Способ получения альфа-липопротеина из плаценты человека Советский патент 1989 года по МПК A61K35/78 

Изобретение относится к области биохимии, а также к фармакологии и дерматологии и касается способов получения веществ, влияющих на синтез меланинового пигмента кожи, и используемых для лечения витилиго.

Цель изобретения - повышение качества целевого продукта за счет его способности стимулировать синтез ме- лонинового пигмента кожи.

П р и м е р 1. 1 кг долек плаценты замораживают ,и выдерживают в течение 7-10 сут, затем измельчают в дисковой мельнице, обрабатывают 95%- ным этиловым спиртом при соотношении ткани плаценты и этилового спирта 1:1 (масса/объем), фильтруют через плотную марлю и выдерживают фильтрат

в течение 24 ч при комнатной температуре, при этом выпадает осадок. Пигментационную активность надосадоч- ной жидкости определяют на коже сое- ков морских свинок (активность сохра- няется в течение 20-50 сут).

Отбирают 200 мл надосадочной жидкости и смешивают с 10 мл насыщенного раствора бензойной кислоты в 95%- ном этиловом спирте, раствор перемешивают в течение 20 мин, осадок отделяют фильтрованием, промывают насыщенным водным раствором бензойной кислоты, . 3 раза ацетоном. Осадок высушивают в вакууме при комнатной температуре, перерастворяют в 95%-ном этиловом спирте, фильтруют через се- фадекс-30, используя 5-10 М фосфат4ъ |

СЛ

Јь

sj

О

О

ный буфер при рН 4,0. Получают 2 белковые фракции. Альфа-липопротеин, обладающий свойством стимулировать синтез меланинового пигмента кожи, содержится во второй белковой фракции. ,Для практического применения продукт лиофильно высушивают, перерастворяют в этиловом спирте и втирают в поврежденные участки кожи. Выход целевого продукта составляет 0,5 г/кг ткани плаценты.

Пример 2. Выделение альфа- липопротеина из долек плаценты осущег- йтвляют как описано в примере 1, за исключением того, что осадок промывают ацетоном 10 раз, используют се- рафекс-100 и M фосфатный буфер при рН 8,0. Выход целевого продукта О,1 г/кг ткани плаценты.

Клинические испытания препарата проведены на 200 пациентов мужского и женского пола в условиях стационара. У всех пациентов были характерны проявления витилиго и они ранее не лечились по поводу витилиго. При втирании спиртового раствора препарата в депигментированные участки полная репигментация достигнута у 63 пациентов (31,5%), частичная репигментация имела место у 105 пациентов (52,5%), у 5 пациентов (2,5%) эффект отсутствовал и 27 пациентов от лечения отказались (13,5%).

При лечении препаратом отсутствовали локальные или системные вторич

0

5

0

5

0

5

ные реакции Рецидивов после лечения не было. Проводили биопсию базальной мембраны для доказательства того, что предлагаемый препарат способствует синтезу меланинового пигмента кожи.

Формула изобретения

Способ получения альфа-липопроте- ина из плаценты человека путем эк- - стракции из сырья и выделения целевого продукта, отличающий- с я тем, что, с целью повышения качества целевого продукта за счет его способности стимулировать синтез меланинового пигмента кожи, экстракцию проводят, растирая дольки плаценты в присутствии 95%-ного этилового спирта, взятых в соотношении 1:1 (масса/ /объем), затем жидкую часть отделяют фильтрацией через марлю, выдерживают до выпадения осадка, надосадочную жидкость смешивают с насыщенным раствором бензойной кислоты в 95%-ном этиловом спирте в соотношении 20:1, отделяют осадок фильтрованием, осадок промывают насыщенным водным раствором бензойной кислоты, 3-10 раз ацетоном, сушат в вакууме при комнатной температуре, перерастворяют в 95%-ном этиловом спирте и фильтруют через сефадекс-30 или сефадекс-100, используя фосфатный буфер, при этом получают раствор, содержащий целевой продукт альфа-липопротеин с мол.м. 1500- 4000 дальтон.

Изобретение относится к биохимии и позволяет повысить качество целевого продукта. Дольки плаценты замораживают, растирают, обрабатывают этиловым спиртом, затем фильтруют. После выпадения осадка надосадочную жидкость смешивают с насыщенным раствором бензойной кислоты в 95% этиловом спирте. Отделяют осадок фильтрованием и промывают насыщенным водным раствором бензойной кислоты и ацетоном. Осадок высушивают в вакууме, растворяют в 95%этиловом спирте, фильтруют через сефадекс. Целевой продукт высушивают, перерастворяют этиловом спирте и втирают в поврежденные участки кожи. При лечении препаратом отсутствуют локальные и системные вторичные реакции.