Способ выделения иерсиний Советский патент 1989 года по МПК C12Q1/04 

Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано при диагностике желудочно-кишечных заболеваний.

Цель изобретения - ускорение способа.

Способ иллюстрируется следующими примерами.

Пример 1. Исследуемый материал (испражнения, кровь, слизь из зева, влагалища) забирают за 2 ч до исследования в стерильные пробирки с 5 мл концентрированной фосфат- но-солевой средой накопления, приготовленной из расчета 300 мл 6,7 М раствора калия Фосфорно-кислого дву- замещенного и 700 мл 6,7 М раствора калия фосфорно-кислого однозамещенно-

го, с добавлением 0,04 г/л буфера магния серно-кислого и 5 г/л буйера натрия хлористого, рН среды 7,4. „ Посев подращивают при 4°С в течение 18 ч. Затем осуществляют однократный пересев на элективную питательную среду, содержащую г/л: сухая среда Эндо 40, сахароза 4,5, мочевина 0,4, калий углекислый 0,8, калий метабисульфат 0,8, желчь сухая 1,0, аммоний молибденово-кислый 0,8, конго красный 0,07, генциан- виолет 0,014, вода дистиллированная до 1 л, рН среды 7,2.

Перед посевом среду подсушивают. Посев инкубируют 18 ч при 37°С, после чего отбирают для дальнейшего ис00

ю

следования с темно-красным центром и светлой периферией.

Пример 2. Способ осуществляют в соответствии с примером 1, но в накопительной среде магний сернокислый и натрий хлористый исполь- эуют в количестве 0,045 и 5,5 г/л буфера соответственно, рН среды 7,5. Подращивание ведут при 8°С в течение 24 ч.

Для приготовления основной среды компоненты используют в следующих соотношениях, г/л: сухая среда Эндо 45, сахароза 4,7, мочевина 0,45, ка- лий углекислый 0,9, калия метабисуль- фит 0,9, желчь сухая 1,1, аммоний молибденово-кислый 0,9, конго красный 0,075, генцианвиолет 0,015, вода дистиллированная до 1 л. После инку- бирования в течение 24 ч отбирают колонии иерсиний для дальнейшего исследования.

Пример 3. Способ осуществляют в соответствии с примером 1, но в накопительной среде добавки солей натрия хлористого и магния сернокислого берут в концентрации 6,0 и 0,05 г/л буфера соответственно, рН среды 7,6.

Пересев осуществляют на элективную среду, содержащую компоненты в следующем соотношении, г/л: сухая среда Эндо 50, сахароза 5,0, мочевина 0,5, калий углекислый 1,0, ка- лия метабисульфит 1,0, желчь сухая 1,2 аммоний молибденово-кислый 1,0, конго красный 0,08, генцианвиолет 0,016, вода дистиллированная до 1 л. Через 24 ч инкубации отмечается рост колоний пирамидальной формы размером 2-3 мм со светлой периферией и темно-красным центром.

Результаты исследований показывают, что предлагаемый способ по сравнению с известным в более короткий срок позволяет выявлять иерсиний из исследуемого материала при сохранении высокой чувствительности.

Формула изобретения

Способ выделения иерсиний путем подращивания исследуемой культуры в фосфатно-буферном реакторе на холоду с последующим пересевом на плотную питательную среду, инкубированием посевов и отбором выросших колоний, отличающийся тем, что, с целью ускорения способа, подращивание осуществляют в фосфатно-буферном солевом растворе, содержащем 300 мл 6,7 М раствора калия фосфорыо-кислого двузамещенного и 700 мл 6,7 М раствора калия фосфорно-кислого одноза- мещенного, 5-6 г/л буфера натрия хлористого и 0,04-0,05 г/л буфера магния серно-кислого, пересев осуществляют однократно на среду, содержащую г/л:

Сухая среда Эндо

Сахароза

Мочевина

Калий углекислый

Калия метабисульфит

Желчь сухая

Аммоний молибдено- вокислый

Конго красный

Генцианвиолет

Вода дистиллированная

после инкубирования отбирают колоии с темно-красным центром и светлой ериферией.

40-50 4,5-5,0 0,4-0,5 0,8-1,0 0,8-1,0 1,0-1,2

0,8-1,0

0,07-0,08

0,014-0,016

До 1 л

Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано при диагностике желудочно-кишечных заболеваний. Цель изобретения - ускорение способа. Исследуемый материал засевают в накопительную среду, содержащую 300 мл 6,7 М раствора калия фосфорнокислого двузамещенного, 700 мл 6,7 М раствора калия фосфорнокислого однозамещенного, 5-6 г/л буфера натрия хлористого и 0,04-0,05 г/л буфера магния сернокислого, PH 7,4-7,6. Подращивание осуществляют при 4-8°с в течение 18-24 ч. Затем культуру однократно пересевают на элективную среду, содержащую, г/л: сухая среда эндо 40-50

сахароза 4,5-5

мочевина 0,4-0,5

калий углекислый 0,8-1

калий метабисульфит 0,8-1

желчь сухая 1-1,2

аммоний молибденовокислый 0,8-1

конго красный 0,07-0,08

генцианвиолет 0,014-0,016

вода дистиллированная до 1 л. После 18-24 ч инкубации при 37°с отбирают колонии с темно-красным центром и светлой периферией.