуанидином; рассеивают на чашки Петри -со ..средой состава мас.%: пептон 1; агар 2; мясопептонный бульон 6;-морская вода 37,5; остальное во- да.; через 2 суток отбирают отдельные колонии несветящихся клеток, которые отвечают светоизлучением на добавку тетрадеканаля; переносят полученные клетки..в жидкую питательную среду состава, мас.%: натрий фосфор- нокисльш двузамещенный 0,7; калий фосфорнокисльш однозамещенный 0,2; аммоний фосфорнокислый двузамещец- ньй 0,05; магний сернокислый 0,01; пептон 1,0; дрожжевой экстракт 0,2; хлористый натрий 0,3, остальное вода культивирзпот при 18° С в течение 16 ч; сепарируют клетки; инкубируют суспензию клеток при перемешивании при 23°С в течение 3 ч в водном рас творе, содержащем, мас.%: хлорис- тьй Натрий 0,3; глицерин 0,03; Тритон Х-100 10 ; разводят суспензию

0

Q

5

0

5

клеток в 0,35%-ном водном растворе хлористого натрия до оптической плотности 1,0 при 540 нм; переносят 1,0 мл суспензии клеток в кювету люминометра; добавляют 0,01 мл раствора (Е)- 1-гексадеценаля и измеряют уровень биолюминесценции в течение 5 с. Получают нижний предел определения гексадеценаля, равньй .%.

Пример 2. Берут культуру люминесцирующих бактерий Р. harveyi с содержанием клеток 10 в 1 мл в водном растворе 0,3 мас.% хлористого натрия; инкубируют с 10,10 мас.% нитрозогуанидина в течение 20 мин; далее рассеивают на чапгки Петри, отбирают колонии альдегидзависимых клеток, культивируют 8 ч, сепарируют бактерии, как указано в примере 1; инкубируют клетки в водном растворе, содержащем, мае,7,,: хлорис- тьй натрий 0,4; глицерин 0,04; Тритон Х-100 в течение 3 ч при 23°С; доводят клетки водным раствором 0,3 мас.% хлористого натрия до оптической плотности 0,3 при 540 нм, переносят 0,5 мл суспензии клеток в кювету люминометра, добавляют 0,02 мл раствора с различным содержанием деканаля и измеряют уровень биолюминесценции в течение 5 ч. Из таблицы видно, что предел чувствительности способа на деканаль составляет 1 10 мас.%, диапазон измерения содержания альдегида до 1 .-10 мас.%, т.е. 8 порядков изменения содержания альдегида.

Пример 3. Берут культуру люминесцирующих бактерий В. harveyi с содержанием клеток 10 в 1 мл в водном растворе 0,5 мас.% хлористого натрия, инкубируют с .% нитрозоуганидина в течение . 1 О мин; далее рассеивают на чашки Петри, отбирают альдегидзависимые клетки, культивируют 8ч, сепарируют клетки, как указано в приме- . ре 1; инкубируют в водном растворе, содержащем, мае. %: хлористый натрий 0,4; глицерин 0,05; Тритон Х-100 10 в течение 4 ч при 10°С; доводят клетки водным раствором 0,15 мас.% хлористого натрия до оптической плотности 0,1 при 540 нм, переносят 0,25 мл суспензии клеток в кювету люминофора, добавляют 0,05 мл водйого раствора с различньм содержанием те традеканаля и измеряют уровень биолюминесценции в течение 5. ч. Как видно из таблицы, нижний предел чувствительности способа составляет мас.% тетрадеканаля.

Пример 4, Все операции проводят аналогично примеру , но клетки мутантов Р. fisclieri инкубируют в водном растворе,.содержащем, мас.% хлористый натрий 0,2; глицерин 0,02j Тритон Х-100-10 в течение 2 ч при 19°С, все остальные компоненты и процедуры неизменны. Получают нижний предел определения (Е)-11-гексадеце- наля, равный , т.е. низкую чувствительность.

Пример 5, Все операции проводят аналогично примеру 1, но клетки мутантов Б. harveyi инкубируют в водном растворе, содержащем, мас.% хлористьй натрий 0,6; глицерин 0,06; Тритон Х-100 10 в течение 5 ч при 24 С, Получают нижний предел определения тетрадеканаля, равный , т.е. низкую чувствительность.

Предлагаемый способ по сравнению с известным повьшает чувствительность определения содержания алифатических альдегидов в растворе. Формула изобретения

Способ определения содержания алифатических альдегидов в растворе, включающий инкубацию люминесцирующих бактерий Photobacteriinn fischeri и

0

5

0

5

0

5

Beneckea harveyi в течение 10-30 мин на среде, содержащей нитрозогуани- дин, хлористый натрий, пересев бактерий на твердую среду, содержащую пептон, агар-агар, мясопептонньш бульон, морскую воду, отбор отдельных тусклых колоний, отвечающих све- тоизлучением на добавку тетрадекана- ля, пересев на жидкую среду, содержащую натрий фосфорнокисльй двузаме- щенный, калий фосфорнокисльй одно- замещенный, аммоний фосфорно$;исльй двузамещенный, магний сернокисльм, пептон, дрожжевой экстракт, хлористьй натрий и культивирование при 18 - 25°С в течение 8 - 16 ч, полученную суспензию клеток разводят водным раствором хлористого натрия в концентрации 0,15 - 0,35 мас.% до оптической плотности 0,1 - , переносят 0,25 - 1,0 мл суспензии клеток в кювету люминометра, добавлшот 0,01 - 0,05 мл исследуемого раствора и оценку результатов проводят по уровню биолюминесценции, отличающийся тем, что, с целью. повьшения чувствительности способа, отбор тусклых колоний ведут при концентрации тетрадеканаля 10 10 мас.%, а после культивирования клеток проводят их истога;ение в водном растворе, содержащем, мас.%: Хлористьй натрий 0,3-0,5 Тритон Х-100 Ю- -Ю Глицерин0,03-0,05

в течение 3-4 ч при 20-23°С.

Изобретение относится к способам определения содержания алифатических альдегидов в растворах и может быть применено в сельском хозяйстве, медицине, аналитической химии, биохимии. Целью изобретения является повышение чувствительности способа определения содержания алифатических альдегидов в растворе. Способ заключается в том, что клетки альдегидзависимых мутантов люминесцирующих бактерий PHOTOBACTERIUM FISCHERI или BENECKEA HARVEYI инкубируют в водном растворе хлористого натрия с глицерином и Тритоном Х-100, затем добавляют раствор алифатических альдегидов и регистрируют интенсивность биолюминесценции смеси, по которой судят о содержании альдегидов. Чувствительность предлагаемого способа составляет 1:10^-13 - 1:10^-5 мас.% алифатических альдегидов. 1 табл.

Известный

Предлагаемый .1

Тетраде- Р. mandapaканаль

mensis