Способ получения биокатализатора для определения концентрации глюкозы Советский патент 1990 года по МПК C12Q1/00 

(46) 30.04.90. Бюл. № 16

(21)4071823/28-14

(22)19.05.86

(71)Институт катализа СО АН СССР

(72)Г,А.Коваленко( В.Д.Соколовский и Л.Н.Рачковская

(53) 612.015 (088.8) (56) Прикладная биохимия и микробиология, 1986, т.22, 5, с. 675- 678.

(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ БИОКАТАЛИЗАТОРА ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ КОНЦЕНТРАЦИИ ГЛЮКОЗЫ

(57) Изобретение относится к биохимии. Цель изобретения - увеличение стабильности биокатализатора. Сорбент заливают буферным раствором фермента. Через 2 сут. препарат отмывают буферным раствором. Глюкоэооксидаза, адсорбированная на среднеэауглеро- женной 9-окиси алюминия, дезактивируется через 1,5-2 мес. 1 ил.

1

Изобретение относится к способам получения высокостабильных биокатали- заторов на основе иммобилизованных ферментов для использования их в аналитических системах для определения концентрации различных соединений, в частности глюкозы, и может быть применено в клинической биохимической практике, микробиологическом производстве и пищевой промышленности.

Цель изобретения - увеличение стабильности биокатализатора на основе иммобилизованной глюкозоокси- дазы. Это достигается за счет использования в качестве адсорбента для глюкоэооксидазы средне зауглерожен- ной 8 -окиси алюминия с углеродным покрытием 2,8-12,8 мас.%

На графике приведена зависимость величины адсорбции глюкозооксидазы от начальной концентрации фермента в растворе.

Пример 1. Адсорбционная иммобилизация глюкозооксидазы на б-окиси алюминия.

Адсорбцию глюкозооксидазы из гриба Aspergillus niger на 9 -окиси алюминия (уд « 84 м2/г) проводят в статических условиях при С: 50 мг сорбента заливают 4 мл буферного раствора фермента (0,05 М фосфатный буфер рН 6,0) с начальной концентрацией 70-1200 мкг/мл н выдерживают 2 сут., периодически помешивая сорбент и раствор фермента. По вчду зависимости величины адсорбции от начальной концентрации белка в растворе (см. график) можно заключить, ITO адсорбция глюкозооксидазы на среднезауглероженной 9-окиси алюминия - полимолекулярная.

Полученный препарат отмывают ст несвязанного белка 3-4 кратныь промыванием буферным раствором рН 6,С При выдерживании отмытого бнокатапч

«

31475

затора а буфере рН 6,0 и растворе субстрата десорбировавшегося с носителя фермента не обнаруживается, адсорбция прочная,

Глюкозооксидаза, адсорбированная на среднезауглероженной б -окиси алюминия, дезактивируется через 2 мес. хранения при 22-24°С.

П р и м е 2. Адсорбционная иммобилизация глюкозооксидазы на зауглероженной 0 -окиси алюминия.

Аналогичен примеру 1t только в качестве адсорбента используется & -окись алюминия с величиной углеро дного по- крытия 0.5 мас.% (Вил 77 м2/г),

QU

Величина адсорбции зависит от начальной концентрации фермента в растворе (см. график), Адсорбция в изученных условиях прочная,

а, т /j

50

200 Ш Ш № WOQ t№ С Нкг/нл

Составитель Л.Сабурова

Редактор Л.Пашкова

Техред А.Кравчук

Заказ 1 695Тираж 487Подписное

ВНИИПИ Государсгвенного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж-35„ Раушская наб., д. 4/5

Иммобилизованная на таком носителе глюкозооксидаза дезактивируется за 2 мес. хранения в буферном растворе рН 6,0 при 22-24°С.

Формула изобретения,

Способ получения биокаталнэ атора дйя определения концентрации- глюкозы путем иммобилизации глюкозооксидазы на сорбенте с Последующим удалением несвязанного фермента, отличающийся тем, что, с целью увеличения стабильности биокатализа-, тора, в качестве сорбента используют зауглероженную 8-окись алюминия с величиной углеродного покрытия 2,8- 12,8 мас.%.

Ш,%г

.С

-

i

;

.%€

O.S7.C 0%С

У

Корректор С.Шекмар